Кокки палочка в мазке: Кокки в мазке — причины, симптомы, лечение

Содержание

причины, симптомы, диагностика, лечение в НКЦ ОАО «РЖД», с филиалом ЦКБ № 1

Вагинит или кольпит — это воспаление влагалища, обычно вызываемое инфекцией. В норме во влагалище выявляется огромное количество разнообразных микроорганизмов. Подавляющее большинство из них (более 95%) – это лактобактерии. Они продуцируют молочную кислоту, что обуславливает кислую среду во влагалище, на фоне которой тормозится рост и развитие других бактерий. Даже в норме во влагалищном мазке можно увидеть уреаплазму и микроплазму, дрожжевые грибки типа кандида, кокки и палочки. Однако их концентрация крайне мала и не вызывает воспалительного ответа со стороны организма. 

При различных неблагоприятных условиях (снижение иммунитета, частая смена половых партнеров и пр), когда резко снижается количество «хороших» лактобактерий и возрастает число кокковой или бациллярной флоры, развивается воспаление – вагинит. Также вагинальные инфекции могут передаваться половым путем, хотя большинство из них не являются результатом венерических заболеваний. Спросите врача, нужно ли лечение вашему половому партнеру.

Большинство вагинальных инфекций излечимо, однако те из них, что относятся к инфекциям, передающимися половым путем, могут оказаться более серьезными и опасными, в том числе за счет последствий. Известны случаи, когда инфекция протекает без симптомов.

Причины: 

Наиболее распространенные причины вагинита — трихомоноз, дрожжевые инфекции (кандиды), хламидиоз. Также бывает дисбактериоз во влагалище, который приводит к так называемому бактериальному вагинозу. 

Симптомы:

  • Необычные выделения из влагалища, нередко обильные.
  • Зуд и раздражение влагалища.
  • Покраснение наружных половых органов и стенок влагалища
  • Боль во время полового акта.
  • Неприятный запах из влагалища.
  • Боль в нижней части живота.

Диагностика:

Во время гинекологического осмотра забирается мазок на флору, позволяющий определить наличие воспаления, исключить или подтвердить гонорею, трихомониаз, кандидоз.

Анализ выделений методом ПЦР выявляет хламидии, вирусные инфекции. 

Лечение: 

Лечение по поводу уреаплазмы или микоплазмы назначается только, если по данным посева выявлен рост этих микроорганизмов в количестве более 10 в 5-й степени. Бакпосев из влагалища с определением чувствительности к антибиотикам позволяет не только определить специфический возбудитель, но и подобрать правильный антибиотик, который воздействует именно на него. На фоне приема антибиотиков всегда назначается профилактика грибковых инфекций. При кольпитах проводится как системная, так и местная терапия. Вторым этапом восстанавливается нормальная флора посредством приема препаратов с лактобактериями.

Лечение проводится строго под наблюдением врача.

Авторы Алекперова А.Ф., Касян В.Н. 

Для записи на прием обращайтесь по телефону: 

(495) 925-02-02 (круглосуточно)

Бактериоскопические исследования – SYNLAB Eesti

Интерпретация результатов бактериоскопии

Прямая микроскопия нативного материала является частью клинического исследования пациента, цель которого – определить морфологию микроорганизмов и наличие воспалительной реакции со стороны организма.

Показания: Прямая микроскопия нативного материала дает информацию о общем состоянии генитального тракта, позволяет оценить наличие и интенсивность воспалительной реакции, зрительно оценить клетки слизистой оболочки и имеющиеся микробы. При известных инфекциях прямая микроскопия имеет диагностическую ценность (гонорея у мужчин, трихомоноз).

Исследуемый материал: Соскоб из цервикального канала, влагалища, уретры (на предметное стекло)

Метод анализа: Микроскопия

Соответственно международным стандартам у каждого пациента необходимо смотреть два препарата, окрашивая их по методу Грама и Лейшману-Гимза.

Методика окраски по Лейшману-Гимза является основной методикой для определения инфекции Trichomonas и внутриклеточных микроорганизмов, также эта методика очень информативна для исследования клеточных элементов; позволяет оценить отличия эпителия генитального тракта (вагинальный, эндоцервикальный, слизистая оболочка уретры).

На основе методики окраски по Граму микробы подразделяются на Грам-положительные и Грам-отрицательные. В диагностике бактериального вагиноза это основной метод окраски, поскольку он позволяет определить критерии Nugent.

Интерпретация результата:

ЭПИТЕЛИАЛЬНЫЕ КЛЕТКИ

  • Суперфициальные. Максимального своего числа (96%) достигают во время овуляции. К 27-28 дню цикла их число падает до 4%.  
  • Интермедиарные. Составляют большую часть клеток в первые (74-76%) и последние (96%) дни цикла. Минимальное их количество во время овуляции (3,5%).
  • Парабазальные. У женщин репродуктивного возраста имеются в препарате только во время менструации. Также их часто можно обнаружить при низком уровне эстрогенов.
  • Базальные. В препарате здоровых женщин не определяются. Обнаружение базальных клеток указывает на наличие воспалительного процесса слизистой или травматического повреждения.
    При воспалении также имеется множество лейкоцитов. NB! Парабазальные и базальные клетки также являются отличительным признаком атрофического вагинита.
  • Спонтанно отслоившиеся клетки эндометрия. У женщин репродуктивного возраста их можно обнаружить первые 12 дней после менструации. Обнаружение клеток эндометрия во второй фазе цикла свидетельствует о наличии эндометрита, полипа эндометрия или связано с использованием внутриматочного контрацептивного средства.

 

ЛЕЙКОЦИТЫ

  • Нейтрофилы. Клетки острой фазы. В препарате можно обнаружить следующие патологические формы:
    • гиперсегментированные: число ядерных сегментов 6 и более, величина клеток может превышать 15 μm. Возникают при мегалобластной и пернициозной анемии, хронической инфекции и применении химиотерапии. 
    • гипосегментированные: число ядерных сегментов 3 и меньше. Возникают при некоторых инфекциях и на фоне применения химиотерапии (особенно препаратов группы сульфонамидов).
  • Моноциты или мононуклеарные фагоциты. Отвечают за хроническую фазу воспаления.
  • Эритроциты. У некоторых женщин определяются в период овуляции и перед мен- струацией.

 

СООТНОШЕНИЕ ПОЛИМОРФОНУКЛЕАРНЫХ ЛЕЙКОЦИТОВ ПМН И ЭПИТЕЛИАЛЬНЫХ КЛЕТОК

  • У здоровых женщин это соотношение менее, чем 1:1.
  • Пропорции клеток 2:1 и 3:1 и более, являются маркером острого воспаления.  

 

МИКРООРГАНИЗМЫ

Нормальная микробиота у мужчин

Уретра Семенная жидкость

Доминирует грамм-положительная микрофлора. Самое богатое микроорганизмами место это дистальная часть уретры и самая бедная – спонгиозная часть.

Наиболее частые изоляты:

  • Альфа-гемолитические стрептококки группы: Streptococcus salivarius, S. sanguis, S. intermedius и др.
  • Коагулазонегативные: Staphylococcus haemolyticus, S. auricularis, S. hominis, S. epidermidis 
  • Enterococcus spp., Corynebacteria

Реже и в небольшом количестве встречаются S.aureus, S. pyogenes, стрептококки B группы, Enerobacter spp. и микрококки

Нестерильная число микробов варьирует инди- видуально от 10²
до 107 PMÜ/mL.

 

Нормальная микробиота у женщин

Наружные гениталии Уретра Влагалище
• S. epidermidis
• Viridans стрептококки
• Peptostreptococcus spp.
• Corynebacteria
• Mycobacteria
• Enterobacteriaceae
• S. aureus и CONS
• Enterococcus
• Neisseria (авирулент-
ные)
• Corynebacteria
• Mycobacteria
• Enterobacteriaceae
• Gardnerella vaginalis
• Mycoplasma
• Грибки

Аэробы:
• Difteroidid
• Streptococcus spp.
• S. aureus
• S. epidermidis

• Enterobacteriaceae

Микроаэрофилы и анаэробы:
• Лактобациллы
• Peptostreptococcus
• Peptococcus
• Clostridium
• Eubacterium
• Bifidobacterium
• Gardnerella vaginalis
• Candida
• Actinomyces
• Ureaplasma urealyticum
• Mycoplasma hominis

 

ГРАМ ПОЛОЖИТЕЛЬНЫЕ ПАЛОЧКИ

  • Genus Lactobacillus. Их количество в препарате колеблется циклично, больше всего их можно обнаружить на фоне овуляции (10-14 день). Иногда множество лактобацилл имеется на 19-23 день цикла, что может вызвать цитолиз промежуточных клеток.
  • Genus Corynebacterium. Большинство представителей этого вида факультативные или же непатогенные.

 

ГРАМ ПОЛОЖИТЕЛЬНЫЕ КОККИ 

  • Genus Staphylococcus
    • S. aureus в сообществе с E. coli, и стрептококками группы В и Trichomonas vaginalis может вызывать аэробный вагинит.
      На наличие аэробного вагинита указывает большое количество парабазальных клеток и лейкоцитов (также их гранулярный аспект).
    • S. epidermidis является важнейшим фактором уретрита и простатита у молодых (42%).
    • Увеличилась частота возникновения бактериурии с S. saprophyticus у молодых женщин. Также при инфекции амниона у беременных женщин может быть изо- лирован из материала цервикального канала.
  • Genus Streptococcus
    • S. agalactiae (стрептококк В группы) колонизируется на слизистой оболочке половых путей 5-40% женщин. Вульвовагинит же может возникнуть только тогда, когда их число достигнет не менее 108 PMÜ/g, а также будет определяться одновре- менно E. coli и S. aureus. Часто может быть одновременно с Candida albicans (55%).

 

ACTINOMYCES

Имеется в полости рта здоровых людей и на слизистой оболочке половых путей женщин. В качестве колонизирующего микроорганизма может быть у женщин, использующих внутриматочные противозачаточные средства (7%). Достаточно часто Actinomyces сопровождается Entamoeba gingivalis. Может быть причиной симптоматической инфекции.

 

ГРАМ НЕГАТИВНЫЕ ПАЛОЧКИ

  • Представители Enterobacteriaceae
    • Наиболее частые возбудители инфекций уротракта это Escherichia coli, Proteus spp., Klebsiella spp., Pseudomonas spp.
    • Диагностическую ценность имеет обнаружение E. coli в больших количествах, особенно вместе с другими энтеробактериями и на фоне PMN либо же с BV- микробами.

 

ГРАМ НЕГАТИВНЫЕ КОККИ

 

  • N. gonorrhoeae (гонококки)
  • N. meningitidis (менингококки)
  • Другие представители Neisseria с относительно низкой патогенностью изолируются из дыхательных путей. N. lactamica часто изолируется из урогенитального тракта.
  • Genus Acinetobacter. В большинстве своем кокобациллы или диплококки. Изоли- руются из слюны, мокроты, мочи и влагалищного секрета.   
  • Genus Moraxella. Морфологически неотличимы от нейсерий. В некоторых случаях можно обнаружить M. catarrhalis среди полиморфных лейкоцитов.

 

GARDNERELLA VAGINALIS

Имеется в микрофлоре у 45-58% здоровых женщин репродуктивного возраста и у 27% женщин в период менопаузы.

 

LEPTOTRICHIA

Относительно низкой патогенности. Возникает обычно на фоне трихомоноза, бактериального вагиноза или длительного курса противовоспалительного лечения.

 

ДИАГНОЗ БАКТЕРИАЛЬНОГО ВАГИНОЗА ПО КРИТЕРИЯМ NUGENT

  • Различное число морфотипов в препарате, окрашенном по Граму
  • Норма 0-3
  • Пограничное значение 4-6
  • Бактериальный вагиноз >7

 

ДИАГНОЗ БАКТЕРИАЛЬНОГО ВАГИНОЗА ПО КРИТЕРИЯМ AMSEL

  • Гомогенные молокообразные выделения из влагалища
  • Положительный аминовый тест
  • Ph >4,5
  • Микроскопическая находка: клетки „clue“ (~20%) Gardnerella, Mobiluncus и др.

 

ГРИБЫ

  • Бластоспоры, лейкоцитов мало или отсутствуют – колонизация
  • Бластоспоры, лейкоцитов много – Candida non-albicans, необразующая псевдомицелий
  • Бластоспоры, лейкоцитов много – инфекция Candida albicans  

 

Что показывает мазок на флору?

Методика мазка на флору очень проста. При осмотре в зеркалах берётся отделяемое со слизистой оболочки уретры, шейки матки и влагалища. Наносится на предметной стекло, высушивается, окрашивается, после чего врач-лаборант исследует препарат под микроскопом.
Это не больно, безопасно, быстро и недорого.
 ⠀
Условия для качественного мазка:
— вне менструации
— накануне исключить вагинальные свечи, таблетки, спринцевания, ванны
— за 1-2 дня не иметь половые контакты
— за 1-2 часа не мочиться
 ⠀
Нормальный мазок — это:
— умеренное количество слизи и клеток эпителия
— количество лейкоцитов до 10 в поле зрения в уретре и влагалище, до 30 — в цервикальном канале
— преобладание грам+ палочковой флоры
— отсутствие гонококков, трихомонад, ключевых клеток, кандида.
 ⠀
О чем могут свидетельствовать отклонения от нормы?
 ⠀

✳ Повышение лейкоцитов (а это наши защитники при любой инфекции) — признак воспаления. Количество слизи и клеток плоского эпителия при воспалении также повышено. Ставим диагноз вагинит, цервицит и назначаем лечение.
 ⠀
✳Выявлены ключевые клетки, гарднереллы, лептотриксы, снижено количество лактобацилл, преобладает кокковая флора — бак. вагиноз (дисбактериоз влагалища), промежуточное состояние между нормой и патологией, снижение местного иммунитета, условие для воспаления. Основная цель терапии — нормализация микрофлоры и рН влагалища.
 ⠀
✳При кандидозе (молочнице) в мазке выявляются нити мицелия и(или) споры гриба. Если есть жалобы, признаки воспаления — лечим.
 ⠀
✳С гонореей, трихомониазом, я думаю, все понятно. Лечение без вариантов.
 ⠀
Надо чётко понимать, что мазок на флору — лишь базовое исследование.
 ⠀
Хламидии, микоплазмы, уреоплазмы — слишком мелкие микробы и в мазке на флору не определяются.
 ⠀
Мазок на флору не показывает количество и соотношение микробов, не даёт чувствительность к антибиотикам. Для этого используются другие методы. 

dr.kuchumova_gyn


Есть вопросы? Напишите доктору.

Интимная тема — статьи от специалистов клиники «Мать и дитя»

Автор статьи — Елена Николаевна Зорина, акушер-гинеколог высшей категории, заведующая взрослым клинико-диагностическим центром ПМЦ. Статья опубликована в журнале «Роды.ru» №7-2015.

Практически у каждой женщины, хоть раз посещавшей гинеколога, брали мазок на флору, обязательно делают этот анализ и будущим мамам. А что это такое – флора влагалища, какие изменения в ней могут происходить во время беременности и что покажет так называемый «мазок»? Ответим на эти вопросы в нашей статье.

Нормальная микрофлора

Микрофлора влагалища – это сообщество разных микроорганизмов, живущих в определенной среде. В норме 95% микрофлоры влагалища – это молочнокислые бактерии, палочки Дедерлейна (лактобактерии): они вырабатывают молочную кислоту и не дают возможности закрепиться и размножаться во влагалище нежелательным бактериям. Благодаря деятельности лактобактерий среда во влагалище кислая, именно такая среда подавляет рост различных болезнетворных микроорганизмов. Если по каким-то причинам среда становится щелочной, то ее защитные свойства снижаются и вероятность заболеть увеличивается. Остальные 5% микроорганизмов во влагалище – это условно патогенная флора: кишечная палочка, стафилококки, стрептококки, гарднерелла, грибы (условно патогенной флора называется потому что, присутствуя в организме в небольшом количестве, она не наносит ему вреда). При особых обстоятельствах (стресс, прием антибиотиков, снижение иммунитета, изменение гормонального фона) условно патогенные бактерии могут активизироваться и начать размножаться. Однако более неприятны для женщины те микроорганизмы, которые попадают во влагалище извне, например, во время полового акта. Самые частые опасные микроорганизмы – это гонококки, (вызывающие гонорею), трихомонады (из-за которых начинается трихомониаз), вирус герпеса, хламидии, микоплазмы.

Микрофлора и беременность

Во время беременности под влиянием гормонов флора влагалища меняется. Чаще всего в ней появляется избыточное количество микроорганизмов рода Candida – грибка, который входит в состав нормальной микрофлоры ротовой полости, влагалища и толстого кишечника большинства здоровых людей. Грибок может мирно обитать в организме человека, не доставляя ему абсолютно никаких неудобств.

У беременных женщин кандидоз встречается в 2–3 раза чаще, чем вне беременности. Основная причина – это повышение уровня женских половых гормонов, что и приводит к созданию благоприятных условий для размножения грибков. Во время беременности среда во влагалище становится более кислой, и именно в таких условиях легко размножаются грибки рода Candida.

Еще одна причина возникновения молочницы – снижение иммунитета в период ожидания малыша. Изменение иммунного статуса наблюдается у каждой беременной и не является патологией. Сам по себе плод чужероден для тканей матери и для того, чтобы иммунная система его «не замечала», природой запланировано закономерное снижение активности защитной системы материнского организма. Кроме того, прогестерон – гормон беременности, достигая высокого уровня, сам по себе оказывает иммуносупрессивное действие.

При кандидозе чаще всего женщину беспокоят обильные выделения творожистой консистенции (отсюда и название «молочница»), которые имеют кисловатый запах и раздражают кожу, что сопровождается зудом, чувством жжения. Уже по одним только этим признакам врач может заподозрить кандидоз влагалища. Почему же нет стопроцентной гарантии и уверенности в диагнозе? Все дело в том, что похожие симптомы (зуд, жжение, выделения) имеют и другие инфекционные заболевания, и чтобы точно знать, от чего лечить женщину, требуется сначала выявить возбудитель заболевания.

Исследование под микроскопом

Для того чтобы определить состав микрофлоры влагалища, а заодно и определить, в чем причина неприятных ощущений во влагалище, проводят бактериоскопию – оценку окрашенного мазка на флору под микроскопом.

Обычно это исследование назначают не менее двух-трех раз за всю беременность. Сначала мазок из влагалища берут при постановке на учет в женскую консультацию, потом его повторяют во время II–III триместра, и последний раз мазок берут перед родами, на 37–38-й неделе беременности. Почему нужно проводить бактериоскопию несколько раз? Некоторые влагалищные инфекции и заболевания часто являются причиной невынашивания ребенка или преждевременных родов. Также может произойти внутриутробное инфицирование или ребенок может заразиться инфекцией во время родов. Да и сама воспаленная слизистая родовых путей становится очень ранимой, и роды могут осложниться разрывами. Поэтому необходимо узнать об этих болезнях в начале беременности и вовремя их пролечить.

При сдаче мазка на флору надо предварительно подготовиться к анализу:

  • Воздержаться от секса в течение двух суток перед процедурой.
  • Отказаться от свечей, таблеток, мазей. Они могут повлиять на состав микрофлоры и исказить результаты.
  • Не применять щелочных средств гигиены. Лучше всего провести ополаскивание без использования мыла и спринцевания.
  • За два часа до взятия мазков воздержаться от мочеиспускания.

Мазок берется во время обычного гинекологического осмотра на кресле: врач специальной палочкой делает соскоб влагалищной слизи и наносит ее на предметное стекло. В лаборатории после высыхания секрета его покроют красителями и посмотрят под микроскопом. Благодаря этой процедуре врачи оценивают состав микрофлоры влагалища.

В норме в мазке можно обнаружить:

  • Палочки Дедерлейна (их количество преобладает). Количество других микроорганизмов (кокков) – незначительно.
  • Эпителиальные клетки (поверхностный слой стенок влагалища, которому свойственно шелушиться).
  • Незначительное количество лейкоцитов (белых кровяных телец, которые ведут борьбу с различными возбудителями инфекций). Лейкоцитов в мазке должно быть до 20 в поле зрения микроскопа. Если же их число превышает допустимые нормы, значит, у женщины имеется какая-то инфекционная патология.
  • Эритроциты (красные клетки крови) – их не должно быть больше 5 в поле зрения. Повышенное количество говорит о нарушении целостности сосудов.
  • Слизь: ее количество должно быть умеренное.

Важно: Мазок на флору не выявляет таких инфекций, как микоплазма, уреаплазма и хламидии, их можно обнаружить только при посеве на скрытые инфекции. Также в мазке не определяются вирусы (герпеса, папилломы человека) – чтобы обнаружить эти заболевания, также потребуется дополнительное исследование.

Исследование микрофлоры влагалища – анализ хотя и очень простой, но необходимый, сделать его надо, даже если будущую маму ничего не беспокоит. Проводится бактериоскопия в любой женской консультации (бесплатно) или медицинском центре, а результаты будут готовы уже на следующий день.

ПАМЯТКА

Как снизить риск нарушения влагалищной микрофлоры

  1. Совершать туалет половых органов лучше под проточной водой, струя воды должна быть направлена спереди назад, чтобы патогенные микроорганизмы из заднего прохода не попали во влагалище.
  2. Не надо постоянно использовать моющие средства – они часто сушат и раздражают слизистую наружных половых органов и влагалища.
  3. Ежедневные прокладки не должны иметь в своем составе отдушек (ароматических веществ): это снизит риск аллергических реакций. Менять прокладки следует каждые 3–4 часа.
  4. У женщины должны быть личные средства гигиены: мочалка, отдельное полотенце для интимного ухода.
  5. Белье не должно содержать синтетику – она не пропускает воздух и создает благоприятную среду для ускоренного размножения патогенных микроорганизмов.

Что обозначают кокки в мазке. Кокковая флора в мазке: диагностика, причины, лечение. Мазок на флору и стерильность: что показывает

Посещать докторов не любит большая часть людей. Но все мы прекрасно понимаем, что без этого не обойтись, все мы периодически болеем, и поэтому без помощи специалиста нам не справиться. Иногда, в независимости от наших желаний, нам в случае развития того или иного заболевания приходится сдавать анализы. Довольно часто назначается сдача мазка. Многие часто задаются вопросом: «Что это такое, кокки в мазке?». Об этом и пойдет речь в статье.

Нас окружает много различных микроорганизмов. Это и бактерии и вирусы и грибы. В повседневной жизни мы не обращаем на подобную микрофлору никакого внимания. Но до определенного момента, пока она не проникнет в организм. Одна из самых вредных и провоцирующих серьезные заболевания флор — кокковая. Под кокками подразумеваются бактерии, обладающие шарообразной формой и поражающие в большинстве случаев ЖКТ, дыхательную и половую систему. Эти микроорганизмы могут обнаружиться в организме как женщины и мужчины, так и ребенка. Нередко люди задаются вопросом, как выглядят кокки в мазке — что это такое вообще, и как с этим бороться. Обнаружение этих паторганизмов в мазке — новость не из приятных.

Весьма распространенной и вместе с этим довольно болезненной является стафилококковая инфекция. Вызвать ее может несколько микроорганизмов. Согласно статистическим данным, практически каждый новорожденный инфицируется стафилококком, но остается он в организме лишь у двадцати процентов населения планеты, 60% людей являются периодическими носителями стафилококка.

Когда речь идет о стафилококковой флоре, то имеется в виду золотистый стафилококк. Он на самом деле опасен, потому как устойчив как к антисептическим, так и антибактериальным препаратам. Он может спровоцировать развитие серьезных патологий. Эти микроорганизмы весьма активны и чрезвычайно устойчивы к воздействию извне. Так, к примеру, они могут сохранять активность после длительного воздействия ультрафиолета, температуры в 150 градусов.

Их нельзя уничтожить ни при помощи спирта, ни при помощи натрия хлорида или перекиси. Данная бактерия может спровоцировать развитие опасных недугов, в частности пневмонии, эндокардита, остеомиелита. Она же может привести к смерти. Нередко паторганизм поражает половую систему.

Наличие кокков в небольшой концентрации считается нормой. Это значит, что единичный стафилококк не опасен. Увеличение количества стафилококков требует незамедлительного лечения. Нередко в мазке на кокки обнаруживается еще один вид флоры — стрептококк. Иначе его называют грамположительной бактерией. Частое явление — выявление энтерококков. Эти микроорганизмы устойчивы к любым воздействиям, а их выявление сигнализирует о наличии воспалительного процесса в половой или мочеполовой системе.

Гонококк считается одним из самых болезнетворных представителей кокковой микрофлоры. Грамотрицательные бактерии могут провоцировать развитие различных патологий, в частности гонореи . Эта флора является исключительно патогенной. Это означает, что в мазке ее быть не должно. Вылечить патологию, вызванную кокковой флорой можно только с помощью антибактериальных препаратов. Терапией недуга, так же как и постановкой диагноза, может заниматься исключительно лечащий врач.

Заниматься самолечением, особенно при беременности, принимать какие-либо препараты, применять свечи категорически не рекомендуется. Так вы только навредите себе и усугубите состояние. Наличие палочек Додерлейна — вполне естественно. Эти бациллы поддерживают нормальную кислотную среду влагалища, а также противостоят различным инфекциям. Кокки в мазке, что это такое вам уже известно, могут спровоцировать развитие серьезной патологии. С целью предупреждения развития плачевных последствий врачи назначают забор мазка.

Флора влагалища позволяет сделать выводы относительно отсутствия или наличия патогенных микроорганизмов, к примеру, дрожжеподобных грибов рода Кандида, провоцирующих развитие кандидоза. Помимо этого, по результатам исследования можно определить наличие или отсутствие раковых клеток. Мазок является совершенно бесплатной манипуляцией. Результаты исследования покажут, есть ли какие нарушения в функционировании женской половой системы.

Мазок на флору и стерильность: что показывает?

Данное исследование способствует выявлению патогенной микрофлоры, провоцирующей возникновение различных болезней. Результат мазка на флору в 95% (показатель количества лактобактерий) сигнализирует о том, что здоровье женщины в порядке. Падение количества полезных бактерий сигнализирует об ослаблении защиты.

От концентрации во влагалище лактобактерий будет зависеть степень чистоты влагалища, всего их существует четыре:

  1. Первая степень говорит об отличном состоянии половой системы. В данном случае должно обнаружиться преобладающее количество палочек Додерлейна. Иногда выявляется наличие эпителиальных клеток (в малой концентрации), а также лейкоцитов.
  2. Что относительно второй степени, то она должна вызывать некую обеспокоенность. Помимо лактобактерий, обнаруживается наличие грамотрицательных организмов, которые могут спровоцировать появление патологии.
  3. Третья степень характеризуется наличием большого количества эпителиальных клеток, а также пагубной микрофлоры и практически полным отсутствием палочек Додерлейна. Это плохой результат. Лечение должно быть незамедлительным.
  4. Что касается четвертой степени, то она является критической. В мазке не обнаруживаются лактобактерии. Реакция мазка щелочная. Всю флору составляют патогенные организмы. Терапия должна быть серьезной и незамедлительной.

Виновниками выявленного во влагалище воспаления чаще всего являются коккобациллы — трихомонады или гарднереллы . Теперь вы знаете, что такое кокки в мазке, и самое главное вы знаете, как с этим бороться.

Обильная кокковая флора в мазке: симптомы и норма

Как уже упоминалось, в человеческом организме содержится значительное количество микроорганизмов. Кокки составляют условно-патогенную микрофлору. Они являются безвредными только в случае поддержания правильного баланса. Обильная кокковая флора в мазке может сигнализировать о серьезных проблемах со здоровьем.

В микрофлоре влагалища содержатся ацидофильные бактерии, некое количество бифидобактерий — 10% и пептострептококков — примерно 5%. Такая кокковая флора в мазке в такой концентрации считается вполне нормальной. В таком составе микрофлора продуцирует кислую среду, способствующую предотвращению различных патологий. Более того, такая флора способствует защите не только слизистых оболочек влагалища, но и всего организма.

Полезная микрофлора помогает в:

  • поддержании кислотного баланса;
  • уничтожении вредной микрофлоры;
  • нормализации обменных процессов.

Если после проведения лабораторного исследования обнаружено, что кокковая флора в мазке превышает норму, это свидетельствует о повышенном уровне щелочи. При превышении микрофлорой нейтрального результата появляются грамположительные диплококки. В данном случае происходит снижение концентрации лактобактерий. Если же среда влагалища чрезмерно щелочная, отмечается гибель ацидофильных лактобактерий, а впоследствии замещение их кокками.

Обильная кокковая флора в мазке сигнализирует о развитии дисбактериоза влагалища, или же о наличии воспаления.

При игнорировании проявлений недуга, кокки начинают активно развиваться, а это в дальнейшем приводит к возникновению серьезных патологий, в частности эрозии шейки матки. Общеизвестно, что вышеуказанный недуг является причиной бесплодия. Крайне не желательно обильное выявление кокковой флоры в мазке при беременности, потому как это усложняет процесс вынашивания плода. Выявление обильной кокковой флоры в мазке может сигнализировать о серьезных проблемах.

Проникновение и размножение вредной флоры в большинстве случае происходит вследствие:

  • несоблюдения гигиены;
  • понижения иммунитета;
  • длительного приема антибиотиков;
  • ношения тесного синтетического белья;
  • частого проведения спринцеваний;
  • незащищенных половых связей.

Очевидным симптомом заселения обильного количества кокков является появление слишком выраженного неприятного запаха. Он схож с запахом испорченной рыбы. Помимо этого, часто поступают жалобы на появление зуда и жжения наружных половых органов, вагинальных выделений желтоватого окраса, ощущения дискомфорта после полового контакта.

У мужчин довольно редко возникают проявления заселения кокковой флоры. Однако может быть и такое, что мужчина жалуется на появление болевых ощущений в момент мочеиспускания, жжения и зуда, выделений из пениса желтой или зеленой окраски. Эти симптомы могут сигнализировать о гонококках или трихомонадах. Эти патологические организмы являются возбудителями патологий, передающихся ПП.

