Кокки палочка в мазке: «Мазок на флору»: о чём расскажет анализ?

Содержание

Какие анализы ежегодно сдавать женщине

Если вы пришли на плановое ежегодное обследование, и вас ничего не беспокоит, то вам достаточно сдать мазок на флору и цитологию. Если результаты этих исследований в норме — отлично! Впрочем, дополнительно можно сдать анализ на половые инфекции. На всякий случай. 🙂

Мазок на флору

Итак, сначала мазок на флору. Это вроде бы и формальность, но при правильном обращении является очень информативное исследование. Разберёмся?

Главное, что показывает мазок (а точнее количество лейкоцитов в мазке) — это наличие воспаления во влагалище и цервикальном канале. Присутствие большого количества лейкоцитов говорит нам о том, что воспаление есть. В свою очередь воспаление вызывается присутствием бактерии или вируса. Кстати, бактерии чаще живут во влагалище, а вирусы — в цервикальном канале.
Наличие спор и мицелий грибов. Тут речь идёт о всеми нами нелюбимой молочнице.
Ключевые клетки — показатель изменения микрофлоры в сторону развития бактериального вагиноза (это когда в большом количестве размножается gardnerella и иже с ними).
Флора в норме должна быть палочковая, так как основная масса бактерий влагалища — лактобактерии, а они по форме в виде палочек.
Трихомонады — простейшие одноклеточные патогены — сейчас встречаются не так часто, но тем не менее бывают кокки и диплококки. Наличие кокковой флоры может говорить о воспалении или бактериальном вагинозе. Диплококки — это кокки в виде кофейных зёрнышек. Это плохо, потому что это специфическое строение гонококка, а он, как известно, вызывает гонорею.

Цитология

Далее, цитология. Это исследование клеточного состава эпителия шейки матки и цервикального канала. Оно помогает выявить раковые и предраковые состояния на раннем этапе. Существует несколько методик исследования: на данный момент самым современным и информативным является жидкостная цитология. Здоровой женщине достаточно сдавать цитологическое исследование 1 раз в год.

Анализы на инфекции

Анализ на инфекции (ЗППП и условно-патогенную флору). Далеко не все бактерии и вирусы, обнаруживающиеся во влагалище, необходимо лечить. Например, у вас обнаружилась уреаплазма. Она относится к условно-патогенной флоре, которая имеет право находиться во влагалище. При благоприятных условиях ее наличие не вызывает воспаления и лечить её не надо (то же самое относится к другим у/п бактериям). Обязательно лечить лишь

хламидии и микоплазму гениталиум. Это истинные патогены, и даже в небольшом количестве их быть не должно. А все остальное нуждается в лечении лишь при наличии воспаления и дискомфорта.

Итак: если обнаружилась условно-патогенная флора, она нуждается в лечении лишь при сопутствующем воспалении. Если воспаления нет — живите спокойно и не ешьте горстями лишние лекарства!

Яна Александровна Никитенко, врач акушер-гинеколог специалист УЗ-диагностики.

зачем берут общий мазок на флору, что показывает

Мазок на флору является важным диагностическим исследованием, широко применяющимся с целью оценки женского здоровья.

Для чего нужен мазок на флору

Гинекологический мазок– это то, что в первую очередь должен порекомендовать врач на первичном приеме вне зависимости от симптомов. Это исследование наряду с кольпоскопией входит в золотой стандарт профилактического ежегодного осмотра у женщин. Микроскопия мазка позволяет оценить состояние влагалища и наличие/отсутствие воспалительного процесса в органах репродуктивной системы. Лаборант увидит на предметном стекле количество лейкоцитов, эпителиальных клеток и соотношение бактерий. Если в результатах кокки преобладают над полезными бациллами или визуализируются грибы, это означает дисбактериоз, воспаление или кандидоз. При повышенном количестве лейкоцитов в мазке гинеколог может назначить дополнительные анализы на ИППП.

Подготовка к сдаче мазка

Оптимальное время для мазка на флору – середина цикла. Во время менструации забора биоматериала не осуществляется. Это связано с тем, что присутствие кровяных телец может существенно исказить его результаты.