Важно также понимать, что обильная концентрация кокковой флоры в мазке — это уже повод задуматься над своим здоровьем и начать лечение. Однако помните о том, что терапия подбирается в зависимости от вида кокковой флоры в мазке. Заниматься самолечением не стоит. Прием того или иного препарата может назначить только врач и исключительно после расшифровки результатов анализов.

Кокки в мазке: чем лечить у женщин, мужчин, а также при беременности и у детей

Терапия патологии должна быть целесообразной и своевременной. Не стоит спрашивать: «Чем лечить кокки в мазке?» в интернете. Назначить терапию может только гинеколог. Врач назначит лечение после проведения необходимых обследований. Одно из самых основных — мазок на микрофлору. При нормальном состоянии здоровья в мазке обнаруживается небольшое количество кокков.

При наличии недуга в мазке помимо огромного количества кокков будут содержаться и другие инфекционные возбудители. Лечиться в любом случае должны оба партнера. Как правило, назначается применение антибиотиков: Метронидазола, Клиндамицина, препаратов, способствующих укреплению иммунной системы, антигистаминных средств. Если женщина беременна, назначают безопасные средства, не влияющие на развитие плода. О том, чем лечить кокки в мазке, спросите специалиста.

Не стоит также, если обнаружены кокки в мазке, лечить чем-то из нетрадиционных средств. Народные средства при нецелесообразном использовании могут навредить.

Теперь вы знаете, что делать, если выявлены кокки в мазке, чем лечить патологию. После курса терапии, а также полного восстановлении микрофлоры влагалища (должна преобладать палочка Додерлейна) вам остается только лишь придерживаться ряда рекомендаций, чтобы не заболеть снова.

  1. Соблюдайте гигиену.
  2. Носите белье из качественных натуральных материалов.
  3. Избегайте незащищенных половых контактов.
  4. Правильно питайтесь.
  5. Вовремя лечите сопутствующие патологии.

Берегите себя, заботьтесь о своем здоровье и тогда у вас не будет поводов обращаться в больницу.

Во время осмотра у гинеколога женщинам довольно часто выполняется забор мазка из влагалища для дальнейшего анализа на патогенную флору.

В норме в организме человека обитает огромное количество различных бактерий. При этом, только некоторые из них способы стать причиной развивающегося заболевания.

Одними из наиболее часто выявляемых бактерий, которые обнаруживаются после гинекологического осмотра, являются кокки в мазке. Данные шаровидные микроорганизмы обитают в организме человека и становятся источником патогенной микрофлоры.

В том случае, если общий баланс стерильности в организме поддерживается в стабильности, кокки безвредны. Совершенно иная картина наблюдается при ослабленном иммунитете больного, который страдает от активной жизнедеятельности кокков. Особенно опасными они будут для женщин во время вынашивания ребенка.

Поможет лучше понять особенности кокков в мазке, и что это такое вообще, подробное описание данных бактерий, а также их разновидности.

Виды кокков, и в чем их опасность

Следует понимать, что у женщин могут быть обнаружены разные виды кокков. Довольно часто при этом выявляются стрептококки. Они становятся причиной воспаления в половых органах и дисбактериоза.

Еще одними часто выявляемыми бактериями являются энтерококки. Они свидетельствуют о несоблюдении женщиной необходимой личной гигиены. Данные виды кокков требуют обязательного лечения.

Следующими по частоте диагностирования являются гонококки. Данные бактерии часто становятся причиной острого воспаления.

При поражении инфекцией возможно обнаружение диплококков. Такие палочки провоцируют острое нарушение микрофлоры и могут стать источником затяжного воспаления.

Причины

Кокки в мазке способны повысить свою распространенность в микрофлоре вследствие следующих причин:

  • Резкое снижение иммунной системы, которое может случиться при стрессе, плохом питании, болезни.
  • Практика спринцевания, которое при отсутствии медицинской необходимости нарушает естественный баланс микрофлоры влагалища у женщин. Это довольно частая причина нарушения природной флоры влагалища.
  • Ранняя половая жизнь, при которой у девушки еще не полностью сформирована природная защитная микрофлора влагалища.
  • Несвоевременная замена прокладок, вследствие чего во влагалище развиваются бактерии.
  • Использование некачественного синтетического белья.
  • Несоблюдение нормальной интимной гигиены.
  • Практика половых контактов без использования презерватива. Особенно опасным считается незащищенный секс с разными непроверенными партнерами. Это повышает риск не только нарушения в микрофлоре, но и также вероятность заражения рядом инфекционных половых болезней.
  • Длительное лечение антибактериальными средствами. В таком случае у человека нарушается полезная микрофлора, что дает толчок к развитию кокков.

Помимо этого, выявление кокков у женщин возможно во время гормонального дисбаланса и беременности.

Симптомы

Первым характерным признаком кокков в микрофлоре является резкий запах из половых органов, напоминающий соленую рыбу. Также в подобном состоянии у женщины будут наблюдаться обильные слизистые выделения.

Во время интимной близости женщина может ощущать боль и дискомфорт.

Данные признаки должны стать сигналом к действию, а именно — обращению к гинекологу, ведь своевременное выявление и лечение недуга в разы повышает шанс на скорейшее выздоровление.

Кокковая флора в мазке: тактика лечения отклонения и профилактика его развития

Здоровая микрофлора во влагалище состоит из так называемых полезных лактобактерий и пептострептококков.

Основной задачей нормальной микрофлоры является создание особой кислотной среды, в которой не смогут размножаться патогенные бактерии. Также полезная микрофлора подавляет активность различных грибков, которые могут начать развиваться при снижении защитных сил организма.

О чем говорит наличие кокков

При нарушенной микрофлоре во влагалище наблюдается снижение количества лактобактерий. Это приводит к быстрому распространению болезнетворных микроорганизмов.

При щелочной среде лактобактерии погибают, а вместо них образуется многочисленная кокковая флора в мазке. В дальнейшем это становится причиной эндометрита и бесплодия.

Лечение

Для выявления кокков женщине стоит обратиться к гинекологу, который выполнит забор мазка из влагалища с помощью специального прибора. Процедура может быть немного неприятной, однако боли обычно она не вызывает. В качестве материала для анализа используется слизь или выделения из влагалища.

Следует отметить, что в мазке здоровой женщины могут быть выявлены единичные кокки и это будет совершенно нормально, так как ее микрофлора способна самостоятельно бороться с ними.

В том случае, если изменение во флоре вызвано половой инфекцией, то мазок поможет выявить конкретного возбудителя болезни, будь то гонорея, трихомониаз и т.п.

Лечебная терапия подбирается для каждой пациентки отдельно, исходя из конкретного вида бактерии и первопричины ее активного размножения. Также гинеколог обязательно учитывает наличие у женщины дополнительных заболеваний, беременности, общего состояния здоровья.

Традиционное лечение кокков предусматривает назначение противобактериальных препаратов. Они могут быть в виде таблеток, вагинальных свечей или растворов.

Для укрепления иммунитета используются иммуномодуляторы.

При выявлении инфекционных процессов, вызванных хламидиями, цитомегаловирусом и т.п., назначаются антибиотики.

Профилактика

Уберечь себя от развития кокков в микрофлоре влагалища помогут следующие профилактические рекомендации:

  • Иметь постоянного проверенного полового партнера, а при случайных сексуальных контактах обязательно пользоваться презервативом.
  • Носить качественное удобное нижнее белье из хлопка. Что касается использования синтетических трусиков по типу стринг, то от них лучше отказаться.
  • Дважды в день проводить личную гигиену интимной области с использованием жидкого мыла (с добавлением молочной кислоты).
  • Каждые три часа менять прокладки, как ежедневные, так и для менструаций.
  • Отказаться от курения, приема спиртного и минимизировать стрессы, которые, снижают иммунитет.
  • При лечении антибиотиками следует обязательно принимать пробиотики, которые защитят микрофлору от поражения.
  • Сбалансированно питаться. В рационе должны преобладать свежие овощи и фрукты, а также кисломолочные продукты.

Посещать гинеколога необходимо раз в полгода. Это позволит держать женское здоровье под контролем и вовремя выявить заболевания. Самым простым и доступным методом исследования в гинекологии является взятие гинекологического мазка.

Расшифровка такого анализа позволит врачу увидеть изменения в половой системе женщины, которые не видны при внешнем осмотре.

  • Взятие мазка – процедура абсолютно безболезненная и по времени займет всего пару минут. Опасности для здоровья она не несет, может проводиться даже у беременных женщин.

Когда нужно сдавать мазок на флору?

Расшифровка анализ мазка на флору может поведать гинекологу о наличии половых инфекций, воспалительного процесса, гормональных расстройствах в организме женщины.

Мазок на флору (гинекологический мазок) обязательно проводится, если женщина предъявляет жалобы следующего характера:

  1. Выделения необычного цвета из половых путей.
  2. Боли в животе в покое или при половом контакте.
  3. Чувство зуда и жжения в области половых органов.
  4. Появление неприятного запаха у выделений.

Также мазки берутся при проведении профилактических осмотров.

Расшифровка результатов мазков

С помощью букв доктор отмечает место взятия мазка. Обычно используются буквы латинского алфавита: V, C, U.

Мазки берутся из трех точек: влагалище (V-vagina), шейка матки (C-cervix) и мочеиспускательное отверстие (U- uretra).

В расшифровке мазка на флору у женщин можно встретить странное слово «кокки». К коккам относятся микроорганизмы, имеющие округлую форму. Это группа условно-патогенных организмов, которые присутствуют в организме постоянно.

Однако находиться они должны в определенном количестве. Как только число их превышает допустимое, кокки могут вызывать неприятную симптоматику, обусловленную воспалением. В гинекологии это состояние зовется неспецифическим кольпитом.

Кокки подразделяют на две группы: грамположительные и грамотрицательные. Такое деление имеет важное диагностическое значение в определении патогенности микроорганизма, поселившегося во влагалище.

Кокковая флора в мазке, гр.+ или гр.- кокки

мазок на флору палочки кокки

Деление микробов на грамотрицательных и грамположительных появилось в микробиологии после того, как датский ученый по фамилии Грам выявил способность микроорганизмов окрашиваться в разные цвета, в зависимости от степени их устойчивости к антибиотикам.

При окраске препаратов использовался специальный краситель темно-синего или фиолетового цвета. Ученый заметил, что одни микробы окрашиваются в синий цвет, а другие в розовый, хотя краситель один и тот же.

После тщательных исследований было выявлено, что микробы, окрашенные в розовый или малиновый цвет, имеют меньшую чувствительность к антибиотикам. Чтобы наступила их гибель, следует приложить немалые усилия.

Микроорганизмы, которые хорошо окрашивались в синий цвет, получили название грамположительных (грам+), а те, что оставались розовыми — грамотрицательными(грам-).

Бледное окрашивание и устойчивость к антибактериальным препаратам объяснялась просто: у этих бактерий была толще оболочка. Строение стенки имеет более сложное строение, чем у грам(+) кокков, а значит, красителю или антибиотику гораздо труднее проникнуть в ее слои.

Для гинеколога важно такое разделение. Обнаружение грам(+) кокков в мазке допускается. К таким микроорганизмам относятся стафилококк и стрептококк, которые могут присутствовать во влагалище здоровой женщины.

Грам(-) кокки способны вызывать заболевания. Самыми распространенными представителями этой группы в гинекологии являются гонококки, возбудители гонореи.

Что такое палочки Дедерлейна?

Обязательным элементом женского здоровья является палочковая флора во влагалище. Палочки Дедерлейна – это обобщенное название, объединяющее крупные и неподвижные грамположительные палочки, обеспечивающие нормальную микрофлору женских половых органов.

Их можно встретить под названием лактобактерии или грамположительные палочки.

Палочки Дедерлейна играют важную роль в жизни женщины:

  • Способствуют поддержанию кислой среды во влагалище, что обеспечивает тщательный отбор сперматозоидов во время оплодотворения.
  • Как известно, сперматозоиды долго не живут в кислой среде. Поэтому первыми погибают неполноценные, ослабленные мужские клетки, что позволяет добраться к цели только самому сильному и выносливому.
  • Подавляют развитие патогенных микроорганизмов посредством активации макрофагов.
  • Выделяют перекись водорода — помогает «поддержанию чистоты» во влагалище.

В мазке здоровой женщины палочки Дедерлейна должны быть в большом количестве. Снижение их количества говорит о возможных проблемах с женским здоровьем.

Что такое лептотрикс (Leptotrix) в мазке?

Leptotrix относится к условно-патогенным микроорганизмам. Это грам(+) анаэробная палочка, населяющая водоемы. Под микроскопом лептотрикс имеет вид волоса – длинная и тонкая палочка.

Считается, что лептотриксы не передаются половым путем, а их присутствие в мазке не является поводом для переживаний, если других отклонений не обнаружено.

Особенностью этих бактерий является то, что они часто сопровождают другие патогенные микроорганизмы – трихомонады и хламидии. В таком случае доктор назначит лекарства для лечения сразу нескольких возбудителей.

Если лептотриксы выявлены при планировании беременности, лечение проводится в обязательном порядке. Выявлено, что они могут стать причиной выкидышей, вызывать воспалительные процессы в плодных оболочках, инфицировать ребенка.

анализ мазка

Получив результаты анализов, порою бывает очень трудно разобраться в цифрах и буквах, написанных врачом. На самом деле все не так уж сложно. Для того чтобы понять, имеете ли вы гинекологические заболевания, нужно при расшифровке анализа мазка на флору знать показатели нормы. Их немного.

В анализах мазка у взрослой женщины показатели нормы следующие:

  1. Плоский эпителий (пл.эп.) – в норме его количество должно быть в пределах пятнадцати клеток в поле зрения. Если цифра больше, то это свидетельство воспалительных заболеваний. Если меньше – признак гормональных нарушений.
  2. Лейкоциты (L) – допускается наличие этих клеток, так как они помогают бороться с инфекцией. Нормальным считается количество лейкоцитов во влагалище и мочеиспускательном отверстии не больше десяти, а в области шейки матки – до тридцати.
  3. Палочки Дедерлейна – у здоровой женщины их должно быть много. Малое количество лактобацилл говорит о нарушенной микрофлоре влагалища.
  4. Слизь – присутствовать должна, но только в небольшом количестве.

Присутствие в результатах анализа грибов рода Кандида, мелких палочек, грам(-) кокков, трихомонад, гонококков и других микроорганизмов, свидетельствует о наличии заболевания и требует более глубокого исследования и назначения лечения.

Таблица расшифровки нормы мазка у женщин (флора)

Степени чистоты влагалища

Часто доктор выписывает направление на анализ мазка на чистоту. С помощью этого метода выявляется «степень чистоты» влагалища. Всего их четыре. Нормальными являются только первая и вторая степени, третья и четвертая степени сигнализируют о наличии заболеваний половых путей.

1 степень – идеальный вариант, который, к сожалению, встречается нечасто. Лейкоциты в мазке не превышают допустимые нормы. Флора представлена большим числом палочек Дедерлейна, слизи и клеток слущенного эпителия в небольшом количестве.

2 степень – Наиболее распространенный вариант нормы, при котором лейкоциты в пределах нормы, слизь и эпителий в умеренном количестве. Появляется небольшое количество кокков или грибов Кандида, лактобактерии в большом количестве.

3 степень – в мазке определяется большое количество слизи и эпителиальных клеток. Полезных лактобацилл мало, вместо этого отмечается увеличенное количество грибков Кандида и патогенных микробов.

4 степень – лейкоцитов так много что доктор описывает их термином «сплошь». Очень большое число болезнетворных микроорганизмов. Палочки Дедерлейна отсутствуют. Слизь и эпителий в большом количестве.

Первая и вторая степени не требуют лечения, а последние две степени свидетельствуют о воспалительном процессе, вызванном тем или иным возбудителем, и требуют безотлагательной терапии.

Мазок на флору при беременности

За весь период беременности делается три раза, во время скрининговых обследований: в момент постановки на учет, на 30-й неделе и перед предполагаемой датой родов.

Анализ проводится с целью профилактики заболеваний половой сферы, которые могут осложнить роды или стать причиной заболеваний у новорожденного.

Показатели мазка беременной женщины отличаются от мазков небеременной количественным составом флоры.

В период вынашивания малыша количество палочек Дедерлейна увеличивается в десятки раз. Необходимо это для поддержания кислой среды, которая убийственно воздействует на патогенные микробы, защищая плод от проникновения инфекции.

Увеличивается и число клеток эпителия. Во время беременности в них накапливаются запасы гликогена, который используется лактобактериями в качестве питания.

В остальном отличий нет. Появление патогенных микроорганизмов также требует лечения, только методы терапии выбираются более щадящие (свечи, тампоны, мази).

Сохранение кислой среды в микрофлоре влагалища – это норма, но без развития в ней вредных бактерий. При обнаружении в мазке у женщин значительного количества кокков изменяется щелочной баланс, и не в лучшую сторону. Кокковая флора приводит к дисбалансу во влагалище. Врач диагностирует дисбактериоз часто в совокупности с в ней. Необходимо лечение, иначе впоследствии начнет развитие эндометриоз, появится эрозия шейки матки.

Разновидности бактерий

Лейкоциты призваны защищать организм от проникновения инфекции. Повышение их количества при взятии мазка говорит о развитии инфекции. При повышении кокковой флоры в мазке необходимо лечение, но в зависимости от разновидности бактерий, расселившихся во влагалище женщины. Бактерии бывают:

–гонококками;

–стрептококками;

–стафилококками;

–пневмококками;

–тетракокками.

Каковы симптомы при превышении нормы кокков?

Симптомов в течение длительного времени может и не быть. При развитии инфекции слизистая становится сухой, женщин беспокоит зуд и жжение, появляются выделения. При воспалении предстательной железы у мужчин микрофлора заражена гонококками, при взятии мазка из мочеиспускательного канала.

Кокковые бактерии или гонококки в мазке ведут к развитию гонореи у мужчин. Отекает тестикула, из пениса выделяется желтое, или зеленое содержимое, при мочеиспускании появляется режущая боль. Лечение необходимо.

Почему развивается кокковая инфекция?

Развитие дисбактериоза во влагалище возможно в результате:

  • длительного приема антибиотиков, самолечения неправильными дозами;
  • развития генитальных инфекций;
  • злоупотребления спринцеванием. Полезная микрофлора вымывается и бактериям уже ничто не препятствует;
  • раннего начала половой жизни, неразборчивых связей;
  • незащищенного секса с партнером, зараженным гонококками;
  • ношения стягивающего белья из синтетики.

Кокки в мазке приводят к неприятному запаху, часто густым и вязким, зуду, жжению, дискомфорту во время секса. Если при осмотре и взятии мазка гинеколог обнаружит условно патогенную флору, то ставит диагноз – кокковая флора.

В чем опасность кокков?

Кокки – это бактерии в форме рисовых зернышек. Они присутствуют в организме постоянно, но при превышении нормы провоцируют развитие воспалительного процесса. Кокковая флора распространяется не только на влагалище, но и кишечник, покровы кожи.

Расселение бактерий в секрете влагалища приводит к снижению и даже прекращению выработки эстрогенов, размножаются лактобактерии. Прекращение выработки гормонов в яичниках негативно влияет на репродуктивные органы, в результате – выкидыши, невынашиваемость беременности, бесплодие. При незначительном количестве кокков иммунная система еще функционирует, бактерии сильно не размножаются, микрофлора держится в равновесии.

При преобладании бактерий развивается воспаление и это уже повод обратиться к врачу. Развитию воспаления способствуют:

  1. Нарушения гормональные, уменьшается число лактобактерий, нарушается регулярность менструального цикла.
  2. Повреждения слизистой влагалища, приводящие к ослаблению ее защитных функций.
  3. Инфекционные болезни иммунная система ослабевает, развитию бактерий ничто не препятствует.
  4. Несоблюдение личной гигиены, патогенные бактерии начинают усиленно развиваться в питательной и благоприятной среде.

Диагностика заболевания

Диагноз ставится врачом при беседе с пациентом, наличии симптомов и жалоб. Основные симптомы, указывающие на наличие кокковой флоры:

  • боли, неприятные ощущения во время полового акта;
  • тяжесть, болезненность внизу живота;
  • дискомфорт во влагалище, половых органах;
  • выделения из влагалища, обильные и с неприятным запахом, гнойным оттенком.

Влагалищные выделения при осмотре врачом характерно изменяют цвет, слизистая раздражена, само влагалище воспалено, с ярко-малиновым, красным оттенком. Выделения могут содержать частички крови.

Все это симптомы острой стадии недуга. В хронической форме они менее выражены, сглажены. Точный диагноз врач поставит после исследования мазка, оценки его микрофлоры. Мазок после взятия наносится на предметное стекло, высушивается, окрашивается лаборантом для подсчета и выявления микроорганизмов. При большом и обильной кокковой флоре, слущенном эпителии ставится диагноз — неспецифический кольпит.

Как лечить кокки?

Лечение заключается в приеме препаратов местно,1- 2недели. Часто назначается Бетадин, но препарат имеет противопоказания, возможен зуд, расстройство слизистой влагалища. При повышенной гиперчувствительности к компонентам лечить Бетадином недуг не рекомендуется. Также при беременности, при кормлении грудью лечение должно проводиться только под контролем лечащего врача.

Кокковая флора лечится антибиотиками: Клиндамицином, Метронидазолом. Назначаются антимикробные препараты, свечи, спреи, вагинальные таблетки. Все лечение направлено на восстановление микрофлоры. Возможно дополнительное назначение иммуностимуляторов в виде свечей для повышения иммунитета и восстановления нормальной микрофлоры.

Для устранения неприятных симптомов назначаются антигистаминные средства, для восстановления флоры влагалища – пробиотики в качестве профилактики от молочницы, иных грибковых заболеваний, возможных начать свое развитие после прохождения курса лечения антибиотиками. Антибактериальная терапия назначается только в запущенных случаях. Если врач решит, что можно обойтись без нее, то назначит спринцевания антисептическими растворами, например, хлоргексидином, далее введение тампона во влагалище, пропитанного лактобациллом для уничтожения инфекции, имеющей место быть в водимом антисептическом растворе. Курс основного лечения – до 10 дней. Полезно проводить спринцевания с добавлением отвара календулы, чистотела, ромашки аптечной. При обнаружении кокковой инфекции часто обследуются оба партнера, она передается половым путем.

В мазке часто наблюдается слизь при превышении кокков в мазке. Слизь не патологична, но вместе с кокками свидетельствует о развитии кольпита или дисбактериоза. Неспецифический кольпит возникает при гормональном дисбалансе, лечение должно быть направлено на коррекцию гормонального фона. Женщинам в возрасте и при климаксе показаны препараты с содержанием эстрогена.

Кокковая флора при беременности опасна, приводит к развитию воспаления и становится опасной при отсутствии лечения, продвигается вверх, к матке развитие патологии может навредить плоду, лечение назначит врач. Для малыша оно должно быть максимально безопасным.

Как не допустить развитие кокковой флоры?

Микрофлора во влагалище будет в норме, если вести здоровый образ жизни, избегать стрессов, соблюдать интимную гигиену, пользоваться презервативами при случайном сексе.

Если поставлен диагноз — кокковая флора, лечение должно быть своевременным. Микробы чувствительны ко многим лекарствам, поэтому самолечение недопустимо. Назначит препараты только врач на основании результатов мазка. Если инфекцию не лечить, то заболевание переходит в хроническую форму, поражаются детородные органы, развивается бесплодие.

Интересное видео:

Посетить врача-гинеколога нужно обязательно при появлении выделений, иных неприятных симптомов: зуда, жжения. Сдавать мазок желательно регулярно, не реже 1-2 раза в год.

Кокковая флора приводит к дисбалансу во влагалище. Нормализовать флору – основное направление в лечении, профилактика возможных рецидивов в дальнейшем.

КТО СКАЗАЛ, ЧТО ВЫЛЕЧИТЬ БЕСПЛОДИЕ ТЯЖЕЛО?

  • Вы давно хотите зачать ребенка?
  • Много способов перепробовано, но ничего не помогает…
  • Диагностировали тонкий эндометрий…
  • К тому же, рекомендованные лекарства почему-то не эффективны в Вашем случае…
  • И сейчас Вы готовы воспользоваться любой возможностью, которая подарит Вам долгожданного малыша!

Микрофлора влагалища здоровой женщины представлена различными видами бактерий: полезными и условно-патогенными. В норме они находятся в определенном соотношении.

Если по какой-либо причине этот баланс нарушается, риск развития мочеполовых инфекций у женщины возрастает. Обильная кокковая флора часто наблюдается в результатах гинекологического мазка именно при таком дисбалансе.

  • Показать всё

    1. Состав нормальной микрофлоры влагалища

    Золотым стандартом диагностики в гинекологии является исследование мазка, взятого из заднего свода влагалища и цервикального канала. В норме могут быть обнаружены:

    1. 1 Ацидофильные палочки Додерляйна (лактобактерии). В норме их количество должно составлять не менее 85-95% от всей флоры или 10 6 -10 8 копий в образце.
    2. 2 Бифидобактерии (около 10%).
    3. 3 Пептострептококки, эубактерии, превотеллы, бактероиды, фузобактерии и другие анаэробные бактерии (5%).
    4. 4 Другие кокки и грибы (в малом количестве).
    5. 5 Эпителий (немного, его количество зависит от фазы менструального цикла).
    6. 6 Лейкоциты (до 10 клеток).

    Такое соотношение микроорганизмов способно длительно поддерживать слабокислую среду, позволяет бороться с патогенными бактериями, обеспечивает естественное увлажнение и местный иммунитет. Состояние микрофлоры влагалища оценивается с помощью лабораторных методов и имеет свою условную классификацию.

    2. Степени чистоты влагалища

    Понятие о степенях чистоты было введено для того, чтобы своевременно выявить женщин из группы риска по воспалительным заболеваниям половых органов (вагинит, цервицит, эндометрит и так далее). Об этом подробнее можно прочитать в другой нашей статье (). Их выделяют на основании результатов :

    1. 1 Первая степень (второе название — нормоценоз): кислая среда. Нормальное количество лактобактерий, немного клеток эпителия, кокки отсутствуют. Встречается редко, как правило, наблюдается сразу после лечения, применения антибиотиков.
    2. 2 Вторая степень: кислая среда. Число лактобактерий несколько снижено, появляются лейкоциты (до 10) и мелкие диплококки. Количество кокков незначительное (один или два плюса).
    3. 3 Третья степень: среда становится слабокислой или щелочной. Количество палочек Додерляйна значительно ниже нормы, много эпителия, лейкоциты 10-30, кокковая или бациллярная флора преобладает, может обнаруживаться мицелий грибков. Это состояние и называют дисбиозом (дисбактериозом). Таким женщинам необходимо наблюдаться и вовремя получать лечение.
    4. 4 Четвёртая степень: щелочная среда. Лактобациллы могут вовсе отсутствовать, большое количество клеток эпителия, лейкоцитов (выше нормы), много кокков или других патогенных бактерий. Эта степень соответствует вагиниту, следовательно, лечение женщины обязательно.

    По мере сдвига pH в щелочную сторону меняется качество и количество флоры. Постепенно уменьшается уровень ацидофильных палочек, размножаются кокки, затем присоединяются грибы и другие бактерии.

    Щелочная среда губительна для палочек Додерляйна, что приводит к развитию .

    Стоит отметить, что в нормальных мазках могут встречаться следующие микроорганизмы: гемолитический стрептококк, золотистый, эпидермальный и сапрофитный стафилококк, пептококки, микрококки, зелёный стрептококк и другие. Все они в небольшом количестве не представляют угрозы для здоровья и являются условно-патогенными представителями влагалищной флоры.

    При 3-4 степени чистоты влагалища чаще всего можно обнаружить следующие виды кокков:

    1. 1 Стрептококки. Как уже говорилось выше, эти микроорганизмы допускаются в небольшом количестве, но усиленное их размножение приводит к возникновению воспалительного процесса — вагиниту.
    2. 2 Энтерококк фекальный. Часто встречается в кишечнике, при попадании в мочеполовые пути способен вызывать цистит или кольпит. Обнаружение его в мазках в большом количестве говорит о нарушении правил интимной гигиены, в том числе и во время секса.
    3. 3 Стафилококк – условно-патогенный микроорганизм, в норме обитающий на коже. При усиленном его размножении способен вызвать серьёзное воспаление с поражением наружных и внутренних половых органов.
    4. 4 встречается при с нарушением нормального состава микрофлоры слизистой.

    Существуют и другие кокки, они обычно вызывают .

    Важно! Если в гинекологическом мазке выявлен золотистый стафилококк, то есть вероятность его обнаружения и на слизистых верхних дыхательных путей (ротоглотка, полость носа).

    3. Причины появления кокков в гинекологическом мазке

    Кокковая флора в мазке у женщин может наблюдаться по нескольким причинам:

    • Несоблюдение женщиной правил личной гигиены. Сюда можно отнести неправильный и нерегулярный уход за половыми органами, редкая смена нижнего белья, постоянное использование ежедневных прокладок, применение щелочного мыла.
    • Длительное бесконтрольное употребление антибиотиков.
    • Частая смена половых партнёров, отказ от барьерных методов контрацепции, неправильное чередование анального, орального и вагинального секса в пределах одного полового акта, несоблюдение правил гигиены секса.
    • Злоупотребление спринцеваниями, особенно с антисептиками (вымывание нормальной микрофлоры).
    • Начало сексуальной жизни до 15 лет, отсутствие грамотности в плане интимной гигиены.
    • Гормональные изменения у женщин в период менопаузы, при беременности, нарушениях менструального цикла.
    • Общие соматические заболевания, хронические инфекции, прием глюкокортикоидов, которые ослабляют иммунитет.
    • Механическое повреждение слизистой оболочки (нарушение естественной барьерной функции).

    4. Какие симптомы могут наблюдаться?

    Активное размножение кокковой флоры рано или поздно приведёт к появлению клинических симптомов заболевания. Признаки воспалительного процесса во влагалище неспецифичны, то есть по ним нельзя определить, какие именно кокки размножаются в половых путях.