Материал для анализа может быть взят из уретры, со стенок влагалища или из цервикального канала. Подготовительные меры ко всем трем исследованиям при этом принципиальных отличий не имеют. На консультации акушер-гинеколог уточнит, принимались ли антибиотики на протяжении последних двух недель перед приемом. В случае положительного ответа, мазок будет перенесен на другое время. Наиболее достоверные результаты можно получить, только соблюдая ряд условий. Накануне мазка следует:

За два-три дня исключить применение любых вагинальных свечей
За два-три дня граничить половые контакты
За сутки до анализа не принимать ванную (только душ)
За два дня исключить спринцевания влагалища

В день посещения врача произвести стандартный туалет половых органов с водой
Перенести другие гинекологические исследования на другое время (например, кольпоскопию, ультразвуковое сканирование интравагинальным датчиком)

Как проходит процедура

Взятие биоматериала для исследования мазка занимает по времени несколько минут и проходит в гинекологическом кресле.

Врач с помощью зеркала и стерильного одноразового инструмента берет образцы, а затем помещает их на предметное стекло с символами U, C или V. Буквы обозначают локализацию биоматериала — уретру, шейку матки или влагалище. В качестве инструментов для мазка могут быть использованы ватный тампон, цервикальная щетка или шпатель. Манипуляция полностью безболезненная и не доставляет дискомфорта.

Нормы мазка на флору

В норме среди микроорганизмов, составляющих биоценоз влагалища присутствуют лактобактерии, грамм-положительные палочки, бифидобактерии, условно-патогенные микроорганизмы и грибы. У здоровой женщины около 90 % микрофлоры занимают полезные бактерии. Эти микроорганизмы препятствуют размножению условных патогенов и грибов, выделяя особые вещества, имеющие антибактериальный эффект. При снижении количества полезных бактерий начинается рост условных патогенов. Такое состояние называется дисбактериозом флоры и требует терапии. Лечение заключается в укреплении иммунитета пробиотиками.

В некоторых случаях врач может выписать антибиотики.

Среди прочих микроорганизмов, мазок может содержать стафилококки, стрептококки и другие бактероиды. Их количество не должно превышать 5 % от общей бактериальной массы.

Норма лейкоцитов в мазке из влагалища – от 0 до 15 единиц. В уретре и шейке матки – до 10 единиц. Лейкоцитозом считается состояние, при котором их количество в анализе превышает 15 и более единиц. Как правило, при беременности и в период восстановления после родов этот показатель незначительно возрастает. Подобный лейкоцитоз не имеет каких-либо сопутствующих симптомов и не вызывает у женщины дискомфорта.

В результатах мазка в небольшом количестве присутствуют клетки плоского эпителия. Их уровень у женщин коррелирует в зависимости от дня менструального цикла. Если подобных клеток в анализе много, и они визуализируются пластами, это может быть результатом воспалительного процесса во влагалище.

Еще один показатель исследования — это слизь, секретируемая железами цервикального канала. Если такой слизи обнаруживается в избытке, это может быть признаком острого или хронического цервицита.

Мазок на флору при беременности

Для того чтобы беременность протекала благоприятно, организм женщины должен быть максимально к ней подготовлен. Поэтому, как только врач установит на гинекологическом УЗИ тот факт, что плодное яйцо находится в матке, рекомендуется сразу же сдать мазок на ИППП и биоценоз. Невылеченные и хронические инфекции могут в дальнейшем спровоцировать самопроизвольное прерывание беременности и стать причиной невынашивания. Такие венерические заболевания как хламидиоз способны стать причиной заражения ребенка во время его прохождения через родовые пути.

В результатах анализа беременной часто повышены лейкоциты. Их число в этот период может составлять от 15 до 30 единиц во влагалище и до 5 в мазке из уретры. Это связано с естественной реакцией организма на физиологический стресс, поскольку в период вынашивания ребенка иммунная система женщины активизируется.

Такое состояние считается нормой и регулируется эстрогенами.

Сколько ждать результатов исследования

В целом, сроки исполнения мазка на флору у женщин составляют от одного до четырех дней. При этом день визита к акушеру-гинекологу в расчет не берется. Длительность получения результатов анализа обусловлена спецификой метода лабораторного исследования. Оценка состояния влагалища, шейки матки и уретры производится в течении суток. Если результаты анализа неудовлетворительные, врач может назначить ПЦР тест*.

Преимущества метода ПЦР:

Достоверность благодаря высокой чувствительности
Быстрота выполнения
Специфичность относительно ИППП в любой форме
Возможность диагностики большинства инфекций урогенитального тракта
Точность установления типа возбудителя инфекции

Что врачи не видят при микроскопии мазка?

Мазок на флору не дает данных о наличии или отсутствии беременности, а также о таких инфекциях как вирус папилломы человека, ВИЧ и герпес любых типов.

Анализ также не может выявить у женщин наличие атипичных клеток в эпителии шейки матки или влагалища.

Зачем нужна проверка на восприимчивость к антибиотикам

Если в мазке будет обнаружено большое количество условно-патогенных бактерий, врач порекомендует пациентке тест с определением чувствительности к антибактериальным препаратам.

Болезнетворные микроорганизмы не одинаково реагируют на разные антибиотики. На сегодняшний день существует целый спектр лекарственных препаратов, действие которых направлено на разных возбудителей. Если один патоген может активно погибать от одного вида препаратов, на других те же самые антибиотики могут действовать слабо или не действовать совсем. От того, насколько точно будет проведен такой тест зависит то, насколько быстро будет устранен инфекционный агент.

По итогам исследования предоставляется список медицинских препаратов, наиболее подходящих для устранения проблемы.

(21 оценок, среднее 4.43 из 5)

Мазок на степень чистоты | Клинико-диагностические лаборатории «ОЛИМП»

Мазок – это метод обследования, при котором исследуемый материал берется с поверхности слизистой оболочки. Целью анализа является оценка состава микрофлоры и выявления воспалительных заболеваний.

Забор производится с трех участков: с мочеиспускательного канала, с влагалища и шейки матки. Материал с данных участков обозначается на предметном стекле буквами «U», «V» и «C» соответственно.

В половые органы женщины заселены нормальной флорой – микроорганизмами, не приносящие вреда организму, кроме того, они способствуют задержке развития условно-патогенных микробов, которые становятся причиной воспаления при определенных условиях (не относятся к половым инфекциям). Самой полезной флорой является палочка Дедерлейна (лактобацилла), помогающая «очищать» половые органы от различных возбудителей. Определение качественного и количественного взаимоотношения флоры – является важным этапом в постановке диагноза и определения тактики лечения.

Оценка стояния естественной флоры имеет в своей классификации четыре степень чистоты влагалища:

1 степень – в мазке эпителиальные клетки и нормальное количество лактобацилл, рН – кислая;

2 степень – небольшое количество лейкоцитов, лактобацилл меньше, присутствуют грамположительные диплококки. рН – остается кислой;

3 степень – повышенное количество клеток эпителия и лейкоцитов, снижение лактобацилл, множество кокковых бактерий, рН – слабокислая или щелочная;

4 степень – в большом количестве эпителий и лейкоциты, гноеродные микроорганизмы, отсутствие лактобацилл, рН – щелочная.

Что может быть обнаружено в мазке:

Лейкоциты – небольшое количество обнаруживается в норме, так как эти клетки необходимы для защиты организма от микробов. Лейкоциты свыше нормы — признак воспалительного процесса.

Эпителий — также в небольшом количестве присутствует в биоматериале. Его отсутствие свидетельствует о гормональном дисбалансе у женщины: дефицит женских эстрогенов, избыток мужского тестостерона. Эпителий в большом количестве – один из признаков воспалительного процесса. Количество также зависит от фазы менструального цикла.

Слизь – продуцируется железами влагалища, обнаружение слизи в уретре говорит о воспалении в мочевыводящих путях.

Эритроциты – красные кровяные тельца, могут присутствовать в зависимости от фазы менструального цикла. Если их число превышает допустимую нормы, то предполагается травматизация слизистой влагалища, эррозивные процессы или воспаление.

Микрофлора – преобладание тех или иных неидентифицированных микроорганизмов: кокки, палочки…

Атипичные клетки — свидетельствуют о предраковом состоянии.

Ключевые клетки — клетки эпителия, «склеенные» гарднереллами или другими микробами. Подобные клетки наблюдаются при снижении иммунитета, при гарднереллезе.

Гарднереллы — мелкие бациллы в мазке. В норме могут присутствовать в небольшом количестве. Повышенное количество (при дисбактериозе влагалища) этих бактерий приводит к бактериальному вагинозу.

Кандида — грибок, как и гарднереллы, присутствует в небольшом количестве у здоровых женщин. Если лактобактерий становится меньше, чем кандид, то развивается вагинальный кандидоз (в народе— «молочница»). Основная причина увеличения кандид — снижение иммунитета, в том числе при беременности, или при приеме антибиотиков.

Кокки — шарообразные бактерии, которые бывают как условно-патогенными (стафилококк), так и патогенными (гонококк).

Гонококк – возбудитель гонореи. Может поражать не только влагалище, но и мочеиспускательный канал, маточные трубы и прямую кишку. Относятся к половой инфекции

Стафилококк — при благоприятных для него условиях (снижение иммунитета) вызывает стойкое воспаление.