    Изменение состава микрофлоры женщина может заподозрить по следующим симптомам:

    • — эти симптомы могут отсутствовать.
    • Изменение характера (жёлтые, белые, серые или зеленоватые, обильные, густые).
    • во время полового акта и в нижних отделах живота.
    • , но может и отсутствовать.

    Симптомы кольпита достаточно яркие, не заметить их невозможно. Если игнорировать признаки заболевания, то инфекция может привести к следующим осложнениям:

    1. 1 Неспецифический цервицит (воспаление слизистой оболочки шейки матки).
    2. 2 , (появляются при снижении местного или общего иммунитета).
    3. 3 , часто развиваются на фоне , имеют хроническое течение с частыми рецидивами. Они связаны с половым актом, при котором происходит занос флоры из половых путей в уретру.
    4. 4 Присоединение патогенной флоры ( ,). Нарушение микрофлоры способствует при наличии инфицированного полового партнера.
    5. 5 Осложнения нормальной беременности.

    5. Мазки во время беременности

    В последнее время число воспалительных заболеваний и дисбиоза половых органов у беременных женщин увеличивается.

    Это может быть связано с бесконтрольным приемом некоторых антибиотиков, гормонов (контрацепция перед планированием или для лечения бесплодия), неправильным питанием, образом жизни, снижением иммунитета. Появление кокковой флоры в мазках у беременных резко повышает вероятность присоединения патогенной флоры, чему способствуют:

    • Изменение гормонального фона.
    • Ослабление местного иммунитета на фоне вынашивания ребёнка.

    Активное размножение условно-патогенных бактерий влечёт за собой развитие воспаления слизистой влагалища, шейки матки, мочевого пузыря. Опасность их заключается в повышении риска внутриутробной инфекции с задержкой развития плода, невынашивания и других осложнений.

    6. Методы диагностики

    Выявление кокков во влагалище у женщин возможно с помощью трех лабораторных анализов: , теста «Фемофлор» в модификации и бакпосева.

    Чаще всего у женщин используется простой мазок. Забор материала для исследования проводится из 2 или 3 точек: слизистая заднего свода влагалища, шейки матки и иногда уретры.

    Перед взятием материала не следует спринцеваться, применять свечи с антисептиками, принимать антибиотики, заниматься сексом, так как результат будет искажён.

    Биоматериал наносится на стерильные стёкла и изучается под микроскопом. При необходимости делается посев на питательные среды с определением чувствительности к антибиотикам.

    Иногда исследования лишь мазков на флору бывает недостаточно для постановки диагноза, поэтому прибегают к дополнительным обследованиям (Фемофлор, ПЦР в режиме реального времени, УЗИ, PAP-тест, кольпоскопия и др.).

    7. Препараты для лечения

    Лечение зависит от характера выявленной микрофлоры, симптомов заболевания и общего состояния женщины. При обнаружении большого количества кокков и лейкоцитов в мазке показана местная терапия в виде вагинальных свечей, овулей и капсул:

    1. 1 Гексикон (хлоргексидин в виде свечей).
    2. 2 Флуомизин (деквалиния хлорид).
    3. 3 Тержинан, Полижинакс.
    4. 4 Клиндамицин.
    5. 5 Макмирор (нифурантел).
    6. 6 Нео-Пенотран.
    7. 7 Бетадин (сейчас используется все реже, часто вызывает неприятные ощущения, зуд, жжение).
    8. 8 Местные антисептики в растворах — Мирамистин, Хлоргексидин.

    При тяжелом воспалительном процессе назначаются системные антибиотики: цефтриаксон, цефиксим, амоксиклав и др.

    Дополнительно могут быть назначены средства для восстановления нормальной вагинальной микрофлоры. Полноценных исследований по их применению не проводилось, однако этот вопрос активно изучается. Пробиотики не показаны при молочнице, так как могут спровоцировать ее рецидив.

    Местные пробиотики в виде вагинальных свечей или таблеток:

    1. 1 Вагинорм-С с аскорбиновой кислотой закисляет среду влагалища и нормализует состав микрофлоры, используют по 1 таблетке вагинально перед сном 6 дней.
    2. 2 Ацилакт с живыми ацидофильными бактериями по 1 свече 2 раза за день 7-10 дней.
    3. 3 Лактонорм по 1 вагинальной капсуле 2 раза в день 7 дней.

    После лечения повторно берутся мазки для контроля эффективности терапии. При отсутствии эффекта назначаются альтернативные схемы или продлевается основной курс антибиотиков в виде вагинальных форм.

    Лечиться можно амбулаторно, в домашних условиях. Из народных средств могут быть рекомендованы сидячие ванночки с ромашкой, календулой, раствором фурацилина.

    8. Профилактика

    Для предупреждения нарушений баланса микрофлоры половых путей нужно по возможности устранить все провоцирующие факторы:

    • Устранить гормональный дисбаланс (ЗГТ при климаксе, оральные контрацептивы по показаниям).
    • Соблюдать ежедневную интимную гигиену, а также во время менструации и секса. Отказаться от спринцеваний без назначения врача.
    • Использовать презервативы.
    • Вести здоровый образ жизни, быть активной, заниматься спортом или лечебной гимнастикой, правильно питаться, избегать частого употребления антибиотиков, беречь свой организм от инфекций.
    • Одним из способов профилактики также является регулярное посещение гинеколога и лечение хронических заболеваний не только половой системы, но и других органов.

Мазок на степень чистоты | Клинико-диагностические лаборатории «ОЛИМП»

Мазок – это метод обследования, при котором исследуемый материал берется с поверхности слизистой оболочки. Целью анализа является оценка состава микрофлоры и выявления воспалительных заболеваний.

Забор производится с трех участков: с мочеиспускательного канала, с влагалища и шейки матки. Материал с данных участков обозначается на предметном стекле буквами «U», «V»  и «C» соответственно.

В половые органы женщины заселены нормальной флорой – микроорганизмами, не приносящие  вреда организму, кроме того, они способствуют задержке развития условно-патогенных микробов, которые становятся причиной воспаления при определенных условиях (не относятся к половым инфекциям). Самой полезной флорой является палочка Дедерлейна (лактобацилла), помогающая «очищать» половые органы от различных возбудителей. Определение качественного и количественного взаимоотношения флоры – является важным этапом в постановке диагноза и определения тактики лечения.

Оценка стояния естественной флоры имеет в своей классификации четыре степень чистоты влагалища:

1 степень – в мазке эпителиальные клетки и нормальное количество лактобацилл, рН – кислая;

2 степень – небольшое количество лейкоцитов, лактобацилл меньше, присутствуют грамположительные диплококки. рН – остается кислой;

3 степень – повышенное количество клеток эпителия и лейкоцитов, снижение лактобацилл, множество кокковых бактерий, рН – слабокислая или щелочная;

4 степень – в большом количестве эпителий и лейкоциты, гноеродные микроорганизмы, отсутствие лактобацилл, рН – щелочная.

Что может быть обнаружено в мазке:

Лейкоциты – небольшое количество обнаруживается в норме, так как эти клетки необходимы для защиты организма от микробов. Лейкоциты свыше нормы — признак воспалительного процесса.

Эпителий — также в небольшом количестве присутствует в биоматериале. Его отсутствие свидетельствует о гормональном дисбалансе у женщины: дефицит женских эстрогенов, избыток мужского тестостерона. Эпителий в большом количестве – один из признаков воспалительного процесса. Количество также зависит от фазы менструального цикла.

Слизь – продуцируется железами влагалища,  обнаружение слизи в уретре  говорит о воспалении в мочевыводящих путях.

Эритроциты – красные кровяные тельца, могут присутствовать в зависимости от фазы менструального цикла.  Если их число превышает допустимую нормы, то предполагается травматизация слизистой влагалища, эррозивные процессы или воспаление.

Микрофлора – преобладание тех или иных неидентифицированных микроорганизмов: кокки, палочки…

Атипичные клетки —   свидетельствуют о предраковом состоянии.

Ключевые клетки —  клетки эпителия, «склеенные» гарднереллами или другими микробами. Подобные клетки наблюдаются при снижении иммунитета, при гарднереллезе.

Гарднереллы — мелкие бациллы в мазке. В норме могут присутствовать в небольшом количестве. Повышенное количество (при дисбактериозе влагалища) этих бактерий приводит к бактериальному вагинозу.

Кандида —  грибок, как и гарднереллы, присутствует в небольшом количестве у здоровых женщин. Если лактобактерий становится меньше, чем кандид, то развивается вагинальный кандидоз (в народе— «молочница»). Основная причина  увеличения кандид — снижение иммунитета, в том числе при беременности, или при приеме антибиотиков.

Кокки — шарообразные бактерии, которые бывают как условно-патогенными (стафилококк), так и патогенными (гонококк).

Гонококк – возбудитель гонореи. Может поражать не только влагалище, но и мочеиспускательный канал, маточные трубы и прямую кишку. Относятся к половой инфекции

Стафилококк — при благоприятных для него условиях (снижение иммунитета) вызывает стойкое воспаление.

Стрептококк —  бактерия, которая обитает в небольшом количестве в желудочно-кишечном тракте, в дыхательных путях, а также в полости рта и носа. В единичном количестве стрептококки в мазке расцениваются как норма. Увеличение концентрации стрептококка приводит к неспецифическому воспалению

Энтерококк – естественный обитатель микрофлоры ЖКТ. Энтерококк в большом количестве указывает на воспаления мочеполовой системы или органов малого таза.

Проблема заключается в том, что этим микроорганизмам не всегда уделяется должное внимание и лечится только половая инфекция, в то время как у стафилококков, стрептококков и энтерококков  развивается устойчивость к антибиотикам. КДЛ «ОЛИМП» рекомендует при обнаружении подобной микрофлоры выполнять анализ «бакпосев соскоба из влагалища с определением чувствительности к антибиотикам», который позволяет подобрать оптимальное медикаментозное лечение.

Трихомонада.  Мазок на инфекции не всегда выявляет трихомонаду, так как эта бактерия может иметь измененные формы. Чтобы подтвердить ее наличие, делают бактериологический посев.

Аромат желанной женщины притягателен для сексуального партнера, если это запах здорового тела. За его уникальный букет отвечают не только феромоны, но и… Вагинальные лактобактерии – палочки Дедерлейна

 

Знаете ли вы, что в некоторых экваториальных племенах Южной Америки много тысяч лет для мужчин существует сексуальное табу на близость с женщинами, которые, по выражению аборигенов, не пахнут здоровьем? Этот древний запрет – своеобразный залог их выживания. И его секрет кроется в палочках Дедерлейна!

 

Собирательное понятие

Сразу уточним, что «палочки Дедерлейна» – собирательное понятие, ведь речь идет об аэробных и анаэробных лактобактериях (лат. Lactobacillus – лактобациллы).

Во влагалище женщины могут обитать около 135 видов лактобатерий. Они делятся на 3 группы по доминирующей функции, поскольку некоторые разновидности палочек Дедерлейна выполняют несколько функций.

1 группа – это виды, вырабатывающие перекись водорода (L. acidophilus, L. crispatus, L. gasseri, L. johnsonii, L. vaginalis).

2 группа – виды, производящие молочную кислоту (L. salivarius, L. johnsonii, L. acidophilus, L. jensenii).

3 группа – виды, которые прикрепляются к клеткам бактерий или эпителия влагалища (L. agilis, L. jensenii, L. Johnsonii, L. ruminus).

 

Названием «лактобактерии» эти микроорганизмы обязаны
своей способности превращать лактозу (сахар) в молочную кислоту.

 

Микрофлора = 95% лактобактерий

Влагалище женщины имеет свой микробиоценоз – устойчивое сообщество микроорганизмов. В норме 1 мл вагинального секрета содержит около 110 микроорганизмов, подавляющая часть которых – лактобактерии. Они поддерживают необходимую молочную среду влагалища и препятствуют размножению патогенной микрофлоры.

Так почему же во влагалище преобладают именно палочки Дедерлейна?

 

ОСНОВНЫЕ СОСТАВЛЯЮЩИЕ НОРМАЛЬНОЙ МИКРОФЛОРЫ
ВЛАГАЛИЩА ЗДОРОВОЙ ЖЕНЩИНЫ ДЕТОРОДНОГО ВОЗРАСТА

перекисьобразующие лактобактерии – 85%
бифидумбактерии – 10%
пептострептококки – 5%

 

Питательная среда

Количество и активность лактобактерий во влагалище прямо контролируются женскими половыми гормонами – эстрогенами и прогестероном.

Эстрогены способствуют накоплению в эпителии влагалища гликогена – питательного вещества для палочек Дедерлейна.

Во второй фазе менструального цикла, когда начинает активно вырабатываться прогестерон, клетки эпителия отслаиваются, распадаются, и из них начинает высвобождаться гликоген. Это очень важный момент, ведь для лактобактерий наступает время «насыщения». А это значит, что у них хватит сил для защиты своей среды обитания – влагалища – от непрошенных «гостей».

 

Невидимые хранители

Палочки Дедерлейна – интимные «ангелы-хранители» каждой женщины.

ЛАКТОБАКТЕРИИ ПРОИЗВОДЯТ молочную кислоту, обеспечивающую во влагалище кислую среду. В норме кислотность влагалища у женщины колеблется в пределах от 3,8 до 4,5 pH. Это и есть тот самый кислотный барьер, препятствующий заселению и размножению патогенных микроорганизмов – бактерий и грибов.

ЛАКТОБАКТЕРИИ УЧАСТВУЮТ в… эволюционном отборе, ведь слабые и больные сперматозоиды погибают в кислой среде влагалища, а здоровые и крепкие – нет.

ЛАКТОБАКТЕРИИ ВЫРАБАТЫВАЮТ перекись водорода – универсальный природный антисептик, обеспечивая таким образом дополнительную защиту репродуктивных органов от патогенных микроорганизмов.

ЛАКТОБАКТЕРИИ ПРОДУЦИРУЮТ эндобиотики – вещества, действующие подобно антибиотикам. Именно палочки Дедерлейна вырабатывают, например, лизоцимы – антимикробные агенты, обладающие адгезивными («липкими») свойствами. Прилепляясь к патогенным бактериям, лизоцимы заставляют их жесткую клеточную оболочку лопаться под собственным внутренним давлением. Также лизоцимы эффективно разрушают клеточные стенки дрожжей.

ЛАКТОБАКТЕРИИ ИНИЦИИРУЮТ активность макрофагов, которые впоследствии уничтожают всевозможные патологические вещества, попавшие в организм. К примеру, макрофаги «поедают» чужие бактерии и простейших.

ЛАКТОБАКТЕРИИ УЧАСТВУЮТ в синтезе специфических антител и биологически активных веществ. Взаимодействуют они и с лейкоцитами – белыми кровяными клетками, которые служат для защиты местного и общего иммунитета в целом.

 

Норма кислотности женского влагалища – от 3,8 до 4,5 рН.
Повышенная кислотность влагалища может быть одним из симптомов
дрожжевой инфекции – вагинального кандидоза.

 

Враги палочек Дедерлейна

К нарушению баланса влагалищной микрофлоры приводит немало причин.

Неправильное питание. Чаще всего – недостаток в рационе кисломолочных продуктов, которые являются источником молочных бактерий для организма.

Несоблюдение правил гигиены. Неправильное или недостаточное проведение гигиенических процедур, пользование общим полотенцем для интимных зон, несвоевременная смена тампонов и прокладок, ношение синтетического нижнего белья, стрингов, что является настоящей «атакой» на индивидуальный микробиоценоз.

Переохлаждение организма, которое может привести к снижению общего и местного иммунитета.

Гормональные нарушения, которые приводят к изменениям клеток слизистой влагалища, что, в свою очередь, становится причиной снижения количества лактобактерий и усиленного роста патогенных возбудителей.

Инфекция. Нарушение микрофлоры влагалища способны вызвать не только инфекции, передающиеся половым пyтем, но и любые инфекционно-воспалительные заболевания органов малого таза.

Прием антибиотиков. Вместе с болезнетворными микробами антибиотики уничтожают и представителей естественной флоры влагалища, что может повлечь за собой дисбактериоз, вагинит, молочницу (кандидозный кольпит, влагалищный кандидоз) и т. п.

 

«Портрет» молочницы

Симптомы данного заболевания у каждой женщины индивидуальны – все зависит от уровня иммунитета и сопутствующих заболеваний. Но самые характерные из них: нарастающие зуд и жжение наружных половых органов, которым сопутствуют белые, творожистые выделения.

Если говорить о мужчинах, то у 50–70% из них был один эпизод данного заболевания на протяжении жизни. Признаки молочницы у представителей сильного пола не столь явные, хотя иногда их тоже беспокоит зуд и болезненность наружных половых органов, а на головке полового члена появляется белесоватая сыпь. В любом случае больному необходимо посетить уролога или венеролога.

 

Дрожжеподобные грибы рода Candida в чрезмерных концентрациях провоцируют заболевание половых органов, в просторечии именуемое молочницей. Научное название болезни – влагалищный кандидоз (по названию дрожжеподобных грибков – Candida albicans).

СИМПТОМЫ МОЛОЧНИЦЫ
– Зуд и жжение в области гениталий.
– Обильные выделения творожистой консистенции с кислым запахом.
– Боли при мочеиспускании.
– Боли во время полового акта.

 

Обратитесь к гинекологу

Если у женщины появились характерные симптомы, описанные выше, ей необходимо нанести визит гинекологу. Врач назначит бактериальный посев выделений и на основании результатов выберет соответствующую схему лечения.

Сначала нужно будет устранить причину, приведшую к размножению грибков (отменить, например, гормональные препараты или изменить рацион питания). Затем гинеколог назначит соответствующие противогрибковые препараты.

 

грамположительных бактерий — StatPearls

Непрерывное обучение

Грамположительные организмы имеют сильно изменчивые паттерны роста и устойчивости. В рамках проекта SCOPE (Эпиднадзор и борьба с патогенами эпидемиологического значения) было обнаружено, что у лиц с основным злокачественным новообразованием на грамположительные микроорганизмы приходилось 62 процента всех инфекций кровотока в 1995 году и 76 процентов в 2000 году, в то время как грамотрицательные микроорганизмы составляли 22 процента. в 1995 г. и 14% в 2000 г.В этом упражнении рассматривается оценка и лечение грамположительных бактериальных инфекций, а также объясняется роль межпрофессиональной группы в улучшении ухода за больными пациентами.

Цели:

  • Объяснить, как оценить грамположительную бактериальную инфекцию.

  • Выявление распространенных инфекций, вызываемых грамположительными бактериями.

  • Опишите стратегии лечения грамположительных бактериальных инфекций.

  • Опишите стратегии межпрофессиональной группы по улучшению координации помощи и коммуникации для оказания качественной помощи пациентам с грамположительными бактериальными инфекциями.

Заработайте кредиты на непрерывное образование (CME / CE) по этой теме.

Введение

Медицинским работникам необходимо понимать важное различие между грамположительными и грамотрицательными бактериями. Грамположительные бактерии — это бактерии, которые классифицируются по цвету, который они приобретают при окрашивании.Ганс Христиан Грам разработал метод окрашивания в 1884 году. В методе окрашивания используется краситель кристаллического фиолетового, который удерживается толстой клеточной стенкой пептидогликана, обнаруженной у грамположительных организмов. Эта реакция придает грамположительным организмам синий цвет при просмотре под микроскопом. Хотя грамотрицательные организмы обычно имеют внешнюю мембрану, они имеют более тонкий слой пептидогликана, который не удерживает синий краситель, используемый в начальном процессе умирания. Другая информация, используемая для различения бактерий, — это форма.Грамположительные бактерии включают кокки, бациллы или ветвящиеся нити.

Этиология

Грамположительные кокки включают Staphylococcus (каталазоположительные), растущие группами, и Streptococcus (каталазонегативные), которые растут цепочками. Далее стафилококки подразделяются на коагулазо-положительные ( S. aureus ) и коагулазо-отрицательные ( S. epidermidis и S. saprophyticus ) виды. Бактерии Streptococcus подразделяются на Strep.pyogenes (группа А), Strep. agalactiae (Группа B), энтерококки (Группа D), Strep viridans и Strep pneumonia .

Грамположительные палочки (палочки) подразделяются в зависимости от их способности продуцировать споры. Bacillus и Clostridia являются спорообразующими стержнями, а Listeria и Corynebacterium — нет. Спорообразующие стержни, которые производят споры, могут выжить в окружающей среде в течение многих лет. Также ветвящиеся стержни филаментов охватывают Nocardia и actinomyces.

Грамположительные организмы имеют более толстую клеточную стенку пептидогликана по сравнению с грамотрицательными бактериями. Это полимер толщиной от 20 до 80 нм, в то время как слой пептидогликана грамотрицательной клеточной стенки имеет толщину от 2 до 3 нм и покрыт внешней липидной двухслойной мембраной.

Эпидемиология

Смертность от инфекций кровотока увеличилась на 78% всего за два десятилетия [1]. Грамположительные организмы имеют сильно изменчивый характер роста и устойчивости. Проект SCOPE (Эпиднадзор и борьба с патогенами эпидемиологического значения) обнаружил, что грамположительные микроорганизмы у тех, у кого есть основная злокачественная опухоль, составляли 62% всех инфекций кровотока в 1995 г. и 76% в 2000 г., тогда как грамотрицательные микроорганизмы составляли 22% 14% заражений за эти годы.[2]

Патофизиология

Грамположительные кокки:

Staphylococcus aureus представляет собой скопления грамположительных, каталазоположительных, коагулазо-положительных кокков. S. aureus может вызывать воспалительные заболевания, включая кожные инфекции, пневмонию, эндокардит, септический артрит, остеомиелит и абсцессы. S. aureus также может вызывать синдром токсического шока (TSST-1), синдром ошпаренной кожи (эксфолиативный токсин и пищевое отравление (энтеротоксин).

Staphylococcus epidermidis — грамположительный, каталазоположительный, коагулазонегативный кокки в скоплениях и чувствителен к новобиоцину. S. epidermidis обычно поражает протезы и внутривенные катетеры, образуя биопленки. Staphylococcus saprophyticus устойчив к новобиоцину и представляет собой нормальную флору половых путей и промежности. S. saprophyticus является второй по частоте причиной неосложненной инфекции мочевыводящих путей (ИМП).

Streptococcus pneumoniae — это грамположительные инкапсулированные ланцетообразные диплококки, чаще всего вызывающие средний отит, пневмонию, синусит и менингит. Streptococcus viridans состоит из Strep . mutans и Strep mitis , обнаруженный в нормальной флоре ротоглотки, обычно вызывает зубной перенос и подострый бактериальный эндокардит (Strep. sanguinis).

Streptococcus pyogenes — это грамположительная группа кокков, которые могут вызывать гнойные инфекции (фарингит, целлюлит, импетиго, рожа), токсигенные инфекции (скарлатина, некротический фасциит) и иммунологические инфекции (гломерулонефрит и ревматизм).Титр ASO обнаруживает инфекций S. pyogenes .

Streptococcus agalactiae — это грамположительные кокки группы B, которые колонизируют влагалище и обнаруживаются в основном у младенцев. Беременным женщинам необходимо пройти скрининг на стрептококки группы B (СГБ) на сроках от 35 до 37 недель беременности.

Энтерококки — это грамположительные кокки группы D, обнаруженные в основном в кишечной флоре и способные вызывать инфекции желчных путей и ИМП. Устойчивые к ванкомицину энтерококки (VRE) являются важной причиной внутрибольничных инфекций.

грамположительные палочки:

Clostridia — это грамположительные спорообразующие палочки, состоящие из C. tetani , C. botulinum , C. perfringens и C. difficile . C. difficile часто является вторичным по отношению к применению антибиотиков (клиндамицин / ампициллин), применению ИПП и недавней госпитализации. Лечение включает, прежде всего, пероральный прием ванкомицина.

Bacillus anthracis — это грамположительный спорообразующий стержень, который вырабатывает токсин сибирской язвы, в результате чего образуется язва с черным струпом. Bacillus cereus — это грамположительная палочка, которую можно получить из спор, выживших в недостаточно проваренном или повторно нагретом рисе. Симптомы включают тошноту, рвоту и водянистую диарею без крови.

Corynebacterium diphtheria — это грамположительный стержень в форме булавы, который может вызывать псевдомембранозный фарингит, миокардит и аритмию. Анатоксиновые вакцины предотвращают дифтерию.

Listeria monocytogenes — это грамположительная палочка, полученная при употреблении в пищу холодных мясных деликатесов и непастеризованных молочных продуктов или вагинальной передачи во время родов. Listeria может вызывать неонатальный менингит, менингит у пациентов с ослабленным иммунитетом, гастроэнтерит и сепсис. В курс лечения входит ампициллин.

История и физика

Важно идентифицировать пациентов с сепсисом и заказать необходимые посевы крови и лабораторные анализы.

Физический

Оценка

При подозрении на инфекцию грамположительных организмов полезны следующие лабораторные исследования:

Лечение / управление

Пенициллин был первым антибиотиком, когда-либо введенным во время Второй мировой войны Александром Флемингом в 1928 году.Пенициллин не распространяется на Staph или Enterococcus, но используется в основном при стрептококковых инфекциях. Устойчивые к пенициллиназе микроорганизмы (нафциллин, оксациллин, клоксациллин, диклоксациллин) включают Staph (MSSA) и Strep. Антипсевдомонадные пенициллины включают пиперациллин и тикарциллин, эффективные против грамположительных, грамотрицательных, псевдомонад и анаэробов. Карбапенемы охватывают грамположительные, грамотрицательные и анаэробы. [3] [4] [5]

Триметоприм / сульфаметоксазол, клиндамицин и доксициклин — пероральные антибиотики, которые используются при легкой и умеренной инфекции MRSA.Важно отметить, что триметоприм / сульфаметоксазол увеличивает уровни варфарина, что приводит к увеличению INR. Ванкомицин, линезолид, даптомицин и тигециклин охватывают умеренный и тяжелый внебольничный и внутрибольничный MRSA. Ванкомицин требует почечной дозировки с минимальным уровнем от 15 до 20. Линезолид является вариантом, если у пациента аллергия на ванкомицин. Общий анализ крови необходимо проверять еженедельно, чтобы избежать подавления костного мозга, нейтропении, тромбоцитопении и анемии. Линезолид, даптомицин и тигециклин являются вариантами лечения устойчивых к ванкомицину энтерококков.[6] [7] [8]

Прогноз

Прогноз после заражения грамположительными микроорганизмами варьируется. Самый высокий уровень смертности у пожилых людей с подавленной иммунной системой и меньшим физиологическим резервом.

Улучшение результатов команды здравоохранения

Медицинские работники, включая врачей, медсестер и фармацевтов, должны знать факторы риска, чтобы правильно лечить пациентов выбранными антибиотиками. Фармацевтам необходимо точно контролировать минимальные уровни ванкомицина, чтобы избежать смертности у пациентов со Staph aureus.Им также необходимо пересмотреть дозировку и взаимодействие лекарств и посоветовать пациентам прекратить прием всех прописанных антибиотиков. Медсестры по инфекционному контролю оценивают внутрибольничные инфекции и проводят соответствующую политику. Межпрофессиональный подход даст наилучшие результаты. [Уровень 5]

Результаты. Скрининг на наличие метициллин-резистентных факторов риска Staphylococcus aureus (MRSA) усиливает инфекционный контроль. К факторам риска MRSA относятся пациенты старше 65 лет, наличие мочевого катетера, предшествующее лечение антибиотиками в течение последних трех месяцев, травмы и пациенты, поступившие из стационара на длительный срок.[9] [Уровень 5]

Дополнительное образование / Вопросы для повторения

Рис.

Окраска по Граму Staphylococcus aureus. Предоставлено Скоттом Джонсом, MD

Ссылки

1.
Отчет национальной системы надзора за внутрибольничными инфекциями (NNIS), сводка данных с января 1992 г. по апрель 2000 г., выпущенный в июне 2000 г. Am J Infect Control. 2000 декабрь; 28 (6): 429-48. [PubMed: 11114613]
2.
Wisplinghoff H, Seifert H, Wenzel RP, Edmond MB. Современные тенденции в эпидемиологии внутрибольничных инфекций кровотока у пациентов с гематологическими злокачественными новообразованиями и солидными новообразованиями в больницах США.Clin Infect Dis. 01 мая 2003 г .; 36 (9): 1103-10. [PubMed: 12715303]
3.
Риги Э., Карнелутти А., Бассетти М. Текущая роль оксазолидинонов и липогликопептидов при инфекциях кожи и мягких тканей. Curr Opin Infect Dis. 2019 Апрель; 32 (2): 123-129. [PubMed: 30664028]
4.
Zamoner W, Prado IRS, Balbi AL, Ponce D. Дозирование, мониторинг и токсичность ванкомицина: критический обзор клинической практики. Clin Exp Pharmacol Physiol. 2019 Апрель; 46 (4): 292-301. [PubMed: 30623980]
5.
Rogalla D, Bomar PA. StatPearls [Интернет]. StatPearls Publishing; Остров сокровищ (Флорида): 10 июля 2020 г. Listeria Monocytogenes. [PubMed: 30521259]
6.
Rostkowska KA, Szymanek-Pasternak A, Simon KA. Спонтанный бактериальный перитонит — терапевтические вызовы в эпоху повышения лекарственной устойчивости бактерий. Clin Exp Hepatol. 2018 декабрь; 4 (4): 224-231. [Бесплатная статья PMC: PMC6311748] [PubMed: 30603669]
7.
Gashaw M, Berhane M, Bekele S, Kibru G, Teshager L, Yilma Y, Ahmed Y, Fentahun N, Assefa H, Wieser A, Gudina EK , Али С.Появление бактериальных изолятов с высокой лекарственной устойчивостью у пациентов с инфекциями, связанными с оказанием медицинской помощи, в медицинском центре Университета Джиммы: перекрестное исследование. Антимикробная защита от инфекций. 2018; 7: 138. [Бесплатная статья PMC: PMC6245755] [PubMed: 30479751]
8.
Bolia IK, Tsiodras S, Chloros GD, Kaspiris A, Sarlikiotis T, Savvidou OD, Papagelopoulos PJ. Обзор новых схем лечения антибиотиками для лечения ортопедических инфекций. Ортопедия. 01 ноября 2018; 41 (6): 323-328.[PubMed: 30452066]
9.
Callejo-Torre F, Eiros Bouza JM, Olaechea Astigarraga P, Coma Del Corral MJ, Palomar Martínez M, Alvarez-Lerma F, López-Pueyo MJ. Факторы риска колонизации или инфицирования устойчивым к метициллину Staphylococcus aureus в отделениях интенсивной терапии и их надежность для прогнозирования MRSA при поступлении в ОИТ. Infez Med. 2016 Сентябрь 01; 24 (3): 201-9. [PubMed: 27668900]

Дифференциальные методы окрашивания — микробиология: лабораторный опыт

Просмотр бактериальных клеток

Микроскоп — очень важный инструмент в микробиологии, но есть ограничения, когда дело доходит до его использования для наблюдения за клетками в целом и бактериальными клетками в частности.Двумя наиболее важными проблемами являются разрешение и контраст. Разрешение — это ограничение, с которым мы ничего не можем поделать, поскольку большинство бактериальных клеток уже близки к пределу разрешения большинства световых микроскопов. Контраст, однако, можно улучшить, используя либо другой тип оптической системы, например, фазовый контраст или микроскоп для дифференциального интерференционного контраста, либо окрашивая клетки (или фон) хромогенным красителем, который не только добавляет контраст, но и дает им тоже цвет.