Стрептококк — бактерия, которая обитает в небольшом количестве в желудочно-кишечном тракте, в дыхательных путях, а также в полости рта и носа. В единичном количестве стрептококки в мазке расцениваются как норма. Увеличение концентрации стрептококка приводит к неспецифическому воспалению

Энтерококк – естественный обитатель микрофлоры ЖКТ. Энтерококк в большом количестве указывает на воспаления мочеполовой системы или органов малого таза.

Проблема заключается в том, что этим микроорганизмам не всегда уделяется должное внимание и лечится только половая инфекция, в то время как у стафилококков, стрептококков и энтерококков развивается устойчивость к антибиотикам. КДЛ «ОЛИМП» рекомендует при обнаружении подобной микрофлоры выполнять анализ «бакпосев соскоба из влагалища с определением чувствительности к антибиотикам», который позволяет подобрать оптимальное медикаментозное лечение.

Трихомонада. Мазок на инфекции не всегда выявляет трихомонаду, так как эта бактерия может иметь измененные формы. Чтобы подтвердить ее наличие, делают бактериологический посев.

Мазок на флору во время беременности — когда и зачем сдавать

Мазок на флору – это самый распространенный анализ, который назначает врач акушер-гинеколог. Для проведения данного исследования врач, во время осмотра женщины в гинекологическом кресле, производит забор содержимого влагалища из заднего свода (это пространство, которое расположено между задней стенкой влагалища и шейкой матки), канала шейки матки и отделяемого уретры, наносит материал на предметное стекло и направляет его в лабораторию.

Исследование мазка на флору в лаборатории проводит врач лабораторной диагностики под микроскопом. Данное исследование позволяет определить характер микрофлоры (виды микроорганизмов) влагалища, канала шейки матки и мочеиспускательного канала, выявить воспалительный процесс в половых органах у женщины, в ряде случаев позволяет определить также возбудителя данного воспалительного процесса (например, гонококк, трихомонада).

Когда сдавать мазок на флору

В обязательном порядке для всех беременных мазок сдается дважды – при постановке на учет и в 30 недель беременности, зачастую еще один раз мазок на флору берется в 36-37 недель для оценки состояния микрофлоры влагалища перед родами. В эти сроки анализ сдается даже в случаях, когда пациентку ничего не беспокоит. Это проводится с целью выявления скрытого воспалительного процесса, который может приводить к серьезным осложнениям в течение беременности. Во время беременности за счет изменения гормонального фона и снижения иммунитета значительно чаще происходит обострение хронических инфекций, а также кандидоза (молочницы). Любой воспалительный процесс во влагалище во время беременности может приводить к серьезным осложнениям беременности – преждевременному излитию околоплодных вод, преждевременным родам, маловодию или многоводию, задержке внутриутробного развития плода и другим.

При наличии жалоб у беременной женщины – появлении обильных выделений из половых путей, зуда, жжения или дискомфорта в области половых органов также сдается мазок на флору. При некоторых патологических состояниях, например при наличии в прошлом выкидышей, связанных с инфекционными осложнениями беременности, несостоятельности шейки матки, мазок на флору берется один раз в месяц, а после 30 недель один раз в две недели. Забор мазка является абсолютно безопасной процедурой и не приводит к каким-либо осложнениям, поэтому может производиться при любом сроке беременности.

Что показывает мазок на флору

Мазок на флору оценивается по следующим показателям:

Эпителий — плоский эпителий – это клетки поверхностного слоя слизистой оболочки влагалища и шейки матки. Наличие большого количества плоского эпителия в мазке может свидетельствовать о воспалительном процессе. Отсутствие эпителия в мазке указывает на нарушение гормонального фона.
Лейкоциты– это клетки крови, участвующие в уничтожении болезнетворных бактерий. Лейкоциты способны активно проникать через стенку сосудов в ткани организма и участвовать в борьбе с инфекционными агентами. В норме в мазке на флору из влагалища присутствует не более 10, из цервикального канала не более 15 лейкоцитов в поле зрения, из уретры – до 2 лейкоцитов в поле зрения. Повышение содержания лейкоцитов в мазке – признак воспаления, при этом, чем больше содержание лейкоцитов в мазке, тем более выражен воспалительный процесс.
Эритроциты — это красные клетки крови. В норме в мазке на флору могут встречаться единичные эритроциты (1-2 в поле зрения). Увеличение количества эритроцитов свидетельствует о наличии хронического воспалительного процесса, а кроме того быть признаком травмы или скрытого кровотечения, например при наличии эктопии шейки матки (так называемой эрозии, когда влагалищная часть шейки матки покрыта цилиндрическим эпителием в норме выстилающим внутреннюю часть шейки).
Слизь — в норме в уретре слизь отсутствует, во влагалище определяется умеренное количество слизи, в шейке матки слизь может быть в большом количестве. Увеличение количества слизи может быть признаком воспалительного процесса, однако большой диагностической ценности данный критерий не имеет, и на него редко опираются врачи при постановке диагноза.
Бактерии — в норме в мочеиспускательном канале флора обнаруживаться не должна, во влагалище и шейке матки выявляется палочковая флора в умеренном количестве. Палочковая флора – это чаще всего лактобактерии, которые на 95% составляют нормальный биоценоз влагалища. Лактобактерии активно заселяют влагалище и создают в нем кислую среду, препятствуя тем самым росту и размножению болезнетворных бактерий.
Кроме лактобактерий во влагалище могут присутствовать и другие палочковые бактерии, например кишечная палочка, бактероиды, а также различные кокки. Это бактерии, при микроскопии имеющие форму шариков. К этой группе бактерий относятся стрептококки, стафилококки, энтерококки. В небольшом количестве в норме они присутствуют во влагалище. Если их количество резко возрастает на фоне гибели нормальных лактобактерий – это может приводить к развитию воспалительного процесса. К сожалению, по результатам обычного мазка на флору невозможно определить, какие конкретно бактерии и в каком количестве присутствуют во влагалище. Поэтому при выраженном воспалительном процессе, а также при обнаружении в мазке на флору большого количества кокковой флоры врач для постановки правильного диагноза назначает дополнительный анализ – посев на флору с определением чувствительности к антибиотикам.
Условно-патогенная флора – это микроорганизмы, которые обитают в организме человека в небольшом количестве, не принося вреда, но при определенных условиях могут привести к возникновению воспалительного процесса. К таким микроорганизмам, обнаруживаемым в мазке на флору, относятся грибы рода кандида и гарднереллы.
Гарднерелла («ключевые клетки»). Гарднерелла и другие бактерии, живущие в бескислородных условиях (так называемые анаэробные бактерии) в норме живут во влагалище в небольшом количестве, не вызывая симптомов воспалительного процесса. При снижении местного иммунитета, что достаточно часто встречается во время беременности, происходит увеличение доли этих бактерий в микрофлоре влагалища, возникает заболевание – бактериальный вагиноз (дисбиоз влагалища). При этом в мазке на флору обнаруживают «ключевые» клетки – это клетки слизистой влагалища, облепленные гарднереллами и другими анаэробными бактериями. Сами гарднереллы в обычном не окрашенном мазке не видны. Их можно выявить только при окраске мазков специальными красителями.
Грибы. Микроорганизмы рода Кандида входят в состав нормальной микрофлоры рта, влагалища и толстой кишки большинства здоровых людей. В норме количество этих микроорганизмов небольшое и воспалительного процесса они не вызывают. В норме у некоторых женщин во влагалищном мазке может выявляться небольшое количество спор гриба. При отсутствии воспалительной реакции и жалоб пациентки лечение такого состояния не проводится. Выявление же в мазке на флору большого количества спор или мицелия дрожжеподобного гриба рода Кандида позволяет поставить диагноз кандидоза (или молочницы).
Патогенная флора. Существуют микроорганизмы, которые в нормальных условиях не должны присутствовать во влагалище здоровой женщины и выявление которых в мазке на флору свидетельствует о наличии серьезного заболевания, передающегося половым путем. Из таких инфекций в мазке чаще всего выявляются трихомонады и гонококки.
Трихомонады — это простейшие микроорганизмы, имеющие жгутик и способные к движению. Выявление в мазке на флору трихомонад свидетельствует о наличии заболевания, передающегося половым путем – трихомониаза. Трихомониаз у беременной женщины увеличивает риск преждевременных родов, преждевременного излития околоплодных вод, внутриутробной задержки развития плода. Кроме того, есть опасность инфицирования малыша при прохождении через родовые пути, поэтому при обнаружении трихомонад в мазке обязательно проводится антибактериальное лечение во время беременности.
Гонококки — это бактерии, имеющие в мазке вид двойных шариков бобовидной формы, прилегающих друг к другу вогнутой стороной. Обнаружение в мазке гонококков позволяет врачу поставить диагноз – гонорея. Это заболевание, передающееся половым путем, которое также обязательно должно быть излечено во время беременности. Воспалительный процесс, вызванный гонококком значительно осложняет течение беременности, может привести к выкидышу, преждевременным родам, преждевременному излитию околоплодных вод, инфицированию плаценты и плодных оболочек, а кроме того, при прохождении малыша через родовые пути происходит поражение глаз новорожденного гонококком.