В микробиологии используется множество различных методов окрашивания и окрашивания. Некоторые включают одно пятно и всего несколько шагов, в то время как другие используют несколько пятен и более сложную процедуру. Прежде чем вы сможете начать процедуру окрашивания, клетки должны быть закреплены (размазаны) и зафиксированы на предметном стекле.

Бактериальный мазок — это просто небольшое количество культуры, растекающееся очень тонкой пленкой на поверхности предметного стекла. Чтобы предотвратить вымывание бактерий во время этапов окрашивания, мазок может быть химически или физически «прикреплен» к поверхности предметного стекла.Тепловая фиксация — это простой и эффективный метод, который достигается путем кратковременного пропускания предметного стекла через пламя горелки Бунзена, в результате чего биологический материал становится более или менее прочно прикрепленным к поверхности стекла.

Термофиксированные мазки готовы к окрашиванию. При простом окрашивании в мазок добавляются красители, которые либо притягиваются зарядом (катионный краситель, такой как метиленовый синий или кристаллический фиолетовый), либо отталкиваются зарядом (анионный краситель, такой как эозин или тушь). Катионные красители связывают бактериальные клетки, что хорошо видно на ярком фоне.Анионные красители отталкиваются клетками, поэтому клетки становятся яркими на окрашенном фоне. Примеры того и другого см. На рисунках 1 и 2.

Рисунок 1. Отрицательное окрашивание Cyptococcus neoformans , инкапсулированных дрожжей. Рисунок 2. Положительное окрашивание на золотистый стафилококк .

Вероятно, наиболее важной особенностью, которая становится очевидной при окрашивании бактериальных клеток, является их клеточная морфология (не путать с морфологией колоний, которая представляет собой появление бактериальных колоний на чашке с агаром).Большинство гетеротрофных и культивируемых бактерий имеют несколько основных форм: сферические клетки (кокки / кокки), палочковидные клетки (палочки / бациллы) или палочковидные клетки с изгибами или изгибами (вибрионы и спириллы соответственно). Существует большее разнообразие форм среди архей и других бактерий, встречающихся в экосистемах, отличных от человеческого тела.

Часто бактерии создают определенных клеток, которые образуются в результате бинарного деления бактериями в процессе их размножения. Договоренности особенно очевидны с неподвижными бактериями, потому что клетки имеют тенденцию оставаться вместе после завершения процесса деления.И форма, и расположение клеток являются характеристиками, которые можно использовать для различения бактерий. Наиболее часто встречающиеся формы бактерий (кокки и бациллы) и их возможное расположение показаны на рисунках 3 и 4.

Рисунок 3. Возможное расположение бактериальных клеток для кокков. Рисунок 4. Возможное расположение бактериальных клеток для бацилл.

Дифференциальные методы окрашивания

В микробиологии методы дифференциального окрашивания используются чаще, чем простые окрашивания, как средство сбора информации о бактериях.Методы дифференциального окрашивания, которые обычно требуют более одного окрашивания и нескольких этапов, называются таковыми, потому что они позволяют дифференцировать типы клеток или клеточные структуры. Самым важным из них является окраска по Граму. Другие методы дифференциального окрашивания включают окрашивание эндоспор (для выявления бактерий, образующих эндоспоры), кислотостойкое окрашивание (для отличия видов Mycobacterium от других бактерий), метахроматическое окрашивание для выявления гранул, накапливающих фосфаты, и окрашивание капсул (для идентификации инкапсулированные бактерии).Мы будем выполнять процедуры окрашивания по Граму и эндоспор в лаборатории и просматривать подготовленные слайды, которые выделяют некоторые другие клеточные структуры, присутствующие в некоторых бактериях.

Краска по грамму

Рисунок 5. Бактерии, окрашенные по Граму.

В 1884 году врач Ганс Кристиан Грам изучал этиологию (причину) респираторных заболеваний, таких как пневмония. Он разработал процедуру окрашивания, которая позволила ему идентифицировать бактерии в легочной ткани, взятой у умерших пациентов, как этиологический агент фатальной пневмонии.Хотя метод окрашивания по Граму мало помог в лечении болезни, он значительно упростил диагностику причины смерти человека при вскрытии. Сегодня мы используем технику окрашивания по Граму, чтобы помочь в идентификации бактерий, начиная с предварительной классификации на одну из двух групп: грамположительных или грамотрицательных .

Дифференциальный характер окраски по Граму основан на способности некоторых бактериальных клеток сохранять первичное окрашивание (кристаллический фиолетовый), сопротивляясь процессу обесцвечивания.Окрашивание по Граму включает четыре этапа. Сначала клетки окрашивают кристаллическим фиолетовым с последующим добавлением фиксирующего агента для окрашивания (йода). Затем применяется спирт, который выборочно удаляет пятно только с грамотрицательных клеток. Наконец, добавляется вторичный краситель, сафранин, который окрашивает обесцвеченные клетки в розовый цвет.

Хотя в то время Грам не знал этого, основное различие между этими двумя типами бактериальных клеток — это их клеточные стенки. Стенки грамотрицательных клеток имеют внешнюю мембрану (также называемую оболочкой), которая растворяется во время мытья спиртом.Это позволяет ускользнуть кристально-фиолетовому красителю. Только обесцвеченные клетки поглощают розовый краситель сафранин, что объясняет разницу в цвете между двумя типами клеток. По завершении процедуры окрашивания по Граму грамположительные клетки выглядят пурпурными, а грамотрицательные — розовыми.

При интерпретации мазка, окрашенного по Граму, необходимо также описать морфологию (форму) клеток и их расположение. На рисунке 5 представлены два различных типа бактерий, которые можно различить по реакции окрашивания по Граму, а также по их форме и расположению.Ниже опишите эти характеристики для обеих бактерий:

Грамположительные бактерии: Грамотрицательные бактерии:
Морфология
Расположение

Кислотостойкое пятно

Некоторые бактерии производят воскообразное вещество миколик кислоту , когда строят свои клеточные стенки.Миколиновая кислота действует как барьер, защищающий клетки от дегидратации, а также от фагоцитоза клетками иммунной системы хозяина. Этот восковой барьер также предотвращает проникновение пятен в клетку, поэтому окрашивание по Граму не работает с микобактериями, такими как Mycobacterium , которые являются патогенами людей и животных. Для этих бактерий используется метод окрашивания acid fast .

Рисунок 6. Кислотоустойчивые бациллы в мокроте.

Для проведения кислотостойкого окрашивания термофиксированный мазок заливают основным красителем карбол фуксином, а предметное стекло нагревают на водяной бане с паром.Тепло «плавит» восковую клеточную стенку и позволяет клеткам поглощать краситель. Затем слайду дают остыть и добавляют раствор кислоты и спирта в качестве обесцвечивающего средства. Клетки, которые являются «кислотоупорными» из-за миколовой кислоты в их клеточной стенке, сопротивляются обесцвечиванию и сохраняют первичное окрашивание. Все остальные типы клеток обесцвечиваются. Затем метиленовый синий используется в качестве контрастного красителя. В конце концов, кислотоустойчивые бактерии (КУБ) будут окрашены в ярко-розовый цвет, а все другие типы клеток станут синими.

Методы окрашивания для выделения определенных клеточных структур

Капсула : полисахаридная слизь, окружающая некоторые виды бактерий и несколько типов эукариотических микробов, лучше всего визуализируется при отрицательном окрашивании клеток. В этом методе бактерии сначала смешиваются с пятном, а затем капля смеси распределяется по поверхности предметного стекла в виде тонкой пленки. При использовании этого метода капсулы выглядят как прозрачный слой вокруг бактериальных клеток с темным фоном.

Metachromatic гранулы или другие интрацитоплазматические тельца : Некоторые бактерии могут содержать окрашенные тельца-хранилища. Одним из примеров является грамположительная палочка Corynebacterium , которая накапливает фосфат в структурах, называемых «волютин», или метахроматических гранулах, находящихся внутри клеточной мембраны. Для визуализации внутрицитоплазматических тел у бактерий используются различные методы окрашивания, которые часто дают ключ к идентификации при наблюдении в клетках.

Эндоспорное пятно

Эндоспоры — это спящие формы живых бактерий, и их не следует путать с репродуктивными спорами, продуцируемыми грибами. Эти структуры производятся несколькими видами грамположительных бактерий, почти всеми бациллами, в ответ на неблагоприятные условия окружающей среды. Две распространенные бактерии, продуцирующие эндоспоры, — это Bacillus или Clostridum . Оба живут в основном в почве и как симбионты растений и животных и производят эндоспоры, чтобы выжить в быстро и часто меняющейся среде.

Процесс эндоспоруляции (образование эндоспор) включает несколько этапов. После того, как бактериальная клетка реплицирует свою ДНК, образуются слои пептидогликана и белка, окружающие генетический материал. После полного формирования эндоспора высвобождается из клетки и может бездействовать в течение нескольких дней, недель или лет. Когда преобладают более благоприятные условия окружающей среды, эндоспоры прорастают и возвращаются к активной работе в качестве вегетативных клеток.

Зрелые эндоспоры обладают высокой устойчивостью к условиям окружающей среды, таким как тепло и химические вещества, что позволяет бактериям выжить в течение очень длительного времени.Эндоспоры, образовавшиеся миллионы лет назад, были успешно возвращены к жизни, просто обеспечив их водой и пищей.

Поскольку оболочка эндоспор очень устойчива к окрашиванию, был разработан специальный метод, чтобы их было легче увидеть в светлопольном микроскопе. Этот метод, названный endospore красителем , использует либо тепло, либо длительное время воздействия, чтобы побудить эндоспоры принять первичный краситель, обычно водорастворимый краситель, такой как малахитовый зеленый, поскольку эндоспоры проницаемы для воды.После этапа обесцвечивания, который удаляет краситель из вегетативных клеток в мазке, наносится контрастирующий сафранин для обеспечения цвета и контраста. При окрашивании этим методом эндоспоры становятся зелеными, а вегетативные клетки окрашиваются в розовый цвет, как показано на Рисунке 7.

Рисунок 7. Бактериальные клетки с эндоспорами, окрашенные методом окраски эндоспор. Рисунок 8. Бациллы с эндоспорами, просматриваемые с помощью фазово-контрастной микроскопии.

Хотя сами эндоспоры устойчивы к методу окрашивания по Граму, бактериальные клетки, захваченные в процессе создания этих структур, могут быть окрашены.В этом случае эндоспоры выглядят как четкие овальные или сферические области внутри окрашенной клетки. Эндоспоры также можно непосредственно наблюдать в клетках с помощью фазово-контрастной микроскопии, как показано на Рисунке 8.

Поскольку многие методы дифференциального окрашивания требуют нескольких этапов и длительного времени, мы не будем выполнять все методы дифференциального окрашивания, описанные выше.

Предварительно окрашенные слайды будут использоваться для визуализации бактериальных капсул, метахроматических гранул и кислотоустойчивых бацилл.Возьмите по одному слайду каждой из трех бактерий, перечисленных в таблице ниже. Просматривая эти слайды, обращайте внимание на «выделенные» структуры. У вашего изолята из окружающей среды может быть одна или несколько из этих клеточных функций, и умение распознавать их поможет в идентификации. Все это следует рассматривать с помощью масляной иммерсионной линзы объектива.

Бактерии Пятно Описание или эскиз ячеек с указанным признаком
Flavobacterium capsulatum Капсульное пятно
Corynebacterium diphtheriae Метиленовый синий (метахроматические гранулы)
Mycobacterium tuberculosis Кислотостойкое краситель

Пятно по грамму

Все процедуры окрашивания следует проводить над раковиной.Будет продемонстрирована процедура окрашивания по Граму, а ее обзор представлен в таблице 1.

Таблица 1. Процедура окрашивания по Граму.
Шаг Процедура Результат
Первичная окраска (кристально-фиолетовый) Добавьте несколько капель кристаллического фиолетового в мазок и оставьте на 1 минуту. Промойте предметное стекло водой. И грамположительные, и грамотрицательные клетки будут окрашены в пурпурный цвет кристаллическим фиолетовым красителем.
Протрава (йод) Добавьте несколько капель йода в мазок и оставьте на 1 минуту. Промойте предметное стекло водой. Йод «устанавливает» кристаллический фиолетовый цвет, поэтому оба типа бактерий останутся фиолетовыми.
Обесцвечивание (этанол) Добавьте капли этанола по одной по по по , пока сток не станет прозрачным.Промойте предметное стекло водой. Грамположительные клетки сопротивляются обесцвечиванию и остаются пурпурными. Краситель высвобождается из грамотрицательных клеток.
Контркрашивание (сафранин) Добавьте несколько капель сафранина в мазок и оставьте на одну минуту. Промойте предметное стекло водой и просушите салфеткой. грамотрицательные клетки будут окрашены сафранином в розовый цвет. Этот краситель не действует на грамположительные клетки, которые остаются фиолетовыми.

Доброволец с вашего лабораторного стола должен получить культуры бактерий, которые вы будете использовать в этой лаборатории, в соответствии с указаниями вашего инструктора.Одна из культур будет грамположительной бактерией, а другая — грамотрицательной. Ниже напишите названия бактерий, которые вы будете использовать, вместе с BSL для каждой культуры:

__________________________________________________________________________________

Возьмите два предметных стекла и приготовьте мазок каждой из двух бактериальных культур, по одному на предметное стекло, как показано. Дайте ПОЛНОСТЬЮ высохнуть на воздухе и закрепите при нагревании. Окрашивайте оба мазка методом окраски по Граму.Наблюдайте за предметными стеклами с помощью светового микроскопа при увеличении в 1000 раз и запишите свои наблюдения в таблице ниже.

Название культуры Реакция окрашивания по Граму Морфология клетки Композиция

Пятно по Граму «Заключительный экзамен»: приготовьте мазок, содержащий смесь грамположительных И грамотрицательных бактерий, добавив небольшое количество каждой бактерии в одну каплю воды на предметном стекле.Тепло зафиксируйте мазок и окрасите его по Граму. Вы должны быть в состоянии определить реакцию окрашивания по Граму, клеточную морфологию и расположение ОБЕИХ бактерий в этом смешанном мазке. Ваш преподаватель может попросить показать этот слайд и предложить конструктивный комментарий.

Эндоспорное пятно

Лишь несколько родов бактерий продуцируют эндоспоры, и почти все они являются грамположительными бациллами. Наиболее заметными являются виды Bacillus и Clostridium , которые естественным образом обитают в почве и являются обычными загрязняющими веществами на поверхности.Рост Clostridium spp. обычно ограничивается анаэробной средой; Bacillus spp. может расти как в аэробных, так и в анаэробных условиях. Эндоспорообразующие бактерии отличаются от других групп грамположительных бацилл и различаются по их эндоспорам.

Обзор процедуры окрашивания эндоспор представлен в таблице 2.

Таблица 2. Этапы процедуры окрашивания эндоспор.
Шаг Процедура Результат
Первичная окраска (малахитовый зеленый) Добавьте несколько капель малахитового зеленого в мазок и оставьте на 10 минут.Если пятно начинает высыхать, добавьте дополнительные капли. Вегетативные клетки немедленно поглощают первичную окраску. Эндоспоры устойчивы к окрашиванию, но со временем впитывают краситель.
Обесцвечивание (вода) Промойте предметное стекло под слабой струей воды в течение 10-15 секунд. После окрашивания эндоспоры остаются зелеными. Тщательное ополаскивание водой обесцвечивает вегетативные клетки.
Контркрашивание (сафранин) Добавьте несколько капель сафранина в мазок и оставьте на 1 минуту.Промойте предметное стекло и промокните насухо. Обесцвеченные вегетативные клетки принимают контрастное пятно и кажутся розовыми; эндоспоры светло-зеленые.

После окрашивания эндоспоры обычно выглядят как светло-зеленые овальные или сферические структуры, которые можно увидеть внутри или снаружи вегетативных клеток, которые выглядят розовыми.

Форма и расположение эндоспор внутри бактериальных клеток, а также то, расширяет ли спорангий (D) или не расширяет (ND) стороны клетки, являются важными характеристиками, которые помогают в дифференциации между видами (см. Рисунок 9) .

Рисунок 9
  1. Овальный, центральный, не растянутый (ND)
  2. Овальный, концевой, ND (и параспоральный кристалл)
  3. Овальный, концевой, растянутый (D)
  4. Овальный, центральный, D
  5. Сферический, концевой, D
  6. Овальный, боковой, D

Эндоспоры довольно устойчивы к большинству процедур окрашивания; однако в мазках с обычным окрашиванием они могут быть видны как «очертания» с чистым пространством внутри. Если вы наблюдаете «очертания» или то, что кажется «призраками» клеток в мазке, окрашенном по Граму, грамположительных бацилл, то также следует выполнить окрашивание эндоспор, чтобы подтвердить наличие или отсутствие эндоспор.

Волонтер из вашего лабораторного стола должен получить бактериальные культуры для окрашивания эндоспор в соответствии с указаниями вашего инструктора. Обратите внимание, что все это будут виды Bacillus . Приготовьте мазки и окрасьте каждый, используя технику окрашивания эндоспор. Посмотрите на слайды и отметьте форму и расположение эндоспоры, а также внешний вид спорангия (опухший или не опухший) в таблице ниже:

Название культуры Форма эндоспоры Расположение Спорангий

Кроме того, выберите ОДНУ из представленных выше культур и окрасите ее по Граму.Запишите свои результаты ниже в отведенных местах:

Название культуры, окрашенной по Граму: __________________________________________________

Реакция окрашивания по Граму и клеточная морфология: ______________________________________

Видны ли эндоспоры в мазке, окрашенном по Граму? _________________ Если вы видите эндоспоры, опишите, как они выглядят в препарате, окрашенном по Граму, и чем он похож и отличается от того, что вы видите в препарате, окрашенном по Граму.

Прямые мазки, окрашенные по граммам, при чтении и сообщении

Краткое содержание курса

Щелкните по ссылкам ниже, чтобы просмотреть выбранные страницы из этого курса.

  • Назначение окрашенного по Граму прямого мазка
  • Чтение и отчет о прямых мазках
      • Принцип определения пятен по Граму
      • Контрольные мазки
      • Макроскопическая оценка мазка
      • Тонкие мазки
      • Тонкие мазки
      • Правильно обесцвеченные мазки
      • Недостаточно обесцвеченные или чрезмерно обесцвеченные мазки
      • Отчет о результатах микроскопии
      • Загрязненный раствор для окрашивания по Граму
      • Краткое описание процедуры считывания пятен по Граму и составления отчета
      • Какого цвета является фоновый материал в мазке, окрашенном по Граму, который имеет были адекватно обесцвечены?
      • Какое МИНИМАЛЬНОЕ количество полей следует исследовать, прежде чем сообщать о прямом мазке, окрашенном по Граму?
      • Если мазок слишком обесцвечен, его можно восстановить, повторив процедуру окрашивания по Граму.
      • Для чего нужен йод при окрашивании по Граму?
      • Какое из следующих утверждений верно относительно мазка, окрашенного по Граму, который представлен на этом изображении?
  • Бактерии в прямом мазке
      • грамположительные кокки
      • грамположительные диплококки
      • грамотрицательные кокки
      • внутриклеточные бактерии
      • грамотрицательные диплококки
      • особые соображения по поводу генитальных мазков
      • -положительные бациллы
      • Грамотрицательные бациллы
      • Значение специфических результатов
      • Бактерии на этом слайде представляют собой грамотрицательные кокки.
      • Какие структуры показаны стрелками в этом поле на мазке, окрашенном по Граму?
      • Наличие внутриклеточных грамотрицательных диплококков в мазке, сделанном из гнойных выделений из уретры мужчины, может служить подтверждением диагноза …
  • Небактериальные клетки в прямом мазке
      • Размер и внешний вид Небактериальные клеточные элементы на мазках, окрашенных по Граму
      • Сопоставьте реакцию окрашивания по Граму для каждого из следующих небактериальных элементов.
      • Какие из следующих клеток примерно такого же размера, как эритроциты?
      • Какие небактериальные структуры присутствуют в этом микроскопическом поле мазка, окрашенного по Граму? (Выберите ВСЕ подходящие варианты)
      • Эта окраска по Граму была приготовлена ​​из образца мокроты и просматривается под масляной иммерсией (1000X). Какая структура обозначена стрелкой?
  • Каталожные номера

Дополнительная информация

Этот курс описывает морфологию и реакции окрашивания по Граму бактерий и небактериальных элементов, обнаруженных в окрашенных по Граму мазках клинического материала.
Уровень обучения : Базовый

Целевая аудитория : Этот курс подходит для базовых курсов клинической микробиологии на уровне послесреднего образования. Его также можно использовать в качестве обзорного материала для практикующих клинических лабораторий, студентов-медиков и патологоанатомов.

Предварительные требования : Навыки использования микроскопа, асептических методов, опыт подготовки и окрашивания мазков по Граму, а также опыт чтения мазков из культур.

Полномочия автора : Этот курс был разработан Betty Smith MT (ASCP) и Jaimy Hill MT (ASCP) и обновлен Education Materials for Health Professionals, Inc. под руководством Marjorie Spahn MT (ASCP). Он был просмотрен и адаптирован для онлайн-использования Полом Фекете, доктором медицины C.A.P.

Авторское право : Авторское право EMHP Inc., Дейтон, Огайо. Лицензия предоставлена ​​MediaLab Inc., Дакула, Джорджия. Интернет-версия, выпущенная исключительно MediaLab Inc.

Микроскопия и окрашивание: окрашивание по граммам, капсулам и эндоспорам

Обзор

Источник: Рианнон М.Левек 1 , Наталия Мартин 1 , Эндрю Дж. Ван Альст 1 и Виктор Дж. ДиРита 1
1 Кафедра микробиологии и молекулярной генетики, Университет штата Мичиган, Ист-Лансинг, Мичиган, США Америки

Бактерии — это разнообразные микроорганизмы, которые встречаются почти повсюду на Земле. Многие свойства помогают отличить их друг от друга, включая, помимо прочего, тип окрашивания по Граму, форму и расположение, образование капсулы и образование спор.Чтобы наблюдать эти свойства, можно использовать световую микроскопию; однако некоторые характеристики бактерий (например, размер, отсутствие окраски и преломляющие свойства) затрудняют различение бактерий только с помощью светового микроскопа (1, 2). Окрашивание бактерий необходимо при различении типов бактерий с помощью световой микроскопии. Два основных типа световых микроскопов — простые и составные. Основное различие между ними — количество линз, используемых для увеличения объекта. Простые микроскопы (например, увеличительное стекло) имеют только одну линзу для увеличения объекта, в то время как составные микроскопы имеют несколько линз для увеличения увеличения (Рис. 1) .Составные микроскопы имеют линзу объектива, расположенную рядом с объектом, которая собирает свет для создания изображения объекта. Затем это увеличивается с помощью окуляра (окулярной линзы), который увеличивает изображение. Комбинация линзы объектива и окуляра позволяет получить большее увеличение, чем использование только одного объектива. Как правило, составные микроскопы имеют несколько линз объектива с разной оптикой, чтобы обеспечить различное увеличение (1, 2). Здесь мы обсудим визуализацию бактерий с помощью окрашивания по Граму, окрашивания капсул и окрашивания эндоспор.


Рис. 1: Типичный составной микроскоп. Маркированы наиболее важные части микроскопа.

Окраска по Граму, разработанная в 1884 году датским бактериологом Гансом Кристианом Грамом (1), позволяет дифференцировать бактерии на основе состава клеточной стенки (1, 2, 3, 4). Вкратце, бактериальный мазок помещают на предметное стекло микроскопа, а затем фиксируют нагреванием, чтобы клетки прикрепились к предметному стеклу и чтобы они легче воспринимали пятна (1). Фиксированный нагреванием образец окрашивают кристально-фиолетовым, делая клетки пурпурными.Предметное стекло промывают раствором йода, который фиксирует кристаллический фиолетовый цвет на клеточной стенке, а затем обесцвечивающим средством (спиртом) смывают нефиксированный кристаллический фиолетовый цвет. На заключительном этапе контрастное окрашивание, сафранин, добавляется к цветным ячейкам красного цвета (рис. 2) . Грамположительные бактерии окрашиваются в пурпурный цвет из-за толстого пептидогликанового слоя, через который средство для обесцвечивания не проникает; Грамотрицательные бактерии с их более тонким пептидогликановым слоем и более высоким содержанием липидов обесцвечиваются при помощи обесцвечивающего средства и окрашиваются в красный цвет при добавлении сафранина (рис. 3) .Окрашивание по Граму используется для дифференциации клеток на два типа (грамположительные и грамотрицательные), а также полезно для различения формы клеток (сферы или кокки, палочки, изогнутые стержни и спирали) и расположения (отдельные клетки, пары, цепи, группы и кластеры) (1, 3).


Рисунок 2: Схема протокола окрашивания по Граму. В левом столбце показано, как грамотрицательные бактерии реагируют на каждом этапе протокола. В правом столбце показано, как реагируют грамположительные бактерии. Также показаны две типичные формы бактериальных клеток: бациллы (или палочки) и кокки (или сферы).


Рисунок 3: Результаты окрашивания по Граму. A Окраска по Граму смеси Staphylococcus aureus (грамположительные пурпурные кокки) и Escherichia coli (грамотрицательные красные палочки).

Некоторые бактерии образуют вязкий внеклеточный внешний слой, называемый капсулой (3, 5). Капсулы представляют собой защитные структуры с различными функциями, включая, помимо прочего, прилипание к поверхностям и другим бактериям, защиту от высыхания и защиту от фагоцитоза.Капсулы обычно состоят из полисахаридов, содержащих более 95% воды, но некоторые могут содержать многоатомные спирты и полиамины (5). Из-за их в основном неионогенного состава и способности отталкивать пятна простые методы окрашивания не работают с капсулами; вместо этого при окрашивании капсулы используется метод негативного окрашивания, который окрашивает клетки и фон, оставляя капсулу в виде четкого ореола вокруг клеток (1, 3) (Рисунок 4) . Окрашивание капсулы включает в себя смазывание бактериального образца кислотным пятном на предметном стекле микроскопа.В отличие от окрашивания по Граму, бактериальный мазок не фиксируется нагреванием во время окрашивания капсулы. Термофиксация может разрушить или обезвожить капсулу, что приведет к ложноотрицательным результатам (5). Кроме того, термофиксация может сжимать клетки, что приводит к просвету вокруг клетки, который может быть ошибочно принят за капсулу, что приводит к ложным срабатываниям (3). Кислотное пятно окрашивает фон слайда; при последующем использовании основного красителя Crystal Violet окрашиваются сами бактериальные клетки, оставляя капсулу неокрашенной и проявляясь в виде четкого ореола между клетками и фоном предметного стекла (фиг. 5) .Традиционно в качестве кислотного красителя использовались индийские чернила, поскольку эти частицы не могут проникнуть в капсулу. Таким образом, ни капсула, ни ячейка не окрашиваются тушью; вместо этого окрашивается фон. Вместо чернил можно использовать конго красный, нигрозин или эозин. Окрашивание капсул может помочь врачам диагностировать бактериальные инфекции при изучении культур из образцов пациентов и направить соответствующее лечение пациента. Общие заболевания, вызываемые инкапсулированными бактериями, включают пневмонию, менингит и сальмонеллез.


Рис. 4: Схема протокола окрашивания капсул. На верхней панели показан мазок на предметном стекле перед нанесением любого красителя. На средней панели показано, как слайд и бактерии выглядят после основного окрашивания Конго Ред. На последней панели показано, как слайд и бактерии выглядят после контрастного красителя Crystal Violet.


Рисунок 5: Результаты окрашивания капсул. Окрашивание капсул инкапсулированных Acinetobacter baumannii (обозначено черными стрелками) и неинкапсулированных Escherichia coli (обозначено белыми стрелками).Обратите внимание, что фон темный, а клетки A. baumannii окрашены в фиолетовый цвет. Капсула вокруг клеток A. baumannii видна как ореол, в то время как E. coli не имеет ореола.