Обнаружение в мазке на флору возбудителей других инфекций, передающихся половым путем очень затруднительно. Поэтому при наличии воспалительного процесса по данным мазка врач обычно рекомендует сдать анализы на половые инфекции другим, более чувствительным методом – мазок методом ПЦР.

Правила подготовки к забору мазка на флору

Чтобы результат мазка на флору был достоверным, перед сдачей данного анализа нужно соблюдать ряд важных условий. В течение 2—3 дней нельзя пользоваться какими-либо влагалищными свечами или кремами, противопоказаны спринцевания любыми растворами, поскольку они изменяют состав микрофлоры влагалища, затрудняют выявление возбудителя воспаления. Кроме того, в течение 2 дней желательно воздержаться от половых контактов. Это также связано с тем, что сперматозоиды и остатки семенной жидкости во влагалище могут привести к неправильному результату мазка на флору.

Гинекологический мазок в Санкт-Петербурге, цена услуги в Выборгском районе

Эта процедура является разновидностью исследования выделений из влагалища с целью диагностики. Во время посещения гинеколога обычно берется мазок на степень чистоты и флору. Это простой способ обнаружить болезнетворные микроорганизмы, которые вызывают молочницу, бактериальный вагиноз, вагинит и пр.

Мазок на флору берут:

если есть выделения из влагалища;
если беспокоят боли внизу живота;
если ощущается зуд или жжение во влагалище;
если длительно принимались антибиотики;
если планируется беременность;
если идет профилактический осмотр и пр.

Как подготовиться к сдаче мазка?

За день-два до планируемого взятия мазка наши гинекологи рекомендуют исключить спринцевания и половые контакты, а также применение лубрикантов, вагинальных таблеток, кремов и свечей. Мазок не сдают во время менструации, поскольку выделения искажают общую картину. Пару часов до планируемого похода к врачу не следует мочиться. Обмывание половых органов накануне визита к гинекологу проводить теплой водой без мыла.

Мазок лучше всего сдавать в первые два-три дня после менструации или перед началом следующего цикла.

Как расшифровать мазок?

В результате лабораторного исследования вашего мазка на флору могут указываться такие данные:

Лейкоциты. Они должны присутствовать лишь в малых количествах. Норма содержания их во влагалище и мочеиспускательном канале – до 10 в поле зрения, и не больше 30 – в шейке матки. Повышение в мазке количества лейкоцитов говорит о том, что присутствует воспалительный процесс.

Несколько повышается норма их содержания в мазке при беременности – 20-30 в поле зрения.

Слизь. В норме она содержится в мазке в умеренном количестве, так как вырабатывается железами влагалища и цервикального канала.

Плоский эпителий. Эти клетки выстилают поверхность слизистой канала шейки матки, влагалища. Количество их зависит от фазы менструального цикла. Норма плоского эпителия в мазке – 5-10 клеток. Если он вообще не обнаружен, это может говорить об атрофии эпителиального слоя, а если количество клеток плоского эпителия повышено – о воспалении.

«Ключевые клетки». Это клетки плоского эпителия, покрытые гарднереллой (бактериями). Большое количество их в мазке указывает на гарднереллез.

Лактобациллы (палочки Додерлейна). Нормой является присутствие их в микрофлоре влагалища в большом количестве. Снижение их содержания говорит о бактериальном вагинозе.

Дрожжи. Они входят в небольшом количестве в состав микрофлоры влагалища, но их повышение более 104 КОЕ/мл, особенно на фоне творожистых выделений и зуда во влагалище – признак молочницы.

Лептотрикс. Эти анаэробные грамотрицательные бактерии встречаются при смешанных половых инфекциях (например, кандидоз и бактериальный вагиноз, трихомониаз и хламидиоз). Выявление их в мазке на флору предполагает назначение серьезного обследования.

Мобилункус. Анаэробный микроорганизм, который встречается у женщин с бактериальным вагинозом либо кандидозом.

Трихомонада. Это простейший одноклеточный микроорганизм, который в мочеполовой сфере вызывает воспалительные процессы.

Гонококки (диплококки). Это возбудитель гонореи. В норме они не должны обнаруживаться в мазке.

Кокки (стафилококки, стрептококки, энтерококки). Это условно патогенные микроорганизмы. В малом количестве они входят в нормальный состав флоры, а их увеличение говорит о наличии инфекции.

Кишечная палочка. Она должна присутствовать в норме в мазке только в малых количествах. Содержание в мазке кишечной палочки в большом количестве говорит о бактериальном вагинозе или попадании в мазок кала.

Буквами обозначаются зоны, откуда берут мазки: буквой «U» обозначается мочеиспускательный канал, «C» — шейка матки и «V» — влагалище.

На основе значения всех этих показателей определяют степень чистоты влагалища, отражающую состояние микрофлоры в целом.

Выделяют степени чистоты влагалища:

Микрофлора влагалища в оптимальном состоянии. Характерна для женщин условно здоровых (крайне редко встречается).
Отклонения микрофлоры незначительные. Наиболее распространена у условно здоровых женщин.
Отклонения от нормы (большое количество грибов, условно-патогенных бактерий). Эта степень указывает на присутствие воспалительного процесса.
Отклонения от нормы значительные. Говорит о бактериальном вагинозе и прочих половых инфекциях.

Гинекологический мазок – это предварительная ступень в диагностике заболеваний. Если в нем обнаружены отклонения, врач нашей клиники может назначить вам как повторный анализ, включающий в себя бакпосев и информацию на чувствительность к антибиотикам, так и диагностику методом ПЦР, выявляющем скрытые инфекции половой сферы.

Гинекологический мазок вы можете сделать в нашей клинике в Выборгском районе города, у метро Проспект Просвещения.

Смотрите также: Диагностика бесплодия, Лечение бесплодия, Прием врача гинеколога, Диагностика и лечение ИППП.

Даже если ничего не беспокоит.

Посещение гинеколога для каждой цивилизованной женщины — не просто визит по поводу беременности или недугов, это обязательный профилактический осмотр раз в полгода. Поводов для визита к доктору у женщин может быть много: подобрать верное средство для контрацепции, провериться на инфекции, вовремя выявить воспаление или обнаружить другие, более серьезные проблемы. Но в каждом случае визит не обходится без мазков. Для чего они нужны? Как к ним подготовиться?

Мазок на флору или гинекологический мазок

Мазок на флору может о многом сказать. Прежде всего, определяют количество лейкоцитов. Если лейкоцитов много, то, возможно, у вас есть воспаление. Также в этом мазке определяют вид микрофлоры. Он напрямую связан с фазой менструального цикла. В анализе могут быть разные клетки палочки или кокки. Если идет воспаление, то клеток всегда будет много, так как они быстрее отторгаются. Могут появляться «ключевые клетки»-

это тоже говорит о том, что пора заняться своим здоровьем. Когда в анализах появляются гонококки или трихомонады, вот тогда вам уже точно не стоит откладывать визит к врачу. Если в вашем мазке на флору найдены нити мицелия, то это является характерным признаком кандидоза, проще говоря, «молочницы».

Перед визитом к врачу-гинекологу для сдачи анализов следует: воздержаться на 1-2 суток от половых контактов; не применять вагинальные препараты (крема, свечи) и не делать спринцевания в течение 2 суток; перед сдачей мазка на флору рекомендуется не мочиться в течение 2 -3 часов. Желательно сдавать мазок на флору сразу после месячных.

Мазок на «стерильность»

На приеме гинеколога у вас могут взять мазок на степень чистоты и на гормональный фон. Он определяет состав содержимого влагалища, который в норме представлен секретом, клетками эпителия и различной микрофлорой. Степень чистоты в результатах мазка выражается в цифрах: 1 и 2 являются показателями здоровья, а 3 и 4 говорят о наличии кольпита — воспаления влагалища. Существует и мазок на гормональный фон. Он показывает, как в течение менструального цикла на женский организм влияют половые гормоны — эстрогены и прогестерон. По его результатам можно установить, насколько правильно и в каком количестве они вырабатываются. Вариантом этого мазка является мазок «на угрозу «-КПИ. Он используется во время беременности для определения риска ее прерывания.

Мазок на цитологию, или Пап-тест

Мазок по Папаниколау, или Пап-тест, нужен для того, чтобы выявить отклонения со стороны клеток шейки матки. В нашей стране его еще называют мазком на атипичные клетки или на цитологию. Все это «имена» одного анализа. Мазок по Папаниколау не следует брать во время менструации, а также при наличии воспаления, так как полученный результат может оказаться ложным. В течение суток, как и при заборе мазка на флору, следует избегать интимной близости, не использовать свечи или тампоны. В цитологическом мазке оцениваются размеры, форма, количество и характер расположения клеток. У молодых девушек по этому анализу можно оценить правильность выработки эстрогенов. Мазок считается нормальным или отрицательным, когда все клетки имеют нормальные размеры и форму, и соответствуют месту забора, отсутствуют атипичные клетки. При выявлении атипичных клеток необходима консультация онколога. Аномальный мазок не всегда означает, что у женщины есть онкологическое заболевание шейки матки. При воспалении клетки тоже могут выглядеть аномальными. Но после лечения мазок обычно становится нормальным.