В неблагоприятных условиях (например, ограничение питательных веществ, экстремальные температуры или обезвоживание) некоторые бактерии производят эндоспоры, метаболически неактивные структуры, устойчивые к физическим и химическим повреждениям (1, 2, 8, 9). Эндоспоры позволяют бактериям выживать в суровых условиях, защищая генетический материал клеток; как только условия благоприятны для роста, споры прорастают, и рост бактерий продолжается.Эндоспоры трудно окрашивать стандартными методами окрашивания, поскольку они непроницаемы для красителей, обычно используемых для окрашивания (1, 9). Методика, обычно используемая для окрашивания эндоспор, — это метод Шеффера-Фултона (рис. 6) , в котором используется первичный краситель Малахитовый зеленый, водорастворимый краситель, который относительно слабо связывается с клеточным материалом, и нагревание, чтобы позволить красителю прорваться. кора споры (Рисунок 7) . Эти шаги окрашивают растущие клетки (называемые вегетативными клетками в контексте биологии эндоспор), а также эндоспоры и любые свободные споры (те, которые больше не находятся в прежней клеточной оболочке).Вегетативные клетки промывают водой для удаления малахитового зеленого; Эндоспоры сохраняют пятно из-за нагревания малахитового зеленого внутри споры. Наконец, вегетативные клетки контрастируют с сафранином для визуализации (рис. 8) . Окрашивание эндоспор помогает дифференцировать бактерии на спорообразующие и неспорообразующие, а также определяет, присутствуют ли в образце споры, которые, если они есть, могут привести к бактериальному загрязнению при прорастании.


Рисунок 6: Схема протокола окрашивания эндоспор. В левом столбце показано, как спорообразующие бактерии реагируют на каждом этапе протокола. В правом столбце показано, как реагируют неспорообразующие бактерии.


Рисунок 7: Схема структуры эндоспор. Бактериальная клетка, содержащая эндоспору с помеченными различными структурами спор.


Рисунок 8: Результаты окрашивания эндоспор. Типичное окрашивание эндоспор Bacillus subtilis . Вегетативные клетки (обозначены белыми стрелками) окрашиваются в красный цвет, а эндоспоры (обозначены черными стрелками) окрашиваются в зеленый цвет.

Процедура

1. Окрашивание по Граму

  1. Установка
    1. Наденьте перчатки и негорючий лабораторный халат, так как красители могут испачкать руки и одежду.
    2. Горелка Бунзена используется для термической фиксации бактерий. Будьте осторожны при работе с пламенем; соберите длинные волосы назад.
    3. Будут использоваться имеющиеся в продаже реагенты для окрашивания по Граму.
    4. Очистите предметные стекла с помощью лабораторных салфеток.
  2. Протокол
    1. Внесите пипеткой 10 мкл физиологического раствора с фосфатным буфером или культуральной жидкости на предметное стекло.
    2. Размажьте бактериальную колонию в жидкости, чтобы получить тонкий равномерный слой.
      Примечание: Не используйте культуры старше 24 часов, поскольку слишком старые бактерии могут иметь изменения в клеточной стенке, которые повлияют на результаты окрашивания по Граму (1, 4).
    3. Полностью воздушно-сухая горка.
    4. После высыхания закрепите бактерии нагреванием, пропустив слайд через пламя (стороной с бактериями вверх) 4-5 раз.
      Примечание: Не держите предметное стекло на огне слишком долго, иначе вы можете исказить бактериальные клетки (1).
    5. Работая над раковиной, удерживайте задвижку на уровне и нанесите «Кристаллический фиолетовый» Грама, чтобы полностью покрыть закрепившиеся при нагревании бактерии, дайте постоять 45 секунд.
    6. Смойте излишки Crystal Violet, удерживая предметное стекло под углом и брызгая на предметное стекло слабой непрямой струей воды, позволяя ей стечь по окрашенным бактериям. Не распыляйте воду прямо на бактерии.
    7. Снова удерживая уровень предметного стекла, нанесите раствор йода Грама, чтобы полностью покрыть окрашенные бактерии, дайте ему постоять 45 секунд.
    8. Промойте избыток йода, как описано в шаге 1.2.6 выше.
    9. Удерживая предметное стекло под углом, добавьте несколько капель Decolorizer на предметное стекло, позволяя ему стечь по окрашенным бактериям до тех пор, пока сток не станет прозрачным; обычно около 5 секунд. Немедленно промойте водой, как в шаге 1.2.6 выше.
      Примечание: Это важный шаг в протоколе. Если обесцвечивать слишком долго или недостаточно долго, это приведет к ложному окрашиванию по Граму (4).
    10. Снова удерживая слайд на уровне, нанесите сафранин Грама, чтобы полностью покрыть бактерии, дайте ему постоять 45 секунд.
    11. Промойте излишки сафранина, как описано в шаге 1.2.6 выше.
    12. Промокните, не трите, излишки воды с предметного стекла бумажными полотенцами.
    13. Изучите предметное стекло на микроскопе в масляной иммерсии с объективом 100X.
  3. Результаты и анализ данных
    1. Грамположительные бактерии окрашиваются в фиолетовый цвет.
    2. Грамотрицательные бактерии окрашиваются в красный цвет.
    3. Форма бактерий (кокки, бациллы, изогнутые стержни, спирали) будет видна.
    4. Видно расположение бактериальных клеток (отдельные клетки, парные клетки, цепочки клеток, кластеры, группы).

2. Окрашивание капсул

  1. Установка
    1. Надевайте перчатки и лабораторный халат, так как красители окрашивают руки и одежду.
    2. Чтобы приготовить 1% раствор кристаллического фиолетового, смешайте 0,25 грамма кристаллического фиолетового с 25 мл дистиллированной воды до полного растворения.
    3. Чтобы приготовить 1% раствор Конго Красного, смешайте 0.25 граммов Congo Red с 25 мл дистиллированной воды до растворения.
    4. Очистите предметные стекла лабораторными салфетками.
  2. Протокол
    1. Нанесите на предметное стекло 10 мкл конго красного.
    2. С помощью наконечника пипетки нанесите на краситель колонию бактерий, чтобы получить тонкий равномерный слой.
    3. Полностью высушенное на воздухе предметное стекло со смесью краситель / клетки, 5-7 минут.
      Примечание: Не нагревайте фиксатор, так как нагревание может привести к обезвоживанию или деформации капсулы.
    4. Залейте мазок 1% кристально-фиолетовым на 1 минуту.
    5. Смойте излишки пятна, удерживая предметное стекло под углом и распыляя на него легкую непрямую струю воды, позволяя ей стечь по окрашенным бактериям. Не распыляйте воду прямо на бактерии.
    6. Держите слайд под углом 45 градусов до полного высыхания на воздухе.
    7. Изучите мазок на микроскопе в масляной иммерсии с 100-кратным увеличением.
  3. Результаты и анализ данных
    1. Бактериальные клетки окрашиваются в фиолетовый цвет.
    2. Фон слайда потемнеет.
    3. Капсулы будут представлять собой четкий ореол вокруг ячеек на темном фоне.

3. Эндоспорное окрашивание (метод Шеффера-Фултона)

  1. Установка
    1. Надевайте перчатки и негорючий лабораторный халат для защиты рук и одежды от красителей и пламени.
    2. Горелка Бунзена используется для термической фиксации бактерий. Будьте осторожны при работе с пламенем; соберите длинные волосы назад.
    3. Чтобы приготовить 0,5% раствор малахитового зеленого, смешайте 0,125 г малахитового зеленого с 25 мл дистиллированной воды до полного растворения.
    4. Используйте имеющийся в продаже раствор реагента Сафранина Грама.
    5. Очистите предметные стекла лабораторными салфетками.
  2. Протокол
    1. Внесите пипеткой 10 мкл фосфатно-солевого буфера (PBS) или культурального бульона на предметное стекло.
    2. В асептических условиях размазать бактериальную колонию в жидкости до получения тонкого равномерного слоя.
      Примечание: Эндоспоры обычно не образуются в молодых клетках, поэтому рекомендуется культивирование в возрасте от 18 до 36 часов (9).
    3. Полностью воздушно-сухая горка.
    4. Термофиксируйте, пропуская предметное стекло (бактериями вверх) через пламя 4-5 раз.
    5. Чтобы помочь удержать краситель, поместите кусок бумаги для линз (вырезанный по размеру бактериального мазка) поверх термофиксированного мазка.
    6. Пропитайте бумагу для линз раствором малахитового зеленого.
    7. Поместите предметное стекло поверх стакана с кипящей водой на горячую плиту и держите предметное стекло на пару в течение 5 минут, сохраняя влажность бумаги линз, добавляя по капле красителя по мере необходимости.
      Примечание: Избегайте перегрева и высыхания раствора красителя.
    8. Выньте предметное стекло из стакана, удалите и выбросьте бумагу для линз, дайте предметному стеклу остыть в течение 2 минут.
    9. Удерживая предметное стекло под углом, тщательно промойте предметное стекло, брызнув на предметное стекло легкой непрямой струей воды, чтобы она стекала по мазку.
    10. Удерживая предметное стекло на уровне, промойте мазок сафранином и дайте постоять 1 минуту.
    11. Промойте излишки сафранина, как описано в шаге 3.2.9 выше.
    12. Дать высохнуть на воздухе.
    13. Изучите предметное стекло на микроскопе в масляной иммерсии с 100-кратным увеличением.
  3. Результаты и анализ данных
    1. Споры приобретают зеленый цвет.
    2. Вегетативные клетки окрашиваются в красный цвет.
    3. Некоторые вегетативные клетки будут содержать споры; клетки окрашиваются в красный цвет, а эндоспоры — в зеленый.

Бактерии — это микроскопические живые организмы, которые обладают многими отличительными характеристиками, такими как форма, расположение клеток, образуют ли они капсулы или нет, и образуют ли они споры.Все эти особенности можно визуализировать путем окрашивания и помочь в идентификации и классификации различных видов бактерий.

Чтобы изучить первые две характеристики формы и расположения клеток, мы можем использовать простой метод, называемый окрашиванием по Граму. Здесь кристаллический фиолетовый применяется к бактериям, прикрепленным к предметному стеклу. Затем наносится обесцвечивающее средство, и любые бактерии с толстым пептидогликановым слоем окрашиваются в фиолетовый цвет, так как обесцвечивающее средство не может легко проникнуть в этот слой.Эти бактерии называются грамположительными.

Грамотрицательные бактерии имеют более тонкий слой пептидогликана и обесцвечивают обесцвечивающее средство, теряя пурпурный цвет. Тем не менее, они будут окрашиваться в красновато-розовый цвет, когда добавляется контрастное краситель сафранина, который связывается с липополисахаридным слоем на их внешней стороне. После окрашивания клетки можно наблюдать на предмет морфологии, размера и расположения, например, в цепочках или кластерах, что дополнительно помогает в классификации и идентификации.

Другой полезный метод в наборе инструментов микробиолога — это окрашивание капсул, используемое для визуализации внешних капсул, окружающих некоторые типы бактериальных клеток.Из-за неионного состава капсул и их способности отталкивать пятна простые методы окрашивания не работают. Вместо этого используется метод негативного окрашивания, при котором сначала окрашивается фон кислотным красителем, таким как Конго красный, до того, как бактериальные клетки окрашиваются кристаллическим фиолетовым. Это оставляет любую капсулу в виде четкого ореола вокруг клеток.

Последний основной метод окрашивания, описанный здесь, может помочь определить, образуют ли изучаемые бактерии споры. В неблагоприятных условиях некоторые бактерии образуют эндоспоры, спящие, жесткие, не репродуктивные структуры, основная функция которых заключается в обеспечении выживания бактерий в периоды стресса окружающей среды, такого как экстремальные температуры или обезвоживание.Однако не все виды бактерий образуют эндоспоры, и их сложно окрашивать стандартными методами, поскольку они непроницаемы для многих красителей. В методе Шеффера-Фултона используется окраска малахитовым зеленым, которую наносят на бактерии, зафиксированные на предметном стекле. Затем предметное стекло промывают водой перед контр-окрашиванием сафранином. Вегетативные клетки будут розовато-красными, а эндоспоры — зелеными. Из этого видео вы узнаете, как применять эти распространенные методы окрашивания бактерий, а затем исследовать образцы окрашивания с помощью световой микроскопии.

Чтобы начать процедуру, соберите длинные волосы назад и наденьте соответствующие средства индивидуальной защиты, включая лабораторный халат и перчатки.

Затем очистите свежее предметное стекло микроскопа лабораторной салфеткой. Затем нанесите пипеткой 10 мкл физиологического раствора с фосфатным буфером 1X на первое предметное стекло. Затем используйте стерильный наконечник пипетки, чтобы выбрать одну бактериальную колонию из чашки с агаром LB. Смажьте бактериальные колонии в жидкости, чтобы получить тонкий ровный слой. Установите слайд на столешницу и дайте ему полностью высохнуть на воздухе.

После высыхания зажгите горелку Бунзена, чтобы разморозить бактерии. Используя щипцы, пропустите предметное стекло через пламя горелки несколько раз бактериальной стороной вверх, стараясь не удерживать предметное стекло в пламени слишком долго, что может исказить клетки.

Теперь, работая над раковиной, удерживайте предметное стекло и нанесите несколько капель кристаллического фиолетового Грама, чтобы полностью покрыть бактериальный мазок, а затем поместите предметное стекло на скамью, чтобы оно оставалось на 45 секунд. Затем, удерживая предметное стекло под углом, аккуратно нанесите струю воды на верхнюю часть предметного стекла, стараясь не разбрызгивать бактериальный мазок напрямую.Теперь, снова удерживая предметное стекло, нанесите раствор йода Грама, чтобы полностью покрыть окрашенные бактерии, а затем дайте ему постоять еще 45 секунд. Затем осторожно смойте йод с предметного стекла, как показано ранее. Удерживая предметное стекло под углом, добавьте на предметное стекло несколько капель обесцвечивающего средства по Граму, позволяя ему стечь по окрашенным бактериям, пока стекло не станет прозрачным, в течение примерно 5 секунд. Немедленно промойте водой, как показано ранее. Это ограничит чрезмерное обесцвечивание мазка.Затем, снова удерживая уровень предметного стекла, нанесите контркраску сафранином Грама, чтобы полностью покрыть окрашенные бактерии. Через 45 секунд осторожно промойте сафранин с предметного стекла водой, как показано ранее, а затем промокните насухо бумажными полотенцами.

Наконец, добавьте каплю иммерсионного масла прямо на предметное стекло, а затем изучите предметное стекло с помощью светового микроскопа с масляной линзой 100X.

Чтобы начать этот протокол окрашивания, сначала наденьте соответствующие средства индивидуальной защиты, а затем убедитесь, что стеклянные предметные стекла, которые будут использоваться, чистые.

Далее подготовьте решения. Чтобы приготовить 1% раствор кристаллического фиолетового, смешайте 0,25 грамма порошка кристаллического фиолетового с 25 миллилитрами дистиллированной воды и встряхивайте до растворения. Затем приготовьте 1% раствор конго красного, смешав 0,25 грамма порошка конго красного с 25 миллилитрами дистиллированной воды и взбалтывая до растворения. Теперь нанесите пипеткой 10 микролитров раствора Конго красного на предметное стекло. Используя чистый стерильный наконечник пипетки, выберите одну бактериальную колонию из чашки с агаром LB. Затем нанесите бактериальную колонию на краситель, чтобы получился тонкий ровный слой.Полностью высушите предметное стекло на воздухе в течение 5-7 минут. Когда слайд высохнет, залейте мазок 1% кристаллическим фиолетовым, чтобы он покрыл его, и оставьте на 1 минуту. Теперь, удерживая предметное стекло под углом, аккуратно нанесите струю воды на верхнюю часть предметного стекла, стараясь не разбрызгивать бактерии напрямую. Продолжайте удерживать слайд под углом 45 градусов до полного высыхания на воздухе. Наконец, добавьте каплю иммерсионного масла непосредственно на предметное стекло, а затем изучите предметное стекло с помощью светового микроскопа с масляным объективом 100X.

Для окрашивания эндоспор сначала приготовьте 0,5% раствор малахитового зеленого, смешав 0,125 г порошка малахитового зеленого с 25 миллилитрами дистиллированной воды, а затем встряхните раствор до растворения. Затем нанесите пипеткой 10 микролитров 1X PBS в центр предметного стекла. Затем используйте стерильный наконечник пипетки, чтобы выбрать одну бактериальную колонию из чашки с агаром LB. Размажьте бактерии в жидкости, чтобы получился тонкий ровный слой. Теперь установите слайд на столешницу и дайте ему полностью высохнуть на воздухе.После высыхания зажгите горелку Бунзена, чтобы разморозить бактерии. Пропустите слайд через голубое пламя горелки несколько раз бактериальной стороной вверх. Затем, когда предметное стекло остынет, поместите кусок предварительно вырезанной бумаги для линз поверх закрепленного нагреванием мазка. Затем включите конфорку на максимальную мощность и доведите до кипения стакан воды.

Пропитайте бумагу для линз раствором малахитового зеленого и с помощью щипцов поместите предметное стекло на стакан с кипящей водой для пара в течение 5 минут.Держите бумагу для линз влажной, добавляя краситель, по капле за раз, по мере необходимости. Затем, снова используя щипцы, возьмите предметное стекло из стакана, удалите и выбросьте бумагу для линз. Дайте слайду остыть в течение 2 минут. Работая над раковиной, держите горку под углом и аккуратно брызните струей воды на верхнюю часть горки. Теперь, удерживая слайд на уровне, нанесите сафранин, чтобы полностью покрыть слайд. Затем дайте ему постоять 1 минуту. Затем, удерживая слайд под углом, промойте, как показано ранее.Дайте слайду высохнуть на воздухе на столе. Наконец, добавьте каплю иммерсионного масла непосредственно на предметное стекло, а затем изучите предметное стекло с помощью светового микроскопа с масляным объективом 100X.

В протоколе окрашивания по Граму могут образоваться пятна двух разных цветов. Темно-пурпурное окрашивание указывает на то, что бактерии грамположительны и сохранили окраску кристально-фиолетовым. Напротив, красновато-розовое окрашивание характерно для грамотрицательных бактерий, которые вместо этого окрашиваются контркрашением сафранина.Кроме того, после окрашивания по Граму можно визуализировать различные формы и расположение бактерий. Например, можно отличить кокки, или круглые бактерии, от палочковидных бацилл или идентифицировать бактерии, образующие нити, по сравнению с бактериями, которые обычно собираются в сгустки или встречаются по отдельности.

На микроскопическом изображении, окрашенном капсулой, бактериальные клетки обычно окрашиваются в фиолетовый цвет, а фон предметного стекла должен быть окрашен в темный цвет. На этом темном фоне капсулы бактерий, если они есть, будут выглядеть как четкий ореол вокруг клеток.

Наконец, при окрашивании эндоспор вегетативные клетки будут окрашены в красный цвет контрокрасителем сафранином. Если в образце присутствуют эндоспоры, они сохранят окраску малахитового зеленого цвета и будут иметь голубовато-зеленый цвет.

Приложения и сводка

Бактерии обладают отличительными характеристиками, которые могут помочь в их идентификации. Некоторые из этих характеристик можно наблюдать с помощью окрашивания и световой микроскопии. Для наблюдения за этими характеристиками используются три метода окрашивания: окрашивание по Граму, окрашивание капсул и окрашивание эндоспор.Каждый метод определяет различные характеристики бактерий и может использоваться, чтобы помочь врачам рекомендовать лечение для пациентов, определять потенциальные загрязнители в образцах или пищевых продуктах и ​​проверять стерильность образцов.

Список литературы

  1. Блэк, Дж. Г. Принципы микробиологии и исследования , 4 -е издание . Prentice-Hall, Inc., Верхняя Сэдл-Ривер, Нью-Джерси. (1999)
  2. Мэдиган, М. Т. и Дж.М. Мартинко. Brock Biology of Microorganisms , 11 th edition. Пирсон Прентис-Холл, Аппер-Сэдл-Ривер, Нью-Джерси. (2006).
  3. Leboffe, M. J., and B.E. Pierce. Фотографический атлас для лаборатории микробиологии , 2-е изд. Morton Publishing Company, Энглвуд, Колорадо. (1996).
  4. Smith, A.C. и M.A. Hussey. Протоколы окрашивания по Граму. Лабораторные протоколы . Американское общество микробиологии, Вашингтон, округ Колумбия. Доступно по адресу: http: // www.asmscience.org/content/education/protocol/protocol.2886. (2005).
  5. Hughes, R. B. and A. C. Smith. Протоколы окрашивания капсул Лабораторные протоколы . Американское общество микробиологии, Вашингтон, округ Колумбия. Доступно по адресу: http://www.asmscience.org/content/education/protocol/protocol.3041. (2007).
  6. Энтони, Э. Э. Младший. Заметка о окрашивании капсул. Наука 73 (1890): 319-320 (1931).
  7. Finegold, S. M., W. J. Martin, and E. G. Scott. Диагностическая микробиология Бейли и Скотта , 5 -е издание .Компания К. В. Мосби, Сент-Луис, Миссури. (1978).
  8. Герхардт П., Р. Г. Э. Мюррей, В. А. Вуд и Н. Р. Криг. Методы общей и молекулярной бактериологии . ASM Press, Вашингтон, округ Колумбия. (1994).
  9. Hussey, M. A. и A. Zayaitz. Протокол окрашивания эндоспор. Лабораторные протоколы . Американское общество микробиологии, Вашингтон, округ Колумбия. Доступно по адресу: http://www.asmscience.org/content/education/protocol/protocol.3112. (2007).

Бактерии — это микроскопические живые организмы, которые обладают многими отличительными характеристиками, такими как форма, расположение клеток, образуют ли они капсулы или нет, и образуют ли они споры.Все эти особенности можно визуализировать путем окрашивания и помочь в идентификации и классификации различных видов бактерий.

Чтобы изучить первые две характеристики формы и расположения клеток, мы можем использовать простой метод, называемый окрашиванием по Граму. Здесь кристаллический фиолетовый применяется к бактериям, прикрепленным к предметному стеклу. Затем наносится обесцвечивающее средство, и любые бактерии с толстым пептидогликановым слоем окрашиваются в фиолетовый цвет, так как обесцвечивающее средство не может легко проникнуть в этот слой.Эти бактерии называются грамположительными.

Грамотрицательные бактерии имеют более тонкий слой пептидогликана и обесцвечивают средство для обесцвечивания, теряя пурпурный цвет. Тем не менее, они будут окрашиваться в красновато-розовый цвет, когда добавляется контрастное краситель сафранина, который связывается с липополисахаридным слоем на их внешней стороне. После окрашивания клетки можно наблюдать на предмет морфологии, размера и расположения, например, в цепочках или кластерах, что дополнительно помогает в классификации и идентификации.

Другой полезный метод в наборе инструментов микробиолога — это окрашивание капсул, используемое для визуализации внешних капсул, окружающих некоторые типы бактериальных клеток.Из-за неионного состава капсул и их способности отталкивать пятна простые методы окрашивания не работают. Вместо этого используется метод негативного окрашивания, при котором сначала окрашивается фон кислотным красителем, таким как Конго красный, до того, как бактериальные клетки окрашиваются кристаллическим фиолетовым. Это оставляет любую капсулу в виде четкого ореола вокруг клеток.

Последний основной метод окрашивания, описанный здесь, может помочь определить, образуют ли изучаемые бактерии споры. В неблагоприятных условиях некоторые бактерии образуют эндоспоры, спящие, жесткие, не репродуктивные структуры, основная функция которых заключается в обеспечении выживания бактерий в периоды стресса окружающей среды, такого как экстремальные температуры или обезвоживание.Однако не все виды бактерий образуют эндоспоры, и их сложно окрашивать стандартными методами, поскольку они непроницаемы для многих красителей. В методе Шеффера-Фултона используется окраска малахитовым зеленым, которую наносят на бактерии, зафиксированные на предметном стекле. Затем предметное стекло промывают водой перед контр-окрашиванием сафранином. Вегетативные клетки будут розовато-красными, а эндоспоры — зелеными. Из этого видео вы узнаете, как применять эти распространенные методы окрашивания бактерий, а затем исследовать образцы окрашивания с помощью световой микроскопии.

Чтобы начать процедуру, соберите длинные волосы и наденьте соответствующие средства индивидуальной защиты, включая лабораторный халат и перчатки.

Затем очистите свежее предметное стекло микроскопа лабораторной салфеткой. Затем нанесите пипеткой 10 мкл физиологического раствора с фосфатным буфером 1X на первое предметное стекло. Затем используйте стерильный наконечник пипетки, чтобы выбрать одну бактериальную колонию из чашки с агаром LB. Смажьте бактериальные колонии в жидкости, чтобы получить тонкий ровный слой. Установите слайд на столешницу и дайте ему полностью высохнуть на воздухе.

После высыхания зажгите горелку Бунзена, чтобы разморозить бактерии. Используя щипцы, пропустите предметное стекло через пламя горелки несколько раз бактериальной стороной вверх, стараясь не удерживать предметное стекло в пламени слишком долго, что может исказить клетки.

Теперь, работая над раковиной, удерживайте предметное стекло на уровне и нанесите несколько капель кристаллического фиолетового Грама, чтобы полностью покрыть бактериальный мазок, а затем поместите предметное стекло на стол, чтобы оно оставалось на 45 секунд. Затем, удерживая предметное стекло под углом, аккуратно нанесите струю воды на верхнюю часть предметного стекла, стараясь не разбрызгивать бактериальный мазок напрямую.Теперь, снова удерживая предметное стекло, нанесите раствор йода Грама, чтобы полностью покрыть окрашенные бактерии, а затем дайте ему постоять еще 45 секунд. Затем осторожно смойте йод с предметного стекла, как показано ранее. Удерживая предметное стекло под углом, добавьте на предметное стекло несколько капель обесцвечивающего средства по Граму, позволяя ему стечь по окрашенным бактериям, пока стекло не станет прозрачным, в течение примерно 5 секунд. Немедленно промойте водой, как показано ранее. Это ограничит чрезмерное обесцвечивание мазка.Затем, снова удерживая уровень предметного стекла, нанесите контркраску сафранином Грама, чтобы полностью покрыть окрашенные бактерии. Через 45 секунд осторожно промойте сафранин с предметного стекла водой, как показано ранее, а затем промокните насухо бумажными полотенцами.

Наконец, добавьте каплю иммерсионного масла непосредственно на предметное стекло, а затем изучите предметное стекло с помощью светового микроскопа с масляной линзой 100X.

Чтобы начать этот протокол окрашивания, сначала наденьте соответствующие средства индивидуальной защиты, а затем убедитесь, что стеклянные предметные стекла, которые будут использоваться, чистые.

Далее готовим решения. Чтобы приготовить 1% раствор кристаллического фиолетового, смешайте 0,25 грамма порошка кристаллического фиолетового с 25 миллилитрами дистиллированной воды и встряхивайте до растворения. Затем приготовьте 1% раствор конго красного, смешав 0,25 грамма порошка конго красного с 25 миллилитрами дистиллированной воды и взбалтывая до растворения. Теперь нанесите пипеткой 10 микролитров раствора Конго красного на предметное стекло. Используя чистый стерильный наконечник пипетки, выберите одну бактериальную колонию из чашки с агаром LB. Затем нанесите бактериальную колонию на краситель, чтобы получился тонкий ровный слой.Полностью высушите предметное стекло на воздухе в течение 5-7 минут. Когда слайд высохнет, залейте мазок 1% кристаллическим фиолетовым, чтобы он покрыл его, и оставьте на 1 минуту. Теперь, удерживая предметное стекло под углом, аккуратно нанесите струю воды на верхнюю часть предметного стекла, стараясь не разбрызгивать бактерии напрямую. Продолжайте удерживать слайд под углом 45 градусов до полного высыхания на воздухе. Наконец, добавьте каплю иммерсионного масла непосредственно на предметное стекло, а затем изучите предметное стекло с помощью светового микроскопа с масляным объективом 100X.

Для окрашивания эндоспор сначала приготовьте 0,5% раствор малахитового зеленого, смешав 0,125 г порошка малахитового зеленого с 25 миллилитрами дистиллированной воды, а затем встряхните раствор до растворения. Затем нанесите пипеткой 10 микролитров 1X PBS в центр предметного стекла. Затем используйте стерильный наконечник пипетки, чтобы выбрать одну бактериальную колонию из чашки с агаром LB. Размажьте бактерии в жидкости, чтобы получился тонкий ровный слой. Теперь установите слайд на столешницу и дайте ему полностью высохнуть на воздухе.После высыхания зажгите горелку Бунзена, чтобы разморозить бактерии. Пропустите слайд через голубое пламя горелки несколько раз бактериальной стороной вверх. Затем, когда предметное стекло остынет, поместите кусок предварительно вырезанной бумаги для линз поверх закрепленного нагреванием мазка. Затем включите конфорку на максимальную мощность и доведите до кипения стакан воды.

Пропитайте бумагу для линз раствором малахитового зеленого и с помощью щипцов поместите предметное стекло на стакан с кипящей водой для пара в течение 5 минут.Держите бумагу для линз влажной, добавляя краситель, по капле за раз, по мере необходимости. Затем, снова используя щипцы, возьмите предметное стекло из стакана, удалите и выбросьте бумагу для линз. Дайте слайду остыть в течение 2 минут. Работая над раковиной, держите горку под углом и аккуратно брызните струей воды на верхнюю часть горки. Теперь, удерживая слайд на уровне, нанесите сафранин, чтобы полностью покрыть слайд. Затем дайте ему постоять 1 минуту. Затем, удерживая слайд под углом, промойте, как показано ранее.Дайте слайду высохнуть на воздухе на столе. Наконец, добавьте каплю иммерсионного масла непосредственно на предметное стекло, а затем изучите предметное стекло с помощью светового микроскопа с масляным объективом 100X.

В протоколе окрашивания по Граму могут образоваться пятна двух разных цветов. Темно-пурпурное окрашивание указывает на то, что бактерии грамположительны и сохранили окраску кристально-фиолетовым. Напротив, красновато-розовое окрашивание характерно для грамотрицательных бактерий, которые вместо этого окрашиваются контркрашением сафранина.Кроме того, после окрашивания по Граму можно визуализировать различные формы и расположение бактерий. Например, можно отличить кокки, или круглые бактерии, от палочковидных бацилл или идентифицировать бактерии, образующие нити, по сравнению с бактериями, которые обычно собираются в сгустки или встречаются по отдельности.