Мазок на скрытые инфекции

Эти мазки служат для выявления инфекций, которые не определяются при исследовании на флору. К ним относятся хламидии, уреаплазма, микоплазма , генетальный герпес, папилломавирусная и цитомегаловирусная инфекции. Есть достаточно большое количество различных методов диагностики таких инфекций. Наиболее достоверным является метод ПЦР — полимеразная цепная реакция, при котором инфекцию определяют по ее ДНК.

Забор мазков у женщин проводится по возможности в период вне месячных. Не рекомендуется использование спринцевания, а также любых вагинальных средств: свечей, овулей, следует воздерживаться от приема антибактериальных препаратов (антибиотиков и антисептиков) как внутрь, так и в виде местных инстилляций, а половой контакт за 24 часа до проведения исследования.

Посев на флору с определением чувствительности к антибиотикам

Существует два основных типа исследования посева на флору и чувствительность к антибиотикам:

посев на флору с определением чувствительности к основному спектру антибиотиков,
посев на флору с определением чувствительности к расширенному спектру антибиотиков.

Посев на флору с определением чувствительности позволяет установить возбудитель заболевания, а также подобрать наиболее целесообразный антибиотик. Это скорректирует выбранный терапевтический курс, а также, возможно, выявит причину неэффективности предыдущего курса лечения.

Ульянова Сания Музагитовна — акушер-гинеколог, врач высшей категории, главный врач медицинского центра «Тет-а-тет».

Мазок на флору у женщин

Мазок на флору у женщин берется в диагностических целях, этот анализ позволяет обнаружить атипичные клетки, оценить гормональный баланс и выявить признаки некоторых гинекологических заболеваний.

Назначают сдачу мазка женщинам в профилактических целях, а также в случае проявления симптомов болезней мочеполовой системы и при наличии жалоб: зуд в области влагалища, выделения, не связанные с менструацией, боль внизу живота. Обязательно такой анализ показан после длительного лечения антибиотиками и во время планирования беременности. Процедура безболезненна и не несет вреда.

Как проходит взятие мазка на флору

Чтобы результат мазка на флору был достоверным и информативным нужно соблюсти некоторые условия.

Что включает подготовка (за два дня до процедуры):

Отказ от половой жизни;
Запрет на свечи и таблетки для влагалища.
Нельзя использовать моющие средства.
Воздержание от купания в ванной.
Нельзя проводить спринцевание.
Мазок не сдается в период менструации.

Также гинекологи не рекомендуют своим пациенткам за несколько часов до взятия анализа мочиться. Берется мазок специальным стерильным шпателем со слизистой влагалища, шейки матки и мочеиспускательного канала во время гинекологического осмотра.

Норма показателей в мазке на флору

Мазок отправляют в лабораторию и после исследования выдаются результаты – написанные на листке буквы и цифры, обычным людям без медицинского образования они вряд ли будут понятны. На самом деле расшифровка анализа несложная, если известны нормативные показатели.

Нормальные показатели мазка взрослой здоровой женщины:

L (лейкоциты) – в мочеиспускательном канале и влагалище таких клеток должно быть не более 10, а в районе шейки матки менее 30.
Плоский эпителий – в поле зрения допускается наличие 15 клеток, если их больше, значит, прогрессирует воспаление, а недостаток свидетельствует о гормональном сбое.
Слизь – может присутствовать в небольшом количестве.
Палочки Дедерлейна – их должно быть много, недостаток лактобацилл признак нарушенной микрофлоры влагалища.
Зоны, из которых берут мазок, обозначаются такими буквами: U (мочеиспускательный канал), V (вагина), C (шейка матки).

Во время анализа должна определяться и степень чистоты. Первая степень диагностируется у абсолютно здоровых женщин, в их микрофлоре 95% лактобактерий, а лейкоцитов и эпителия единичные клетки. Вторая степень практически не отличается от первой, но в небольшом количестве могут быть выявлены условно-патогенные бактерии. Третья степень чистоты свидетельствует о превышении численности условно-патологических бактерий (больше, чем палочек Дедерлейна). При четвертой степени лактобацил практически не обнаруживается, зато много бактериальной флоры, эпителия и лейкоцитов. Лечить нужно два последних варианта.

Если в образцах мазка есть гонококки, трихомонады, грибы семейства Кандида или другие микроорганизмы, значит, в организме пациентки развивается воспалительное заболевание. В этом случае могут быть назначены дополнительные анализы для подбора наиболее эффективной терапии