На микроскопическом изображении, окрашенном капсулой, бактериальные клетки обычно окрашиваются в фиолетовый цвет, а фон предметного стекла должен быть окрашен в темный цвет. На этом темном фоне капсулы бактерий, если они есть, будут выглядеть как четкий ореол вокруг клеток.

Наконец, при окрашивании эндоспор вегетативные клетки будут окрашены в красный цвет контркрашением сафранина. Если в образце присутствуют эндоспоры, они сохранят окраску малахитового зеленого цвета и будут иметь голубовато-зеленый цвет.

Лаборатория Streptococcus: Id Strep Species General Methods Section 1

Раздел I.

Схема рабочего процесса для

Stretococcus Лаборатория
  1. Если культура представляет собой неидентифицированный грамположительный кокк, Enterococcus , viridans Streptococcus или неизвестной идентичности (в основном включает все культуры, кроме пневмококков, бета-гемолитических стрептококков и питательных вариантов стрептококков), инокулируйте следующие СМИ.Засейте чашку агара с 5% -ным агаром с триптиказо-соевым 5% -ным агаром с кровью барана, нанеся тяжелый посевной материал на одну четверть чашки, а оставшуюся часть нанесите штрихами для изолированных колоний. Поместите диск ванкомицина на самую тяжелую часть посевного материала и поместите планшет в сосуд для тушения свечей или инкубатор CO 2 на 18–24 ч при 35 ° C.
  2. Если культура идентифицирована как бета-гемолитический стрептококк или стрептококки группы A, B, C, F или G, засевайте чашку агара с триптиказо-соевым 5% агаром с овечьей кровью и поместите бацитрациновый диск на тяжелую часть нароста.Все чашки необходимо инкубировать в сосуде для тушения свечей или инкубаторе с CO 2 в течение 18 часов при 35 ° C. Для большинства культур, представленных как стрептококки группы А, тех, которые выглядят чистыми в представленной культуре, следует засеять 30 мл и 5 мл бульона Тодда-Хьюитта (THB). Поместите 5 мл THB в инкубатор на 30 ° C или оставьте при комнатной температуре на 1-3 дня. 5 мл THB используют для типирования Т-агглютинации стрептококков группы А. Поместите 30 мл бульона при 35 ° C на 16–18 часов. Не инкубируйте дольше 18 часов.Для бета-гемолитических стрептококков, отличных от группы A, 30 мл THB также можно засеять и поместить при 35 ° C на 18–24 часа. Некоторым штаммам может потребоваться более одного дня инкубации, инкубация этих бульонов более 24–72 часов не причинит вреда. 30 мл THB используется в некоторых случаях для серогруппировки и серотипирования.
  3. Если культура представлена ​​как питательная недостаточность Streptococcus (NVS), засевайте всю чашку триптиказо-соевого кровяного агара культурой. Перпендикулярно этой полосе аккуратно нанесите одну полосу с культурой Staphylococcus aureus .Этот тест определит, образует ли неизвестная культура колонии-спутники, прилегающие к стафилококкам, что характерно для всех NVS. Инкубируйте планшет в CO 2 или сосуде для тушения свечей при 35 ° C в течение 24-48 часов.
Примеры необычных или неожиданных результатов:

Чашки с кровяным агаром, используемые описанным выше способом, предназначены для проверки чистоты культур. Если какие-либо результаты необычны или неожиданны, или если культура загрязнена, тест необходимо повторить.

Стрептококки, устойчивые к ванкомицину, или другие неизвестные, кроме лейконостоков и педиококков, которые по своей природе устойчивы к ванкомицину.


AccuProbe-

Enterococcus Тест
  1. Принцип
    Тест AccuProbe- Enterococcus используется для идентификации атипичных энтерококков и для дифференциации штаммов Enterococcus и Lactococcus .
  2. Инокулят
    Ночная культура, выращенная на кровяном агаре, инкубированная при 35 ° C в CO 2 .
  3. Реагенты и материалы
    Genprobe Accuprobe Enterococcus Тест идентификации культуры, GEN-PROBE Inc. Сан-Диего, Калифорния
  4. Процедура
    Тест проводится в соответствии с инструкциями, вложенными в пакет.
  5. Чтение и интерпретация
    Автоматизировано
  6. Ограничения
    Будьте осторожны с количеством используемых колоний. Слишком много колоний приведет к ложноположительному результату.
  7. Контроль качества
    Контроль качества, положительные и отрицательные реакции определяются каждый день, когда определяется результат теста. E. faecalis SS1273 и S. sanguinis SS910 используются в качестве положительного и отрицательного контролей соответственно.

AccuProbe-

Пневмококк Тест
  1. Принцип
    Тест AccuProbe- Pneumococcus используется для помощи в идентификации атипичных пневмококков и для дифференциации штаммов viridans Streptococcus .
  2. Инокулят
    Ночная культура, выращенная на кровяном агаре, инкубированная при 35 ° C в CO 2 .
  3. Реагенты и материалы
    Genprobe Accuprobe Pneumococcus Тест идентификации культуры, GEN-PROBE Inc. Сан-Диего, Калифорния
  4. Процедура
    Тест проводится в соответствии с инструкциями, вложенными в пакет.
  5. Чтение и интерпретация
    Автоматизировано
  6. Ограничения
    Будьте осторожны с количеством используемых колоний. Слишком много колоний приведет к ложноположительному результату.
  7. Контроль качества
    Контроль качества, положительные и отрицательные реакции определяются каждый день, когда определяется результат теста. S. pneumonia и S. sanguinis SS910 используются в качестве положительного и отрицательного контролей соответственно.

Образование кислоты в углеводных бульонах

  1. Принцип
    Способность бактерий образовывать кислоту в некоторых углеводных бульонах, но не в других, может использоваться в схемах идентификации. Если бактерии подкисляют углевод, pH изменится, и индикатор (бромкрезоловый пурпурный) станет желтым.
  2. Инокулят
    Ночная культура в бульоне Тодда Хьюитта, инкубированная в течение ночи при 35 ° C, или свежая бактериальная суспензия в бульоне Тодда Хьюитта может использоваться в качестве инокулята.
  3. Реактивы и материалы
    1. Бульон Heart Infusion с 1% углеводов и 0,16 бром-крезоловым пурпурным индикатором. Большинство углеводных бульонов коммерчески доступны (Ремел). Звездочкой отмечены те, которые сделаны CDC media lab.
    2. Пипетка
  4. Процедура
    1. Засейте пробирку углеводного бульона 1-3 каплями посевного материала. 2. Затем пробирку с бульоном инкубируют при температуре 35 ° C до 7 дней на воздухе. Придирчивые организмы могут содержаться до 14 дней.
  5. Чтение и интерпретация
    Положительная реакция регистрируется, когда бульон становится желтым. Отрицательная реакция — это отсутствие изменения цвета. Определенное изменение цвета, не совсем желтого, можно интерпретировать как слабую положительную реакцию.
  6. Ограничения
    Не инкубируйте в CO 2 , так как это может изменить pH.
  7. Контроль качества
    Каждая партия и партия углеводной бульонной среды при поступлении в лабораторию проверяются на наличие положительных и отрицательных реакций.Штаммы и реакции для каждого бульона перечислены ниже.
Углеводы Положительная реакция
Штамм № вид
Отрицательная реакция
Номер штамма
Арабиноза SS-1274, E. faecium SS-1273, E. faecalis
Глицерин SS-1273, E. faecalis SS-2174, E. faecium
Инулин SS-1229, E.касселифлавус СС-429. S. mitis
Лактоза SS-1273, E. faecalis SS-1419, P. acidilactici
Лактоза SS-1273, E. faecalis SS-1419, P. acidilactici
Мальтоза SS-1273, E. faecalis SS-1419, P. acidilactici
Маннитол SS-1273, E.faecalis SS-1419, P. acidilactici
Мелебиоза SS-1229, E. casseliflavus SS-1273, E. faecalis
* м-α-D-глюкопиранозид SS-1229, E. casseliflavus SS-1273, E. faecalis
* пуллулан SS-1633, G. balaenoptera SS-1138, G. adiacens
Рафиноза SS-1229, E.касселифлавус SS-1273, E. faecalis
Рибоза SS-1273, E. faecalis SS-1317 E. casseliflavus
Сорбитол SS-1273, E. faecalis SS-1227, E. hirae
Sorbose SS-817, E. avium SS-1273, E. faecalis
Сахароза SS-1273, E.faecalis SS-1419, P. acidilactici
* Тагатоза SS-1138, G. adiacens SS-1633, G. balaenoptera
трегалоза SS-1273, E. faecalis SS-1344, S. equi
Ксилоза SS-1503, E. porcinus SS1404, E. ratti

Начало страницы

Гидролиз аргинина

  1. Принцип
    Некоторые бактерии содержат ферменты, гидролизующие аргинин.Этот гидролиз приводит к щелочному изменению среды, что приводит к изменению цвета среды. Этот тест можно использовать для дифференцированных различных бактерий.
  2. Инокулят
    Капля бульонной культуры Тодда Хьюитта, выращенная в течение ночи, является предпочтительным инокулятом. В качестве альтернативы в качестве инокулята можно использовать суспензию в бульоне Тодда Хьюитта, образовавшегося в результате роста на чашке или небольшого количества нароста на чашке.
  3. Реактивы и материалы
    1. Декарбоксилазный бульон Мёллера, содержащий аргинин.Среда имеется в продаже.
    2. Пипетка или петля
  4. Процедура
    1. Добавьте 1-3 капли культуральной суспензии в пробирку с декарбоксилазной средой Мёллера, содержащей аргинин
    2. Немедленно покрыть стерильным минеральным маслом (примерно 1-2 мл).
    3. Среду инкубируют при температуре 35 ° C до 7 дней на воздухе. (Некоторые привередливые организмы могут удерживаться до 14 пенсов.)
  5. Чтение и интерпретация
    Положительная реакция регистрируется, когда бульон становится темно-фиолетовым, что указывает на щелочную реакцию, выделяется NH 3 .Появление желтого цвета или отсутствие изменения цвета бульона свидетельствует об отрицательной реакции.
  6. Контроль качества
    Каждая новая партия и партия среды проверяется на наличие положительных и отрицательных реакций. E. faecalis штамм SS1273 используется для определения положительных реакций, а S. avium штамм SS817 используется для определения отрицательных реакций.

Начало страницы

Тест на бацитрацин

  1. Принцип
    Бацитрациновый диск — это тест на чувствительность, используемый для дифференциации бета-гемолитического стрептококка .
  2. Инокулят
    Ночная культура, выращенная на 5% агаре с овечьей кровью, инкубированная при 35 ° C в CO 2 .
  3. Реактивы и материалы
    1. бацитрациновый диск «А» (BBL)
  4. Процедура
    1. Выберите бета-гемолитическую колонию и сильно засевайте квадрант чашки с агаром с 5% овечьей кровью.
    2. Бросьте диск «А» в самой тяжелой зоне посева.
    3. Слегка постучите по диску, чтобы убедиться, что он прилегает к агару.
    4. Инкубируйте планшет в течение ночи в CO 2 при 35 ° C.
  5. Чтение и интерпретация
    Любая зона подавления считается положительным тестом или чувствительным тестом. Рост до края диска интерпретируется как отрицательный тест или тест на устойчивость.
  6. Ограничения
  7. Контроль качества
    Контроль качества проводится для каждой партии и каждой партии бацитрацинового диска. Streptococcus pyogenes — положительный (чувствительный контроль), а Enterococcus faecalis SS1273 — резистентный или отрицательный контроль.Результаты заносятся в журнал контроля качества.

Тест на эскулин желчи

  1. Принцип
    Селективная и дифференциальная среда, используемая для идентификации каталазонегативных бактерий. Селективный агент желчи, подавляет большинство грамположительных бактерий. Энтерококки и Streptococcus bovis будут расти. Эскулин в среде гидролизуется до эскулетина и декстрозы. Эскулетин реагирует с хлоридом железа в среде с образованием черно-коричневого цвета.
  2. Инокулят
    Ночная культура в бульоне Тодда Хьюитта, инкубированная в течение ночи при 35 ° C, или свежая бактериальная суспензия в бульоне Тодда Хьюитта может использоваться в качестве инокулята. Также можно использовать инокуляционную петлю с культурой.
  3. Реактивы и материалы
    1. Желчный эскулин наклонный (Remel)
  4. Процедура
    1. Пробирка для посева с 1 каплей посевного материала, позволяющая капле стекать под наклоном. В качестве альтернативы, скошенный сент может быть засеян петлей роста из чашки с кровяным агаром.
    2. Затем скос инкубируют при 35 ° C в течение 2 дней на воздухе. Придирчивые организмы могут содержаться до 14 дней.
  5. Чтение и интерпретация
    Тест на эскулин желчи дает положительный результат, когда черный цвет образует половину или более уклона. Если почернения не происходит, тест отрицательный.
  6. Ограничения
    Не инкубируйте среду в атмосфере двуокиси углерода. Увеличение C0 2 приведет к лучшему росту стрептококков viridans и увеличит вероятность положительной реакции на БЭ. Streptococcus bovis и энтерококки не требуют C0 2 для хорошего роста.
  7. Контроль качества
    Положительные и отрицательные реакции определяются на каждую новую партию и отгрузку носителя. Enterococcus faecalis штамм SS-1273 используется для реакций положительного контроля, а штамм Streptococcus sanguinis SS-910 используется для реакций отрицательного контроля. Результаты заносятся в журнал контроля качества.

Начало страницы

Тест на растворимость в желчи

  1. Принцип
    Цель теста на растворимость в желчи — помочь дифференцировать S.pneumonia e от всех других альфа-гемолитических стрептококков. Дезоксихолат натрия (2%) действует на клеточную стенку пневмококков, вызывая лизис.
  2. Инокулят
    Ночная культура, выращенная на кровяном агаре, инкубированная при 35 ° C в CO 2 .
  3. Реактивы и материалы
    1. 2% дезоксихолат (Центральная сервисная лаборатория CDC, формула № 5333)
    2. физиологический раствор pH 7,0 Стеклянная трубка 3,13 X 100 мм
  4. Процедура
    1. Сделайте 1,0 мл физиологической суспензии клеток, выращенных на чашке с агаром.Следует использовать мутность, равную стандарту плотности МакФарланда от 1,0 до 2,0.
    2. После достижения удовлетворительной плотности суспензию разделите на 2 пробирки примерно по 0,5 мл в каждой.
    3. Добавьте 0,5 мл 2% дезоксихолата натрия (желчных солей) в одну пробирку и 0,5 мл физиологического раствора в другую пробирку. Перемешать энергичным встряхиванием.
    4. Инкубируйте пробирки при температуре 35–37 ° C до 2 часов.
  5. Чтение и интерпретация
    Периодически проверяйте наличие мутности.Устранение помутнения в желчной трубке, но не в контрольной пробирке с физиологическим раствором, указывает на положительный результат теста, то есть клетки пневмококка лизировались («растворялись»). Если трубка, содержащая клетки и желчь, не очистилась, тест отрицательный. Иногда некоторые штаммы пневмококков лишь частично растворяются в желчных солях, то есть происходит частичное очищение. Эти штаммы должны иметь соответствующую зону ингибирования вокруг оптохинового теста, чтобы их можно было назвать пневмококками. Частично растворимые штаммы с зонами ингибирования менее 14 мм не считаются пневмококками.
  6. Ограничения
    Мутность должна быть достаточной для определения разницы в контрольной пробирке с физиологическим раствором.
  7. Контроль качества
    Каждая новая партия дезоксихолата тестируется на наличие положительных и отрицательных реакций с использованием штамма S. pneumonia, e ATCC-49619 (положительный результат) и штамма S. mitis SS-429 (отрицательный результат). Результаты заносятся в журнал контроля качества.

Начало страницы

Тест лагеря

  1. Принцип
    Некоторые бактерии продуцируют фактор САМР (диффундирующий внеклеточный белок), который синергетически действует с бета-лизином Staphylococcus aureus и усиливает лизис красных кровяных телец.Целью теста CAMP является помощь в идентификации негемолитических стрептококков группы B и других ß-гемолитических стрептококков.
  2. Посевной материал
    Рост из чашки с кровяным агаром или любой твердой среды.
  3. Реактивы и материалы
    TSA-агар с овечьей кровью
  4. Процедура
    1. CAMP-тест проводится на агаре TSA с овечьей кровью. Одиночная полоска ß-лизина, продуцирующая S. aureus , сделана по центру пластины. Штамм SS-695 (номер Strep. Lab представляет собой штамм-продуцент ß-лизина S.aureus .
    2. Одиночная колония неизвестного штамма (бета-гемолитических стрептококков) отбирается с помощью посевной петли и используется для создания одной полосы перпендикулярно, но не касаясь полосы S. aureus . Между полосами должно оставаться расстояние 2-3 мм.
    3. Инкубируйте засеянный планшет в нормальной атмосфере в течение ночи при 35 ° C. Стрептококки группы B и некоторые другие бета-стрептококки вызывают усиление активности ß-лизина штамма S. aureus .
  5. Чтение и интерпретация
    Это расширенное упражнение имеет форму наконечника стрелки на стыке двух полос, причем самая широкая часть наконечника стрелки находится на стороне группы B.
  6. Ограничения
    Не инкубируйте в анаэробной среде или при CO. 2 . Некоторые штаммы S. pyogenes дают положительную реакцию при инкубации в CO 2 .
  7. Контроль качества
    Коммерчески доступный агар TSA с овечьей кровью не всегда демонстрирует правильную реакцию CAMP.Поэтому необходимо тестировать известный стрептококк группы B на реакцию CAMP в качестве положительного контроля на каждой тестовой пластине. Штамм стрептококка группы B SS-617 следует использовать в качестве положительного контроля на каждой тестовой пластине.

Начало страницы

Тест каталазы

  1. Принцип
    Перекись водорода (H 2 O 2 ) используется для определения того, продуцируют ли бактерии фермент каталазу.
  2. Inoculum
    Культуры, выращенные на среде, не содержащей крови, или колония, выращенная на чашке с кровяным агаром, которую осторожно переносят на предметное стекло без переноса каких-либо эритроцитов.Культуры обычно выращивают в течение ночи при 35 ° C в CO 2 .
  3. Реактивы и материалы
    1. Трехпроцентный перекись водорода получают в коммерческой аптеке.
    2. Пипетка
    3. Слайды
  4. Процедура
    1. Тест на каталазу лучше всего выполнять, залив рост бактерий (обычно на скошенном агаром, но можно использовать чашки с агаром без крови) 1,0 мл 3% перекиси водорода и наблюдая за вскипанием (пузырьками), указывающими на положительный тест.Бактерии необходимо выращивать на среде, не содержащей крови.
    2. Модификации теста на каталазу могут быть выполнены путем очень осторожного удаления ростковой колонии с чашки с кровяным агаром с помощью пластиковой иглы или деревянной палочки-аппликатора и переноса колонии на предметное стекло. К колонии на предметном стекле добавляют каплю 3% перекиси водорода и наблюдают за вскипанием.
  5. Чтение и интерпретация
    Любой признак пузырьков интерпретируется как положительный результат теста. Отсутствие пузырей трактуется как отрицательный.
  6. Ограничения
    Получение ложноположительных результатов при переносе эритроцитов. Слабые положительные результаты следует повторить на среде без крови. Тест на каталазу очень эффективно дает большинство различий, однако в некоторых случаях тест на каталазу и морфология колоний будут вводить в заблуждение.
  7. Контроль качества
    Контроль качества каталазы выполняется один раз на партию и отгрузку. Для положительной реакции используют посевы без крови на Staphylococcus aureus : i.е., штамм Cowen I, но можно использовать и другие подтвержденные культуры стафилококков. Для отрицательной реакции используют штамм Streptococcus sanguinis , штамм SS-910 (ATCC-10556). Сделайте запись в руководстве по контролю качества.

Начало страницы

Тест на клиндамицин

  1. Принцип
    Устойчивость бактерий к клиндамицину определяют с помощью диска клиндамицина в концентрации 2 мкг / мл. Эта устойчивость полезна для дифференциации вида Lactococcus .
  2. Посевной материал
    Рост из чашки с кровяным агаром или любой твердой среды.
  3. Реактивы и материалы
    1. диск клиндамицина 2 мкг / мл
    2. пластина с кровяным агаром
  4. Процедура
    Бактерии распределяют на чашку с агаром с 5% овечьей кровью, диск помещают на чашку и планшет инкубируют при 35 ° C в течение 18-24 часов в CO 2 .
  5. Чтение и интерпретация
    Любая зона запрета вокруг диска считается чувствительной. Зоны обычно 20мм.
  6. Ограничения
  7. Контроль качества
    Контроль качества проводится для каждой партии и отгрузки. Lactococcus lactis используется для отрицательного контроля (чувствительный) и L. garviae используется для положительного контроля (устойчивый).

Начало страницы

Гидролиз эскулина

  1. Принцип
    Дифференциальная среда, используемая для идентификации каталазонегативных бактерий. Эскулин в среде гидролизуется до эскулетина и декстрозы. Эскулетин реагирует с хлоридом железа в среде с образованием черно-коричневого цвета.
  2. Инокулят
    Ночная культура в бульоне Тодда Хьюитта, инкубированная в течение ночи при 35 ° C, или свежая бактериальная суспензия в бульоне Тодда Хьюитта может использоваться в качестве инокулята.Также можно использовать инокулирующую петлю культуры из чашки с кровяным агаром.
  3. Реактивы и материалы
    1. Эскулин наклонный (Ремель)
  4. Процедура
    1. Засейте косую пробирку 1-3 каплями посевного материала, чтобы капля стекала вниз под наклоном. В качестве альтернативы, скошенный сент может быть засеян петлей роста из чашки с кровяным агаром.
    2. Затем скос инкубируют при 35 ° C в течение 7 дней на воздухе. Придирчивые организмы могут содержаться до 14 дней.
  5. Чтение и интерпретация
    Тест на эскулин положительный, когда черный цвет образует более половины или более уклона.Если почернения не происходит, тест отрицательный.
  6. Ограничения
    Не инкубируйте среду в атмосфере двуокиси углерода. Увеличение C0 2 приведет к лучшему росту стрептококков viridans и увеличит вероятность положительной реакции. Streptococcus bovis и энтерококки не требуют C0 2 для хорошего роста.
  7. Контроль качества
    Положительные и отрицательные реакции определяются на каждую новую партию и отгрузку носителя. Enterococcus faecalis штамм SS-1273 используется для реакций положительного контроля, а штамм Streptococcus mitis SS-429 используется для реакций отрицательного контроля.Результаты заносятся в журнал контроля качества.

Начало страницы

Газ из отвара МРС

  1. Принцип
    Производство газа из глюкозы проверено в бульоне Lactobacillus MRS.
  2. Инокулят
    Ночная культура в бульоне Тодда Хьюитта, инкубированная в течение ночи при 35 ° C, или свежая бактериальная суспензия в бульоне Тодда Хьюитта может использоваться в качестве инокулята. Также можно использовать инокулирующую петлю культуры из чашки с кровяным агаром.
  3. Реактивы и материалы
    Бульон MRS готовится в Центральной лаборатории обслуживания CDC, формула No.9208. Вазелин также готовят в центральной сервисной лаборатории CDC, формула № 9356.
  4. Процедура
    В бульон засевают 2 или более колоний из чашки или 1-2 капли бульонной культуры. Затем бульон запечатывают расплавленным вазелином и инкубируют пробирку при температуре окружающей среды 37 ° C до 7 дней.
  5. Чтение и интерпретация
    На образование газа указывает образование газа между бульоном и пробкой из вазелинового масла, которая толкает восковую пробку к верху трубки.Маленькие пузырьки, которые могут накапливаться в течение инкубационного периода, не считаются положительными, только когда восковая пробка отделена от бульона, результат теста считается положительным. Большинство штаммов лейконостока являются положительными через 24 часа, но для некоторых штаммов может потребоваться больше времени.
  6. Ограничения
  7. Контроль качества
    Каждая новая партия бульона MRS, приготовленная центральной сервисной лабораторией CDC, проверяется на наличие положительных (образование газа) и отрицательных (отсутствие газа) реакций. Leuconostoc mesenteroides Штамм SS-1238 (ATCC-8293) используется для получения положительного результата, а штамм Streptococcus sanguinis SS-910 (ATCC-10556) используется для получения отрицательного газа.Результаты записываются в журнал контроля качества.

Начало страницы

Пятно по грамму

  1. Принцип
    Окраска по Граму используется для различения грамположительных и грамотрицательных бактерий. Также может быть определена клеточная морфология. И грамположительные, и грамотрицательные бактерии окрашиваются кристаллическим фиолетовым. Добавление йода образует комплекс внутри клеточной стенки. Добавление обесцвечивающего средства удаляет пятна с грамотрицательных организмов из-за повышенного содержания в них липидов.Эти клетки окрашиваются в розовый цвет сафранином, окрашивающим контр-краситель.
  2. Инокулят
    Окрашивание по Граму можно проводить на росте любого штамма, выращенного на любом типе среды. Однако для этой группы бактерий (грамположительные кокки) лучше всего проводить анализ роста бактерий в тиогликолятном бульоне при 24-часовой инкубации. При приготовлении мазка из тиогликолятного бульона процедура окрашивания видоизменяется. Мазок нельзя прикрепить к предметному стеклу с помощью серы, его необходимо зафиксировать метанолом.
  3. Реактивы и материалы
    1. Кристально-фиолетовый морилка
    2. Грамм йода (объединить концентрат йода в граммах с разбавителем йода в граммах)
    3. Раствор для обесцвечивания
    4. Метанол
    5. Слайды
    6. Инокуляционная петля
    7. Микроскоп с иммерсионным объективом
  4. Процедура
    1. Распределите одиночную петлю культуры из бульона тиогликолата на предметное стекло микроскопа.Распределите культуру от 1/3 до 1/2 общей площади предметного стекла.
    2. Дайте мазку высохнуть на воздухе. Это может занять до 1 часа в зависимости от температуры и влажности в помещении.
    3. Покройте весь бактериальный мазок 3 или 4 каплями метанола, чтобы зафиксировать мазок, и дайте ему высохнуть на воздухе. Опять же, это может занять до часа.
    4. Покройте бактериальный мазок пятном кристально-фиолетового цвета и дайте постоять 1 минуту. Аккуратно удалите пятно прохладной водопроводной водой и слейте воду с предметного стекла.
    5. Залейте мазок граммами йода и дайте постоять 1 минуту. Аккуратно смойте йод водой и слейте воду с предметного стекла.
    6. Промойте бактериальный мазок раствором обесцвечивающего средства в течение 10 секунд; обесцвечивание завершено, когда раствор стекает с предметного стекла. Осторожно промойте водой и слейте жидкость с предметного стекла.
    7. Покройте бактериальный мазок пятном сафранина и дайте постоять 1 минуту, затем осторожно смойте пятно с предметного стекла.
    8. Промокните предметное стекло абсорбирующей бумагой и осмотрите предметное стекло под масляной иммерсионной линзой.
  5. Чтение и интерпретация
    Окраска по Граму используется для помощи в дифференцировке грамположительных кокков. Расположение клеток помогает различать роды. Бактерии, которые делятся в произвольных плоскостях, образуют гроздья клеток, напоминающие виноград. Такой тип расположения обычно наблюдается у стафилококков. Бактерии, которые делятся на одной плоскости, образуют пары и в конечном итоге образуют цепочки, если клетки остаются прикрепленными друг к другу. Такой тип клеточной морфологии наблюдается у стрептококков.Бактерии, которые делятся на две плоскости под прямым углом, образуют пакеты из четверок или тетрад. Такое расположение наблюдается у аэрококков. Одна из самых сложных задач, стоящих перед микробиологом, — определить, действительно ли клеточная морфология клеток является кокками или короткими палочками. Поскольку многие лактобациллы представляют собой короткие цепочки грамположительных палочек, их иногда путают со стрептококками. Клинические источники и морфология колоний на пластинах с кровяным агаром лактобацилл также аналогичны стрептококкам, особенно членам стрептококков viridans.При чтении окраски по Граму помните, что клеточная структура никогда не состоит из 100% цепочек, пар, тетрад или кластеров. Микробиолог должен определить наиболее распространенное расположение клеток. Например, для вида Gemella можно наблюдать несколько пар и коротких цепочек, а также тетрады. Если тетрады наблюдаются в большинстве наблюдаемых полей, то деформация делится на две плоскости, и это следует регистрировать.
  6. Ограничения
    Молодые культуры дают более характерные наблюдения, чем старые.Более старые культуры могут окрашивать грамотрицательные. Пятна, подвергшиеся воздействию противомикробных реагентов, могут иметь атипичную морфологию и более подвержены обесцвечиванию. Обесцвеченные грамположительные организмы будут казаться грамотрицательными.
  7. Контроль качества
    Контроль качества окрашивания по грамму проводят один раз в неделю. Засейте штамм SS910 Streptococcus sanguinis и Escherichia coli 25922 в среде тиогликолевого бульона и инкубируйте в течение ночи при температуре окружающего воздуха 35 ° C. Подготовьте слайд, используя по 1 петле каждой культуры на том же слайде.Слайды могут быть заранее зафиксированы и сохранены. Завершенная процедура должна показать грамположительные кокки в цепочках и грамотрицательные палочки. Запишите результаты в руководство по контролю качества.
  8. Ссылки
    Murray, P.R., Baron, E.J., Jorgensen, J.J., Pfaller, M.A., and Yolken, R.H. Manual of Clinical Microbiology, 8th ed. ASM Press: Вашингтон, округ Колумбия, 2003.

Начало страницы

Рост при 10 ° C и 45 ° C

  1. Принцип
    Рост при 10 ° C и 45 ° C определяется в основной среде сердечного инфузионного бульона и может использоваться в качестве дифференциального теста для каталазо-отрицательных грамположительных кокков.
  2. Инокулят
    Ночная культура в бульоне Тодда Хьюитта, инкубированная в течение ночи при 35 ° C, или свежая бактериальная суспензия в бульоне Тодда Хьюитта может использоваться в качестве инокулята. Также можно использовать инокуляционную петлю с культурой
  3. Реактивы и материалы
    1. Сердечный бульон на основе бульона, средний номер Ремела 061030.
  4. Процедура
    1. Две пробирки с бульоном засевают одной или двумя колониями или одной-двумя каплями ночной культуры бульона Тодда Хьюитта.
    2. Инкубируйте каждую пробирку при соответствующих температурах, 10 ° C и 45 ° C. Для инкубатора 10 ° C достаточно холодильника, который можно отрегулировать для поддержания температуры 10 ° C. Холодильник можно использовать для хранения медиа и других материалов. Для инкубатора на 45 ° C лучше всего подходит баня с горячей водой, настроенная на поддержание температуры 45 ° C.
    3. Испытания проводятся минимум 7 дней и до 14 дней в случае медленнорастущих сортов.
  5. Чтение и интерпретация
    Увеличение мутности указывает на рост и положительный результат теста.Изменение цвета не требуется для положительного результата теста.
  6. Ограничения
    Убедитесь, что уровень воды в водяной бане 45C выше уровня среды в трубках. Кроме того, крышки средних пробирок должны быть тщательно закрыты.
  7. Контроль качества
    Каждая новая партия бульона проверяется на положительные и отрицательные реакции. Enterococcus faecalis штамм SS-1273 используется для положительных (ростовых) реакций как при 10 ° C, так и при 45 ° C. Streptococcus sanguinis штамм SS-910 используется для отрицательных реакций (отсутствие роста) как при 10 ° C, так и при 45 ° C.

Начало страницы

Гемолиз

  1. Принцип
    Гемолитическая реакция особенно полезна при дифференцировке стрептококков. Гемолитическую реакцию определяют на агаризованных средах, содержащих 5% крови животных. Наиболее часто используемой базовой средой является соевый агар с триптиказой, а наиболее часто используемая кровь — это овечья кровь. Причина использования соевой основы триптиказы заключается в том, что она поддерживает рост всех бактерий, перечисленных в таблице 2. Можно заменить другие базовые среды, если контрольные штаммы всех родов тестируются на рост.Овечья кровь используется из-за удобства тестирования мазков из зева на бета-гемолитические стрептококки. Овечья кровь не поддерживает рост Haemophilus haemolyticus , который похож на стрептококки на агаре, содержащем кровь кролика, лошади или человека.
  2. Инокулят
    Чистая культура на твердой среде.
  3. Реактивы и материалы
    1. Чашки с триптиказо-соевым агаром, содержащим 5% овечьей крови, получают от Becton-Dickinson Microbiology Systems, Cockysville Md., товар № 21261.
  4. Процедура
    1. Штриховая культура для выделения на чашке TSA с 5% овечьей кровью.
    2. Инкубируйте планшет при 35 ° C в CO 2 в течение 24 часов.
  5. Чтение и интерпретация
    Бета-гемолитическая реакция интерпретируется как полное очищение вокруг колонии. Альфа-гемолическая реакция интерпретируется как озеленение вокруг колонии, а гамма-гемолиз интерпретируется как отсутствие изменений в среде, окружающей колонию.Гемолитическая реакция на кровяном агаре сложна и зависит от многих переменных. Для полного объяснения и интерпретации реакций читатель может обратиться к публикации 1977 г., CDC Laboratory Update, Isolation and Identification of Streptococci. Часть I. Сбор, транспортировка и определение гемолиза, Приложение 1. Применение интерпретаций гемолитических реакций на стрептококки, описанных в Обновлении, к другим родам не должно быть проблемой.
  6. Ограничения
  7. Контроль качества
    При нормальных условиях эксплуатации качество чашек с кровяным агаром не контролируется в нашей лаборатории, а контролируется компанией Becton-Dickinson Microbiology Systems.Гемолитическая реакция большинства бактерий, представленных в эту лабораторию, известна и идентифицирована с культурой при отправке. Если проблема должна быть идентифицирована, штаммы контроля качества используются для проверки правильных гемолитических реакций. Streptococcus pyogenes штамм SS-103 используется для определения бета-гемолиза, Streptococcus sanguinis штамм SS-910 используется для определения альфа-гемолиза и Streptococcus bovis штамм SS-752 используется для определения отсутствия реакции (ни один бета или альфа-гемолиз) на пластинах с триптиказо-соевым 5% агаром с овечьей кровью.Все реакции определены в соответствии с обновлением лаборатории CDC 1977 года, изоляция и идентификация стрептококков. Часть I. Сбор, транспортировка и определение гемолиза (см. Приложение 1).

Начало страницы

Тест гидролиза гиппурата

  1. Принцип
    Некоторые бактерии вырабатывают фермент гиппуратгидролазу, который гидролизует гиппурат натрия с образованием бензойной кислоты и глицина. Добавление хлорида железа к бензойной кислоте приводит к образованию нерастворимого осадка бензоата железа коричневого цвета.
  2. Инокулят
    Ночная культура в бульоне Тодда Хьюитта, инкубированная при 35 ° C, или свежая бактериальная суспензия в бульоне Тодда Хьюитта может использоваться в качестве инокулята. Также можно использовать инокулирующую петлю культуры из чашки с кровяным агаром.
  3. Реактивы и материалы
    1. Коммерческие поставщики бульона гиппурата.
    2. Хорид железа (FeCl 3 ) коммерческие поставки. Маркируется как TDA при покупке для bioMereiux
  4. Процедура
    1. В бульон гиппурата вносят одну каплю свежей (16-20 ч) культуры бульона Тодда-Хьюитта.
    2. Бульон инкубируют до 7 дней или до появления мутного роста при 35 ° C.
    3. Затем пробирку с бульоном центрифугируют для осаждения бактерий.
    4. Перенесите 0,8 мл прозрачного супернатанта в небольшую прозрачную пробирку (13 x 100).
    5. Добавьте 0,2 мл реагента хлорида железа к супернатанту. Хорошо смешать.
  5. Чтение и интерпретация
    Сильный осадок, который не исчезает в течение 10 минут, указывает на положительный результат теста. Прозрачная жидкость золотисто-коричневого цвета свидетельствует об отрицательном результате теста.
  6. Ограничения
    Перед тестированием рост должен быть мутным. Некоторые привередливые организмы могут плохо расти.
  7. Контроль качества
    Группа B Streptococcus штамм SS-620 использовали в качестве положительного контроля, а E. avium штамм SS-817 использовали в качестве отрицательного контроля. Контроль качества выполняется с каждым новым номером партии и каждой партией бульона гиппурата, а также с каждой новой партией и отгрузкой реагента хлорида железа. Результаты теста контроля качества записываются в журнал контроля качества.

Начало страницы

Антиген группы Лэнсфилда

  1. Принцип
    Целью определения группового антигена ß-гемолитических стрептококков является определение вида или вида / группы стрептококков, как первоначально описано Ребеккой Лансфилд. Кислотная экстракция используется для удаления серогруппы из клетки.
  2. Инокулят
    Ночная культура объемом 50 мл в бульоне Тодда Хьюитта, инкубированная при 35 ° C.
  3. Реактивы и материалы
    1. 50 мл культуры
    2. Капиллярная трубка 50 мкл
    3. м-крезол фиолетовый
    4. Пробирка 13 X 100 мм
    5. баня кипящая
    6. центрифуга
    7. флакон 1 куб. См
    8. Реагенты серогруппировки
  4. Процедура
    1. Центрифугируйте клетки за 20 минут при 2000 об / мин, чтобы получить осадок клеток.
    2. Аспирируйте супернатант.
    3. Добавьте 2-3 капли м-крезола пурпурного. По каплям добавляют 0,1 н. HCl до тех пор, пока цвет не изменится на розовый. Вихрь.
    4. Поместите пробирку в кипящую водяную баню на 10 минут.
    5. После охлаждения перенесите содержимое в пробирку 13 X100.
    6. Центрифуга при 2800 об / мин в течение 10 минут для удаления осадка.
    7. Перенос в чистую пробирку 13 х 100 мм
    8. По каплям добавляют 0,5 н. NaOH до пурпурного цвета.
    9. Центрифуга при 2800 об / мин в течение 10 минут для удаления осадка.
    10. Перенести во флакон с завинчивающейся крышкой емкостью 1 мл.
    11. Набор капиллярных пробирок, добавляя примерно 1 см реагента для определения серогруппы и 1 см экстракта. Будьте осторожны, чтобы между ними не было места или пузырей!
    12. Накройте конец глиной и установите в глиняную стойку.
    13. Наблюдать до 30 минут.
  5. Чтение и интерпретация
    Определенная линия или зона осадков, образующаяся между ними, считается положительной.
  6. Ограничения
    Группа D иногда дает слабые реакции.
  7. Контроль качества
    Контроль качества выполняется при приготовлении каждой партии реагента для определения серогруппы.

Начало страницы

Лейцинаминопептидаза (LAP)

  1. Принцип
    Некоторые бактерии продуцируют лейцинаминопептидазу, которая гидролизует субстрат лейцин-β-нафтиламид с образованием β-нафтиламина. Цвет от розового до красного образуется при добавлении п-диметиламиноциннамальдегида (реагент PYR) к бета-нафтиламину.
  2. Inoculum
    Штаммы выращивают на чашках с кровяным агаром в течение ночи при 35 ° C в CO 2 для большинства грамположительных бактерий.Для более требовательных родов, таких как гемеллы, аллоиококки и гелькококки, может потребоваться более 1 дня инкубации. Тестируемые штаммы выращивают на чашке с кровяным агаром до тех пор, пока не будет замечен рост, достаточный для значительного засева дисков.
  3. Реагенты и материалы
    Диск LAP (Remel)
    Реагент PYR
    Петли
    Деионизированная стерильная вода
  4. Процедура
    Процедура, которая используется в лаборатории Streptococcus , является измененной из вкладыша в упаковке.Тест PYR обычно проводится одновременно.
    1. Поместите диски на пластину с кровяным агаром в области с небольшим или нулевым ростом или на предметное стекло. Влага от пластины обычно достаточна для регидратации диска. Если диск помещается на предметное стекло, добавляется крошечная капля стерильной деионизированной воды. (НЕ ПЕРЕНОСЫВАЙТЕ ДИСК). Диск LAP удобно разместить слева (L = LAP).
    2. С помощью петли или деревянной палочки сильно засеять диски. Для получения удовлетворительных результатов необходимо использование двух или более циклов культивирования.
    3. Оставьте планшеты с дисками на столе при комнатной температуре на 10 минут.
    4. Добавьте реагент обнаружения и считайте через 3 минуты.
  5. Чтение и интерпретация
    Появление красного цвета в течение 3 минут является положительным. Нет изменений в цвете или желтый цвет отрицательный. Цвет проявляется сразу. Отменить тест через 10 минут.
  6. Ограничения
    Использование слишком малого количества посевного материала может привести к ложноотрицательным реакциям.
  7. Контроль качества
    Каждая партия и партия LAP-дисков проверяются на наличие положительных и отрицательных реакций. Enterococcus faecalis штамм SS-498 использовали для положительной реакции, а Aerococcus viridans штамм SS-1251 (ATCC-11563) использовали для отрицательной реакции.

Начало страницы

Тест на лакмусовое молоко

  1. Принцип
    Целью лакмусового теста молока является определение подкисления и сгустка молока в этом тесте. Эти тесты помогают дифференцировать виды Leuconostoc.
  2. Инокулят
    Ночная культура в бульоне Тодда Хьюитта, инкубированная при 35 ° C, или свежая бактериальная суспензия в бульоне Тодда Хьюитта может использоваться в качестве инокулята.Также можно использовать инокуляционную петлю с культурой.
  3. Реактивы и материалы
    Лакмусовое молоко получают от коммерческих поставщиков с использованием их контроля качества.
  4. Процедура
    1. Пробирки, содержащие лакмусовое молоко, засевают одной каплей ночной культуры бульона Тодда-Хьюитта.
    2. Инкубируйте при температуре 35 ° C до 7 дней на воздухе. Некоторые привередливые напряжения могут удерживаться в течение 14 дней.
  5. Чтение и интерпретация
    Пробирки проверяются на предмет изменения цвета.Трубки начинают окрашиваться в голубой цвет. Об образовании кислоты свидетельствует сначала розовый цвет, а затем он становится белым при продолжении инкубации. Об отрицательной реакции свидетельствует отсутствие изменения цвета. Пробирки также исследуют на предмет сгустка или затвердевания содержимого пробирки. Частичное или полное затвердевание содержимого пробирки свидетельствует о положительной реакции. Об отрицательной реакции свидетельствует отсутствие изменений консистенции содержимого пробирки.
  6. Ограничения
  7. Контроль качества
    Enterococcus faecalis SS-1273 используется в качестве положительного контроля, а E.hirae штамм SS-1227 использовали в качестве отрицательного контроля. КК проводится с каждым новым номером партии и каждой отгрузкой. Результаты проверки качества записываются в руководстве по контролю качества.

Начало страницы

Тест на подвижность

  1. Принцип
    Способность бактерий перемещаться через полутвердую среду полезна для дифференциации бактерий. Этот тест особенно полезен для дифференциации энтерококков.
  2. Inoculum
    Штаммы выращивают на чашках с кровяным агаром в течение ночи при 35 ° C в CO 2 для большинства грамположительных бактерий.Для более требовательных родов, таких как гемеллы, аллоиококки и гелькококки, может потребоваться более 1 дня инкубации.
  3. Реактивы и материалы
    1. среда для определения подвижности (Remel, номер 061408)
    2. игла посевная
  4. Процедура
    1. В среду засевают посевной иглой, а не петлей. Нанесите колонию на конец иглы с чашки с агаром.
    2. Игла вставляется в центр среды в трубке примерно на один дюйм.
    3. Пробирку с посевом инкубируют при 30 ° C на воздухе и инкубируют до тех пор, пока не будет наблюдаться хороший рост, в большинстве случаев достаточно от 24 до 48 часов.
  5. Чтение и интерпретация
    Штаммы, которые являются подвижными, будут расти наружу к краю пробирки и вниз к ее дну. Отрицательные деформации покажут рост только на линии укола.
  6. Ограничения
    Не устанавливайте тест на подвижность при 37 ° C. Некоторые штаммы становятся неподвижными при 37 ° C, но остаются подвижными при температурах от 25 ° C до 30 ° C.
  7. Контроль качества
    Enterococcus gallinarium SS-1228 используется в качестве положительного контроля, а E. faecalis штамм SS-1273 используется в качестве отрицательного контроля. КК проводится с каждым новым номером партии и каждой отгрузкой.

Начало страницы

Тест на толерантность к 6,5% NaCl

  1. Принцип
    Тесты на переносимость могут использоваться для дифференциации микроорганизмов. Некоторые бактерии могут расти в 6,5% NaCl, а другие подавляются этими концентрациями.Рост в бульоне, содержащем 6,5% NaCl, определяют на основе бульона для инфузии сердца с добавлением еще 6% NaCl. Основа сердечного настоя содержит 0,5% NaCl. Для облегчения чтения мы добавляем 0,5% -ный индикатор декстрозы и бромкрезоловый пурпурный индикатор.
  2. Инокулят
    Свежий инокулят, выращиваемый в бульоне Тодда Хьюитта, является предпочтительным. В качестве альтернативы можно использовать небольшую петлю роста из чашки с кровяным агаром.
  3. Реагенты и материалы
    Бульон с 6,5% NaCl 5 мл бульона Тодда Хьюитта Бульон с 6,5% NaCl приготовлен Центральной лабораторией CDC, формула No.1707. Этот состав идентичен модифицированному бульону с 6,5% NaCl, описанному в: Facklam, R. 1973. Сравнение нескольких лабораторных сред для предположительной идентификации энтерококков и стрептококков группы D. Прил. Microbiol. 26: 138-145.
  4. Процедура
    1. Одна или две колонии или одна или две капли ночной бульонной культуры засеваются в бульон, содержащий 6,5% NaCl.
    2. Засеянный бульон инкубируют при 37 ° C на воздухе в течение недели или более в зависимости от характеристик роста тестируемого штамма.Если для получения достаточного количества посевного материала требовалось 2 или 3 дня, то тест на толерантность к NaCl следует инкубировать от 10 до 14 дней. В некоторых случаях (большинство энтерококков) тест дает положительный результат после инкубации в течение ночи.
  5. Чтение и интерпретация
    Когда большинство штаммов растет, декстроза ферментируется, и цвет бульона меняется с пурпурного на желтый. Однако изменение цвета не требуется для положительного результата теста. Если наблюдается явное увеличение мутности, которое указывает на рост, без изменения цвета, это также считается положительным результатом.
  6. Ограничения
    Для определения толерантности энтерококков и стрептококков viridans к NaCl использовались другие базовые среды (инфузия мозга, сердца и триптиказа сои), но эти основы не тестировались с другими видами. Контроль качества.
  7. Контроль качества
    Каждая новая партия сред, подготовленная Центральной сервисной лабораторией CDC, проверяется на наличие положительных (рост) и отрицательных (отсутствие роста) реакций. Enterococcus faecalis штамм SS-1273 и Streptococcus sanguinis штамм SS-910 используются для положительной и отрицательной реакции соответственно.

Начало страницы

Тест оптохина

  1. Принцип
    Цель оптохинового теста — подтвердить идентификацию S. pneumonia e до серотипирования и помочь дифференцировать S. pneumonia e от стрептококков viridans во время надзорных исследований.
  2. Инокулят
    Изолированные альфа-гемолитические колонии, предположительно пневмококки.
  3. Реактивы и материалы
    1. дисков optochin AP @, приобретенных у Becton Dickinson Microbiology Systems, Кокисвилл, штат Мэриленд.
    2. чашки кровяного агара
  4. Процедура
    1. Перенесено изолированную колонию и полосу на четверть чашки с кровяным агаром
    2. Поместите оптохиновый диск «P» в верхнюю треть посевного материала. Коснитесь диска, чтобы убедиться, что он остается на носителе после того, как пластина перевернута.
    3. Планшет инкубируют в течение ночи при 35–37 ° C в сосуде для тушения свечей или инкубаторе с диоксидом углерода.
  5. Чтение и интерпретация
    Если используется диск диаметром 6 мм, зона ингибирования диаметром не менее 14 мм считается положительной для идентификации пневмококков.Зона подавления от 6 до 14 мм в диаметре считается сомнительной для идентификации пневмококков, поэтому следует провести тест на растворимость в желчи. Штаммы, растворимые в желчи с зонами подавления оптохинов от 6 до 14 мм, считаются пневмококками, а штаммы, не растворимые в желчи с такими же размерами зон, не считаются пневмококками.
  6. Ограничения
    Культуры не растут так хорошо в нормальной атмосфере, и большие зоны ингибирования могут вызвать неправильную идентификацию.
  7. Контроль качества
    Каждая новая партия и партия дисков optochin AP @ проверяется на наличие положительных и отрицательных реакций. S. pneumonia, штамм е ATCC-49619 ингибируется оптохином (положительная реакция), а штамм S. mitis
    SS-429 не ингибируется оптохином (отрицательная реакция). Результаты заносятся в журнал контроля качества.

Начало страницы

Тест на пигментацию

  1. Принцип
    Некоторые бактерии производят пигмент. Цель теста на пигментацию — помочь идентифицировать E.casseliflavus , E. mundtii , E. pallens , E. gilvus и E. sulfureus . Эти энтерококки производят желтый пигмент, который можно обнаружить на нескольких различных средах.
  2. Инокулят
    Неизвестный штамм Enterococcus выращивают на чашке с агаром с триптиказо-соевым 5% -ным агаром с овечьей кровью в течение 24 часов в нормальной атмосфере при 35 ° C.
  3. Реактивы и материалы
    1. ватный тампон
  4. Процедура
    1. С помощью ватного тампона возьмите бактериальный мазок размером 50 мм.
    2. Осмотрите тампон и мазок на наличие ярко-желтого цвета.
  5. Чтение и интерпретация
    Цвет от бледного до ярко-желтого интерпретируется как положительный. Кремовый, белый или серый цвет — отрицательный.
  6. Ограничения
    Тест следует повторить на культуре еще раз через 48 часов инкубации, если есть какие-либо сомнения относительно результатов через 24 часа.
  7. Контроль качества
    E. casseliflavus штамм SS-1229 используется для положительного контроля, а штамм E.faecalis штамм SS-1273 используется в качестве отрицательного контроля для определения пигментации.

Начало страницы

Тест на потребность в пиридоксале (витамин B6)

  1. Принцип
    Вариантные по питанию стрептококки ( Abiotrophia и Granulicatella ) обычно очень требовательны и будут расти только на среде с добавками или обогащенном шоколадном агаре. Эти штаммы нуждаются в пиридоксале для роста, в то время как не-NVS — нет. Конечная концентрация в бульоне 0.001% пиридоксаля поддержит рост NVS. Альтернативой проведению теста на потребность в пиридоксале является спутниковый тест.
  2. Инокулят
    Культуры обычно получают на скошенных шоколадных агарах.
  3. Реактивы и материалы
    1. 0,01% пиридоксаль *
    2. 2-TSA-пластина с агаром с овечьей кровью

    * 0,01% раствор пиридоксаля удобно хранить в лаборатории. Этот раствор готовят на очищенной воде и стерилизуют фильтрованием. Аликвоту 10 мл разливают в стерильные пробирки.Этот 0,01% раствор следует хранить замороженным при -20 ° C. Используемую аликвоту можно хранить при 4 ° C.

  4. Процедура
    1. Добавьте каплю 0,01% раствора на поверхность одной из чашек с агаром TSA-овечьей крови.
    2. Засейте обе чашки предполагаемым штаммом NVS.
    3. Инкубируйте при 35 ° C в CO. 2 от 24 до 72 часов.
  5. Чтение и интерпретация
    Если рост наблюдается на чашке, содержащей пиридоксаль, а не на чашке без пиридоксаля, штамм является NVS.
  6. Ограничения
  7. Контроль качества
    Нет никаких указаний по контролю качества реагентов или сред. Каждую партию пиридоксаля можно протестировать на предмет поддержки роста известного штамма NVS.

Начало страницы

Тест пирролидонилариламидазы (PYR)

  1. Принцип
    Некоторые бактерии продуцируют пирролидонилариламидазу, которая гидролизует субстрат L-пирролидонил-β-нафтиламид с образованием β-нафтиламина. Цвет от розового до красного образуется при добавлении п-диметиламиноциннам-альдегида (реагент PYR) к β-нафтиламину.
  2. Inoculum
    Штаммы выращивают на чашках с кровяным агаром в течение ночи при 35 ° C в CO 2 . Для более требовательных родов, таких как Gemella e, аллоиококки и гелькококки, может потребоваться инкубация более 1 дня. Тестируемые штаммы выращивают на чашке с кровяным агаром до тех пор, пока не будет замечен рост, достаточный для значительного засева дисков.
  3. Реагенты и материалы
    Диск PYR (Remel)
    Реагент PYR
    Петли
    Деионизированная стерильная вода
  4. Процедура
    Процедура, которая используется в лаборатории Streptococcus , является измененной из вкладыша в упаковке.Тест LAP обычно выполняется одновременно.
    1. Поместите диски на пластину с кровяным агаром в области с небольшим или нулевым ростом или на предметное стекло. Влага от пластины обычно достаточна для регидратации диска. Если диск помещается на предметное стекло, добавляется крошечная капля стерильной деионизированной воды. (НЕ ПЕРЕНОСЫВАЙТЕ ДИСК).
    2. С помощью петли или деревянной палочки сильно засеять диски. Для получения удовлетворительных результатов необходимо использование двух или более циклов культивирования.
    3. Оставьте планшеты с дисками на столе при комнатной температуре на 10 минут.
    4. Добавьте реагент обнаружения и считайте через 3 минуты.
  5. Чтение и интерпретация
    Появление красного цвета в течение 3 минут является положительным. Нет изменений в цвете или желтый цвет отрицательный. Цвет проявляется сразу. Отменить тест через 10 минут.
  6. Ограничения
    Использование слишком малого количества посевного материала может привести к ложноотрицательным реакциям.
  7. Контроль качества
    Каждая партия и партия дисков PYR проверяются на наличие положительных и отрицательных реакций. Enterococcus faecalis штамм SS-498 используется для положительной реакции и Streptococcus sanguinis штамм SS-910 используется для отрицательной реакции.

Начало страницы

Тест на использование пирувата

  1. Принцип
    Некоторые бактерии обладают способностью утилизировать пируват, что приводит к изменению pH. Бромтимоловый синий добавляется в среду в качестве индикатора, который приводит к изменению цвета с сине-зеленого на желтый.
  2. Инокулят
    Свежий инокулят, выращенный в бульоне Тодда Хьюитта, является предпочтительным.В качестве альтернативы можно использовать небольшую петлю роста из чашки с кровяным агаром.
  3. Реактивы и материалы
    Пируватный бульон (Центральная сервисная лаборатория CDC, формула № 1722)
  4. Процедура
    1. Засейте пируватный бульон одной каплей ночной культуры бульона Тодда-Хьюитта неизвестного штамма.
    2. Инкубируйте пробирку при 35 ° C в течение 7 дней на воздухе. Инкубация привередливых штаммов составляет 14 дней.
  5. Чтение и интерпретация
    О положительной реакции свидетельствует появление желтого цвета.Если бульон остается зеленым или зеленовато-желтым, результат теста отрицательный. Желтый цвет с оттенком зеленого обычно является положительной реакцией.
  6. Ограничения
  7. Контроль качества
    Тесты контроля качества проводятся для каждой новой партии приготовленной среды. E. faecalis штамм SS-1273 и S. sanguinis штамм SS-910 используются в качестве положительного и отрицательного контролей соответственно. Результаты заносятся в журнал контроля качества.

Начало страницы

Тестирование спутников (SAT)

  1. Принцип
    Вариантные по питанию стрептококки ( Abiotrophia и Granulicatella ) обычно очень требовательны и будут расти только на среде с добавками или обогащенном шоколадном агаре.Цель теста SAT — определить, является ли неизвестный штамм стрептококков разновидностью питательных веществ стрептококками (NVS). Этим штаммам для роста необходим пиридоксаль. Рост Staphylococcus aureus на чашке с агаром с овечьей кровью TSA высвобождает эти факторы, позволяя расти NVS. Альтернативой выполнению теста SAT является проверка потребности в витамине B6 (пиридоксале).
  2. Инокулят
    Культуры обычно получают на скошенных шоколадных агарах.
  3. Реактивы и материалы
    1. Золотистый стафилококк ATCC-25923
    2. TSA-пластина с агаром с овечьей кровью
  4. Процедура
    1. Нанесите штриховку представленной культуры по всей поверхности чашки агара TSA-овечий с кровяным агаром с помощью посевной петли.
    2. Затем наносят одиночную полоску Staphylococcus aureus ATCC-25923 через середину чашки с агаром.
    3. Инкубируйте планшет в сосуде для тушения свечей или инкубаторе с CO2 в течение 24 часов или более.
  5. Чтение и интерпретация
    Если штамм представляет собой NVS, рост будет появляться только рядом с полосой стафилококка шириной около 2–5 мм. Стрептококки, не являющиеся NVS, будут расти по всей поверхности чашки с агаром.
  6. Ограничения
  7. Контроль качества
    Нет никаких указаний по контролю качества для тестирования среды или штамма Staphylococcus для теста на сатилитизм.

Начало страницы

Тест гидролиза крахмала

  1. Принцип
    Некоторые бактерии способны гидролизовать крахмал на агаре с добавлением крахмала. Когда в крахмал добавляют йод, он становится темно-синевато-черным. Если крахмал был гидролизован, значит, он не может реагировать с йодом, и область вокруг роста бактерий остается чистой. Этот тест можно использовать для дифференциации некоторых бактерий.
  2. Inoculum
    Штаммы выращивают на чашках с кровяным агаром в течение ночи при 35 ° C в CO 2 .Для более требовательных родов, таких как Gemella e, аллоиококки и гелькококки, может потребоваться инкубация более 1 дня. Каплю бактериальной суспензии бульона Тодда Хьюитта также можно использовать для нанесения штрихов на чашку.
  3. Реактивы и материалы
    1. Двухпроцентный крахмальный агар (CDC Central Services Laboratory, формула № 1710.)
    2. Грамм йода
  4. Процедура
    1. Засейте чашку крахмального агара одной толстой полосой свежей культуры или нанесите каплю бульонной культуры на чашку.
    2. Инкубируйте планшет в CO 2 при 35 ° C в течение 48 часов. Некоторым штаммам может потребоваться более длительная инкубация для достаточного роста.
    3. После инкубации залейте планшет йодом по Граму.
  5. Чтение и интерпретация
    Чистая зона вокруг роста — положительный тест, свидетельствующий о гидролизе крахмала штаммом. Цвет агара от темно-фиолетового до черного или голубоватого указывает на то, что крахмал не гидролизован, и, следовательно, результат отрицательный. При отрицательных тестах глубокая окраска агара развивается вплоть до роста.
  6. Ограничения
    Некоторые привередливые сорта плохо растут.
  7. Контроль качества
    Каждая новая партия крахмального агара проходит контроль качества. S. bovis штамм SS-1224 используется для положительного контроля, а E. avium штамм SS-817 используется для отрицательного контроля.

Начало страницы

Образование слизи 5% сахарозного агара

  1. Принцип
    Целью выращивания неизвестных штаммов на агаре, содержащем 5% сахарозы, является определение способности штаммов образовывать внеклеточные полисахариды (леваны или декстраны) на агаре.
  2. Inoculum
    Штаммы выращивают на чашках с кровяным агаром в течение ночи при 35 ° C в CO 2 . Для более требовательных родов, таких как Gemella e, аллоиококки и гелькококки, может потребоваться инкубация более 1 дня. Каплю бактериальной суспензии бульона Тодда Хьюитта также можно использовать для нанесения штрихов на чашку.
  3. Реагенты и материалы
    Чашки с 5% сахарозным агаром (Центральная лаборатория центра контроля заболеваний, формула № 1714)
  4. Процедура
    1. Засейте 5% сахарозный агар свежим посевным материалом и штрихом для изолированных колоний.
    2. Инкубируйте чашку с агаром в CO 2 при 35 ° C в течение 48 часов. Некоторым привередливым сортам может потребоваться более длительная инкубация для роста.
    3. Осмотрите пластину на предмет леванов и декстранов. Петлю используют для соскабливания колоний на предмет вязкости или прилипания.
  5. Чтение и интерпретация
    Некоторые бактерии продуцируют леван в виде внеклеточного полисахарида. Колонии выглядят очень слизистыми, мукоидными и жидкими или в виде больших смолистых капель на агаре. Некоторые бактерии могут продуцировать декстраны, в которых колонии сухие и прилипают к планшету.Отрицательная реакция — это невозможность увидеть внеклеточный материал на 5% сахарозном агаре при визуальном осмотре или прикреплении петли.
  6. Ограничения
  7. Контроль качества
    Тесты контроля качества проводятся для каждой партии 5% сахарозного агара. Для контроля качества используются следующие штаммы: Leuconostoc mesenteroides, , штамм SS-1238 (положительный по образованию слизи, леваны), Streptococcus sanguinis, SS910 (положительный результат по прилипанию к декстранам) и Enterococcus , faecalis, (отрицательный штамм SS-1273). для леванов и декстранов).Результаты заносятся в журнал контроля качества.

Начало страницы

5% сахарозный бульон

  1. Принцип
    Целью выращивания неизвестных штаммов на агаре, содержащем 5% сахарозы, является определение способности штаммов образовывать внеклеточные полисахариды (леваны или декстраны) в бульоне.
  2. Inoculum
    Штаммы выращивают на чашках с кровяным агаром в течение ночи при 35 ° C в CO 2 . Для более требовательных родов, таких как Gemella e, аллоиококки и гелькококки, может потребоваться инкубация более 1 дня.Каплю бактериальной суспензии бульона Тодда Хьюитта также можно использовать для нанесения штрихов на чашку.
  3. Реактивы и материалы
    Пробирки с 5% сахарозным бульоном (Центральная сервисная лаборатория CDC)
  4. Процедура
    1. Засейте 5% сахарозный бульон свежим посевным материалом.
    2. Инкубируйте бульон при 35 ° C в течение 48 часов или дольше. Некоторым привередливым сортам может потребоваться более длительная инкубация для роста.
    3. Проверьте бульон на вязкость или нажмите кнопку геля.
  5. Чтение и интерпретация
    Некоторые бактерии продуцируют леван в виде внеклеточного полисахарида.Бульон выглядит очень густым и липким. Некоторые бактерии могут продуцировать декстраны, в которых гелевая кнопка прилипает к дну или бокам пробирки. Отрицательной реакцией является отсутствие визуального контроля вязкости или прилипания 5% сахарозного бульона. Наблюдается только увеличение мутности.
  6. Ограничения
  7. Контроль качества
    Тесты контроля качества проводятся для каждой партии, содержащей 5% сахарозы. Для контроля качества используются следующие штаммы: Leuconostoc mesenteroides, штамм SS-1238 (положительный результат на образование слизи — леваны), Streptococcus sanguinis SS910 (положительный результат на липкую гелевую кнопку декстранов) и Enterococcus штамм faecalis (отрицательно для леванов и декстранов).Результаты заносятся в журнал контроля качества.

Начало страницы

Тест на толерантность к теллуриту

  1. Принцип
    Толерантность к теллуриту определяют на агаровой среде, содержащей 0,04% теллурита калия. На этой среде будет расти очень мало каталазо-отрицательных грамположительных кокков. Основная цель теста на толерантность к теллуриту — помочь дифференцировать E. faecalis и E. faecium и другие энтерококки.
  2. Inoculum
    Штаммы выращивают на чашках с кровяным агаром в течение ночи при 35 ° C в CO 2 .Для более требовательных родов, таких как Gemella e, аллоиококки и гелькококки, может потребоваться инкубация более 1 дня. Капля бактериальной суспензии бульона Тодда Хьюитта также может быть использована для нанесения штрихов на скос.
  3. Реактивы и материалы
    1. Скошенные слои теллуритового агара (теллурит калия 0,04%, Центральная сервисная лаборатория CDC, формула № 9358)
  4. Процедура
    1. Засейте скошенный участок одной каплей свежей (18–24 ч) бульонной культуры Тодда-Хьюитта или полной петлей бактерий из свежей чашки.
    2. Инкубируйте при 35 ° C в течение 7 дней на воздухе.
  5. Чтение и интерпретация
    Допуск (положительный результат) указывается всякий раз, когда на поверхности образуются черные колонии. Типичные и вариантные штаммы E. faecalis обычно образуют черные колонии (положительная толерантность) через 48 часов инкубации. Некоторые штаммы E. faecium могут образовывать серые колонии (отрицательная реакция), но большинство красителей не растут на теллуритовой среде. Отрицательный результат — небольшое почернение в нижней части скоса.
  6. Ограничения
  7. Контроль качества
    Проверки качества проводятся для каждой новой партии поставляемой среды. E. faecalis штамм SS-1273 и S. sanguinis штамм SS-910 используются в качестве положительного и отрицательного контролей соответственно. Результаты заносятся в журнал контроля качества.

Начало страницы

Гидролиз мочевины

  1. Принцип
    Мочевина является источником азота для бактерий, продуцирующих уреазу. В результате изменения pH индикатор, феноловый красный, меняет цвет с желтого на красный на розово-красный.Тест на уреазу особенно полезен для идентификации Streptococcus salivarius .
  2. Inoculum
    Штаммы выращивают на чашках с кровяным агаром в течение ночи при 35 ° C в CO 2 . Для более требовательных родов, таких как гемеллы, аллоиококки и гелькококки, может потребоваться более 1 дня инкубации. Капля бактериальной суспензии бульона Тодда Хьюитта также может быть использована для нанесения штрихов на скос.
  3. Реактивы и материалы
    1. Мочевинный агар Кристенсена (Ремел)
  4. Процедура
    1. Засейте косой слой петлей или каплей свежей культуры.
    2. Инкубируют при 35 ° C до 7 дней на воздухе. Прихотливые штаммы инкубируют 14 суток.
  5. Чтение и интерпретация
    Положительная реакция регистрируется, когда на скошенной поверхности агара появляется светло- или темно-розовый цвет. Желтый цвет или отсутствие изменений в соломенной окраске указывает на отрицательный результат теста.
  6. Ограничения
    Ложноположительные результаты могут быть вызваны гидролизом белка, но этого не наблюдалось с Streptococcus .
  7. Контроль качества
    Контроль качества осуществляется по каждой партии и отгрузке. S. salivarius , SS-908 и E. avium , SS-817 используются для положительного и отрицательного контролей соответственно.

Начало страницы

Тест на ванкомицин

  1. Принцип
    Тест на ванкомицин проводится аналогично тесту на чувствительность к бацитрацину. Устойчивость к ванкомицину может использоваться для дифференциации некоторых каталазонегативных грамположительных родов.
  2. Inoculum
    Штаммы выращивают на чашках с кровяным агаром в течение ночи при 35 ° C в CO 2 .Для более требовательных родов, таких как Gemella e, аллоиококки и гелькококки, может потребоваться инкубация более 1 дня.
  3. Реактивы и материалы
    1. Диск ванкомицина 30 мкг (Becton Dickinson Microbiology Systems, Cockysville Md. Продукт № 31353) Диски хранят в соответствии с инструкциями производителя.
    2. триптиказо-соевый агар с овечьей кровью
  4. Процедура
    1. Перенесите несколько колоний рассматриваемого штамма на половину чашки с кровяным агаром и сильно стейк.
    2. Поместите диск для определения чувствительности к ванкомицину (30 мкг) в тяжелую часть полосы.
    3. Инкубировали планшет в усиленной атмосфере CO 2 при 37 ° C в течение ночи. Некоторым штаммам (аллоиококкам, гемеллам, хелькококкам) может потребоваться 48 часов или более, чтобы продемонстрировать достаточный рост для интерпретации теста.
  5. Чтение и интерпретация
    Любая зона задержки роста считается положительной (чувствительной). Тест интерпретируется как устойчивый (отрицательный) только в том случае, если есть рост вплоть до края диска.Это не тест на чувствительность, это тест на чувствительность для идентификации.
  6. Ограничения
    Для точного анализа требуется достаточный посевной материал.
  7. Контроль качества
    Каждая новая партия и партия дисков с ванкомицином тестируются на положительные (чувствительные) и отрицательные (резистентные) реакции. Streptococcus bovis SS1224 используется в качестве положительной (чувствительной) реакции, а Leuconostoc mesenteroides штамм SS-1238 (ATCC-8293) используется для отрицательной (резистентной) реакции.Результаты заносятся в журнал контроля качества.

Начало страницы

Тест Фогеса-Проскауэра (VP)

  1. Принцип
    Модификация Колбенца теста Фогеса-Проскауэра (VP) может использоваться для определения продукции ацетилметилкарбинола. Тестовые реакции используются для дифференциации бактерий. Цель теста VP — помочь в идентификации штаммов бета-гемолитических стрептококков Streptococcus anginosus (таблица 2). Тест VP также может использоваться для помощи в дифференциации стрептококков viridans на виды / группы (таблица 6).
  2. Инокулят
    Свежий инокулят, выращенный в бульоне Тодда Хьюитта, является предпочтительным. В качестве альтернативы можно использовать небольшую петлю роста из чашки с кровяным агаром.
  3. Реактивы и материалы
    1. Тест-бульон Voges-Proskauer (VP) (Remel)
    2. 40% КОН (bioMerieux)
    3. альфа-нафтол (bioMerieux)
  4. Процедура
    1. Засейте пробирку с бульоном VP одной каплей или петлей свежего посевного материала.
    2. Инкубируйте 24–48 часов при 35 ° C на воздухе или до тех пор, пока не будет наблюдаться мутный рост.
    3. Перенести 0,5 мл в стеклянную пробирку 13X100.
    4. Добавьте двенадцать капель альфа-нафтола и 4 капли 40% КОН.
    5. Тщательно перемешайте или встряхните пробирки и наблюдайте в течение 30 минут. Пробирку необходимо энергично встряхнуть несколько раз в течение 30 минут.
  5. Чтение и интерпретация
    Положительная реакция красного цвета обычно наблюдается в течение 30 минут. Для идентификации стрептококков слабые реакции (розового или ржавого цвета) интерпретируются как положительные.
  6. Ограничения
  7. Контроль качества
    Каждая партия и отгрузка среды и реагентов проходят испытания. Enterococcus faecalis SS1273 используется в качестве положительного контроля, а Streptococcus sanguinis SS910 используется в качестве отрицательного контроля. Результаты заносятся в журнал контроля качества.

Начало страницы

a Мазок, окрашенный по Граму, показывающий рост грамположительных кокков в биологических тканях …

Контекст 1

… Средний возраст шести гренландских детей с CSOM составлял 12 лет (диапазон 9-15 лет), среди них были девочки. Средний возраст четырех детей с КОМЭ составлял 3 года (от 2 до 5 лет), двое из них были девочками. Всего у 10 детей было взято 13 образцов. Образцы были собраны с двух сторон у трех детей с КОМЭ. В таблице 1 показаны результаты исследований культуры, микроскопии и PNA-FISH. Морфологические свидетельства образования био-WIM, наблюдаемые под микроскопом, были обнаружены в Wve из шести (83%) образцов CSOM, но ни в одном из семи образцов COME.Четверо из шести (66%) детей с CSOM показали соответствие между положительными культурами S. aureus из отореи, микроскопическими значениями грамположительных кокков в биологических слоях в мазках, окрашенных по Граму, и микроскопическими значениями PNA-FISH, специфичными для видов. yaureus Xuorescence в биологических слоях в мазках, окрашенных PNA-FISH (см. рис. 1; табл. 1). Stenotrophomonas maltophilia была обнаружена в одном образце CSOM путем культивирования, а грамотрицательные палочки были подтверждены микроскопией в биоплёнке. Универсальный эубактериальный зонд PNA-FISH также оказался положительным на палочки.E. coli культивировали в последнем образце CSOM, но морфология bioWlm не была убедительно обнаружена ни при окрашивании по Граму, ни при исследовании PNA-FISH. У всех пациентов с СОМЭ были отрицательные посевы на бактерии, за исключением одного ребенка, у которого мы культивировали отрицательные коагулазы. b BioWlms S. aureus (стрелки) при оторее от пациента с CSOM, о чем свидетельствует гибридизация видоспецифической пептидной нуклеиновой кислоты Xuorescence in situ (PNA-FISH). c Трехмерное изображение после окрашивания PNA-FISH бактерий и биологических пленок (стрелки) в оторее от пациента с CSOM.Слайд исследовали с помощью конфокальной лазерной сканирующей микроскопии (CLSM) с использованием системы Zeiss LSM 510 (Carl Zeiss GmbH, Йена, Германия), оснащенной аргоновым лазером и гелий-неоновым лазером для возбуждения ксуорофоров. Смоделированные проекции Xuorescence bioWlms были созданы с использованием программного пакета IMARIS (Bitplane AG). Изображения были дополнительно обработаны для отображения с помощью программы PhotoShop (Adobe) по стафилококкам с обеих сторон. BioWlm не был морфологически распознан ни в одном из семи образцов COME этими двумя методами…

Контекст 2

… как большие или маленькие скопления бактерий, встроенные в матрицу, в настоящее время продемонстрированы при большинстве инфекционных заболеваний верхних дыхательных путей человека, например, COME, rAOM, холестеатомы, аденоиды при хроническом рините, хроническом тонзиллит, хронический решетчатый и гайморитный синусит [12,13, [20] [21] [22]. BioWlm обычно содержится в аспиратах, например, из легкие больных муковисцидозом [23]. Поэтому в настоящем исследовании была предпринята попытка найти биопсию в аспиратах из среднего уха и в биоптатах среднего уха пациентов, страдающих от CSOM или COME.Формирование BioWlm было морфологически обнаружено с помощью иммерсионной микроскопии и конфокальной лазерной сканирующей микроскопии при оторее у детей с CSOM и в биоптатах среднего уха взрослых с CSOM. Недавно, с использованием методов, сопоставимых с настоящим исследованием, биологические пленки были также обнаружены в клинических образцах от пациентов с хроническими ранами и с почти идентичным микроскопическим внешним видом, как показано в этом исследовании (см. Рис. 1, 2) [19]. Положительная корреляция наблюдалась между бактериями в культуре и бактериями, обнаруженными в биологических слоях с помощью метода PNA-FISH при оторее у детей с CSOM.Напротив, положительная корреляция между культурой S. aureus из среднего уха и видоспецифическим PNA-FISH для S. aureus в биоптатах среднего уха наблюдалась только у двух пациентов Wve с CSOM. Биопсии среднего уха, использованные в этом исследовании, хранились в биобанке перед анализом, и это могло вызвать систематическую ошибку при обнаружении видоспецифичных бактерий. Chole и Faddis [12] представили на холестеатомах доказательства того, что несколько видов бактерий могут расти в биологических слоях в виде смешанных бактериальных консорциумов.Наши результаты подтверждают это Wnding, поскольку зонд PNA-FISH на эубактерии был положительным у четырех пациентов Wve, у которых культивировали S. aureus. Однако доказательства возможной связи между причиной и следствием по-прежнему отсутствуют в отношении присутствия биопсии при оторее и при биопсиях слизистой оболочки среднего уха от пациентов с CSOM. BioWlms не были обнаружены морфологически в семи образцах клея от четырех детей с COME. Hall-Stoodley с соавторами [13] с помощью конфокальной лазерной сканирующей микроскопии обнаружили свидетельство биопсии слизистой оболочки в 92% биопсий среднего уха у 26 детей, которым была установлена ​​тимпаностомическая трубка по поводу COME и rAOM.Шесть из 27 эВузий среднего уха были положительными на бактериальный патоген, а 24 из 24 (100%) были положительными по ПЦР как минимум на один патоген. В нашем исследовании у нас не было этического разрешения на получение экспериментальной биопсии среднего уха у гренландских детей с КОМЭ, и мы не проводили ПЦР-анализ на потенциальные бактерии, потому что мы не исследовали биопсию биопсии в образцах клея. Вместо этого положительные образцы культур и морфологические свидетельства биопсии были обнаружены в отореи у шести детей с CSOM и в восьми из десяти биопсий среднего уха у взрослых гренландцев с CSOM.Это подтверждает гипотезу, выдвинутую Hall-Stoodley et al. [13], что хронические заболевания среднего уха являются биологическими …

Контекст 3

… исследование состояло из двух частей. В первую часть мы включили десять детей с CSOM или COME, наблюдаемых в амбулаторной клинике в Центре здравоохранения Аммассалик в Восточной Гренландии. Центр обслуживает около 3000 человек. Каждый год датский специалист по оториноларингологии посещает район и проводит специализированные осмотры и лечение, включая незначительные операции, такие как канальцевание, аденоидэктомия и тонзилэктомия.Шесть детей с CSOM в течение многих лет были известны с повторяющимися эпизодами длительной отореи. Четверо детей с СОМЭ ранее наблюдались с несколькими эпизодами острой ОМ и частыми инфекциями верхних дыхательных путей, и им было назначено лечение канальцами и аденоидэктомией. Выполнена стерильная аспирация отореи и эВузии среднего уха. Мазки готовили сразу на предметных стеклах и подвергали нагреванию. Кроме того, два предметных стекла были обработаны формальдегидом. Излишки материала хранились в пробирках и замораживались при ¡20 ° C, поскольку ¡80 ° C не было доступно.Мазки посевов были получены из отореи среднего уха у шести пациентов с CSOM после очистки слухового прохода и из eVusions среднего уха у четырех пациентов с COME. Тампоны хранили в транспортной среде Стюарта до культивирования на 5% датском кровяном агаре и шоколадном агаре (Государственный институт сыворотки, Копенгаген, Дания) в отделении клинической микробиологии, Ригшоспиталет, Копенгаген, Дания. Было выполнено окрашивание по Граму и обычная микроскопия. Общая бактериальная и видоспецифическая пептидная нуклеиновая кислота Xuorescence in situ гибридизация (PNA-FISH ™, AdvanDx Inc., Woburn, MA, USA) для S. aureus, коагулазонегативные стафилококки и E. coli наносили на предметные стекла [17,18]. Все лабораторные исследования проводились вслепую. Присутствие bioWlm оценивалось с помощью иммерсионной микроскопии и основывалось на типичном внешнем виде бактерий в агрегатах, встроенных в матрицу и окруженных ею, как это видно при окрашивании по Граму и PNA-FISH (см. Рис. 1a, b), и были дополнительно исследованы. Подтверждено конфокальной лазерной сканирующей микроскопией (CLSM) с использованием Leica TCS SP5 (Leica Microsystems, Германия) (см. рис. 1c).Этот метод был сопоставим с обнаружением биопсии в легочных аспиратах пациентов с кистозным W-брозом и в биопсиях хронических ран …

Контекст 4

… исследование состояло из двух частей. В первую часть мы включили десять детей с CSOM или COME, наблюдаемых в амбулаторной клинике в Центре здравоохранения Аммассалик в Восточной Гренландии. Центр обслуживает около 3000 человек. Каждый год датский специалист по оториноларингологии посещает район и проводит специализированные осмотры и лечение, включая незначительные операции, такие как канальцевание, аденоидэктомия и тонзилэктомия.Шесть детей с CSOM в течение многих лет были известны с повторяющимися эпизодами длительной отореи. Четверо детей с СОМЭ ранее наблюдались с несколькими эпизодами острой ОМ и частыми инфекциями верхних дыхательных путей, и им было назначено лечение канальцами и аденоидэктомией. Выполнена стерильная аспирация отореи и эВузии среднего уха. Мазки готовили сразу на предметных стеклах и подвергали нагреванию. Кроме того, два предметных стекла были обработаны формальдегидом. Излишки материала хранились в пробирках и замораживались при ¡20 ° C, поскольку ¡80 ° C не было доступно.Мазки посевов были получены из отореи среднего уха у шести пациентов с CSOM после очистки слухового прохода и из eVusions среднего уха у четырех пациентов с COME. Тампоны хранили в транспортной среде Стюарта до культивирования на 5% датском кровяном агаре и шоколадном агаре (Государственный институт сыворотки, Копенгаген, Дания) в отделении клинической микробиологии, Ригшоспиталет, Копенгаген, Дания. Было выполнено окрашивание по Граму и обычная микроскопия. Общая бактериальная и видоспецифическая пептидная нуклеиновая кислота Xuorescence in situ гибридизация (PNA-FISH ™, AdvanDx Inc., Woburn, MA, USA) для S. aureus, коагулазонегативные стафилококки и E. coli наносили на предметные стекла [17,18]. Все лабораторные исследования проводились вслепую. Присутствие bioWlm оценивалось с помощью иммерсионной микроскопии и основывалось на типичном внешнем виде бактерий в агрегатах, встроенных в матрицу и окруженных ею, как это видно при окрашивании по Граму и PNA-FISH (см. Рис. 1a, b), и были дополнительно исследованы. Подтверждено конфокальной лазерной сканирующей микроскопией (CLSM) с использованием Leica TCS SP5 (Leica Microsystems, Германия) (см. рис. 1c).Этот метод был сопоставим с обнаружением биопсии в легочных аспиратах от пациентов с кистозным W-брозом и в биопсиях хронических ран …

Бактерии, лабораторные заметки для BIO 1003, BIO 2016 и BIO 3001

Лабораторные заметки для BIO 1003, 2016 и 3001

© 24 августа 2016 г., Джон Х. Уолерт, Криста Доби и Мэри Джин Холланд

ДОМЕННЫЕ БАКТЕРИИ

Прокариоты представляют собой древнейший вид организмов на Земле; их летопись окаменелостей насчитывает более 3 лет.5 миллиардов лет; все они являются членами Доменов Архей и Бактерий . Термин прокариот означает предварительное ядро; у них отсутствует связанное с мембраной ядро, обнаруженное у эукариот (членов домена Eukarya). На самом деле у прокариот нет мембранных клеточных компартментов, называемых у эукариот органеллами. Известно около 2700 видов живых существ. По численности прокариоты — самый многочисленный вид организмов. Все примеры, которые вы увидите, являются членами домена Bacteria .Большинство членов этой группы являются гетеротрофами и важны как разлагатели. Они играют чрезвычайно важную роль в фиксации азота, делая атмосферный азот (N 2 ) доступным для эукариотических организмов в форме аммиака (NH 3 ). Некоторые бактерии фотосинтезируют, и их плазматические мембраны содержат поглощающие свет пигменты. Эти бактерии выглядят зелеными и называются Cyanobacteria .

Большинство бактерий окружено клеточной стенкой , которая химически отличается от таковой у грибов и растений.Х.С.Грам обнаружил различия в окрашивании, связанные со структурой стенок. Грамотрицательные бактерии имеют сложную стенку и устойчивы ко многим антибиотикам. Грамположительные бактерии , например, Staphylococcus , имеют более простую стенку и более восприимчивы к антибиотикам и лизоциму, ферменту, содержащемуся в таких выделениях, как слезы. Некоторые бактерии образуют вокруг себя полисахаридную капсулу и поэтому очень устойчивы к химическому воздействию, например, определенная форма Streptococcus pneumoniae .

Бактерии имеют три общие формы:

кокк (мн. Кокки) = сфера
палочка (мн. Палочка) = прямые стержни
spirillum (мн. Спирилла) = спиральные стержни

Слайды

Смешанные бактерии показывает бактерии трех различных форм; некоторые слайды окрашены по Граму, а бактерии могут быть темно-фиолетовыми (грамположительные) или светло-розовыми (грамотрицательные).
Escherichia coli — лабораторная бактерия, обычно используемая в исследованиях.Встречается в кишечнике животных.
Типичная окрашенная по грамму спириллы

смешанные бактерии (слева) и спириллы (справа), оба при 400 x

Исследование стоматологических бактерий

Бактерии присутствуют повсюду на поверхности вашего тела и в пищеварительном тракте. У вашего рта особенно богатая флора. Чтобы исследовать стоматологические бактерии, выполните следующие действия:

  1. Нанесите небольшую каплю воды на предметное стекло микроскопа.Используйте небольшую каплю, потому что вы должны подождать [шаг 4], пока она не испарится.
  2. Возьмите стерильную деревянную палочку и проведите одним концом о зубы рядом с линией десен.
  3. Закрутите конец палочки с бактериями в воде на предметном стекле и распределите его по площади размером 1 см 2 .
  4. Подождите, пока слайд высохнет.
  5. Нагрейте предметное стекло с бактериями наверху над пламенем; не жарить бактерии, просто разогрейте их, чтобы они прилипли к предметному стеклу.
  6. Нанесите каплю красителя метиленового синего на бактерии. Оставьте пятно на 1 минуту.
  7. Промойте предметное стекло под струей воды из-под крана.
  8. Промокните предметное стекло бумажным полотенцем. Не трите это.
  9. Когда предметное стекло полностью высохнет, исследуйте его под микроскопом. Бактерии будут очень маленькими и окрашенными в синий цвет. Осмотрите участки, где они не сгруппированы, а тонко разложены. Обратите внимание на три основных вида бактерий: кокк, палочку, спириллум.Может быть несколько щечных клеток, и вы легко можете увидеть, насколько клетки прокариот меньше, чем у эукариот.

Цианобактерии

Живые Цианобактерии доступны для изучения. Подготовьте слайды Oscillatoria и Anabaena . Оба они нитевидные — цепочки удлиненных клеток. Иногда более крупные клетки в цепи представляют собой гетероцисты с темными концами; эти клетки фиксируют азот.Зеленый цвет в клетках — , хлорофилл ; Обратите внимание, что цвет присутствует повсюду и не локализован в хлоропластах, как вы видели у водорослей Elodea и Spirogyra , которые являются эукариотами. Если вы посмотрите на свободные волокна на краю комка Oscillatoria , вы увидите их характерное медленное и плавное волнообразное (или колебательное) движение.

Oscillatoria (слева) 100 x, Anabaena (справа) 400 x

Изоляция бактерий от окружающей среды

Бактерии повсюду? Растущая область исследований заинтересована в изучении всех различных типов микроорганизмов (бактерий и других мелких организмов, таких как одноклеточные эукариоты и грибы), встречающихся в разных местах.Эта область исследований изучает микробиом в таких местах, как пищеварительный тракт и кожа.

Вместе со своей группой разработайте эксперимент для проверки наличия бактерий на поверхностях. Вам выдадут стерильные ватные палочки и чашки Петри, содержащие питательный агар, на котором могут расти бактерии. Не стесняйтесь протирать тампоном любую поверхность на себе, на сумке, в лаборатории или за пределами класса. Каков ваш эксперимент (какие поверхности вы хотите протестировать или сравнить)? Каждая бактерия, которая растет на агаре, будет размножаться, образуя видимую колонию в течение дня или двух; это то, что вы можете наблюдать.

Эксперимент нуждается в контроле для подтверждения результатов, и существует двух видов контролей: положительный и отрицательный . Элементы управления ответят на такие важные вопросы, как: Как узнать, что бактерии не попали в агаре? Как узнать, что на таком питательном агаре могут расти бактерии? Стандартный отрицательный контроль представляет собой неоткрытую чашку Петри; вы не ожидаете роста бактерий, если агар стерилен. Другой отрицательный контроль — это испытание чего-то, что определенно не поддерживает жизнь бактерий (о чем вы можете подумать?). Положительный контроль — это испытание агара; вы можете засеять его известным источником бактерий (вы уже видели такой источник?) Из-за ограничений материалов необходимо согласовать меры контроля и подготовить один набор для всего класса.

В классе кратко обсудите с инструктором свои запланированные эксперименты с тем, что вы будете мазать, прежде чем начинать мазок!

Не открывайте чашку Петри до шага 2, описанного ниже (есть ли в воздухе бактерии, которые могут осесть на агаре и заразить ваш эксперимент?). Обратите внимание, что меньшая половина чашки содержит студенистый агар.

  1. Используйте стерильный ватный тампон, чтобы взять образец с поверхности по вашему выбору. Они запечатаны в бумаге; будьте осторожны, не касайтесь конца, который вы будете использовать для сбора.
  2. Нанесите на тампон штрихами или аккуратно раскатайте им по поверхности агара в чашке Петри.
  3. Немедленно закройте блюдо.
  4. Обозначьте дно посуды восковым карандашом; обратите внимание на выбранную среду и свои инициалы. Маркировка дна важна, потому что крышки можно менять местами, но дно остается с образцом на агаре.
  5. Запишите ожидаемые результаты и гипотезы; результаты могут включать количество бактерий и количество различных видов, которые вы ожидаете увидеть; гипотезы — это объяснения результатов.
  6. Ваш инструктор поместит всю посуду в инкубатор при 30 градусах Цельсия; вы будете наблюдать рост бактерий на следующем лабораторном занятии.
Образец (что) Местоположение (где) Ожидаемый результат и гипотеза
Отрицательный контроль: неоткрытая тарелка
Отрицательный контроль:
Положительный контроль:
Эксперимент:

В следующем классе: Нарисуйте то, что видите на пластинах.Вы также можете фотографировать. Заполните приведенную ниже таблицу наблюдаемыми данными.

Образец (что) Местоположение (где) Наблюдаемые результаты
Отрицательный контроль: неоткрытая тарелка
Отрицательный контроль:
Положительный контроль:
Эксперимент:

Опишите результаты эксперимента — контроли и образцы поверхности.Как вы измеряли рост бактерий на чашках? Как могут расти разные типы бактерий: посмотрите на цвет колонии, тип роста (круглая, рваная), размер колонии и внешний вид поверхности (глянцевая, матовая). Какова численность каждого типа колонии?

  • Подтверждают ли элементы управления достоверность эксперимента?
  • Соответствуют ли наблюдаемые результаты для поверхности, отобранной вами, вашей гипотезе? Если ваши результаты отличаются от ожидаемых, как бы вы объяснили разницу (новая гипотеза)?

Необязательно : Ваш преподаватель может попросить вас нарисовать график или диаграмму для отображения ваших данных или подготовить лабораторный отчет на основе ваших данных из этого эксперимента.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *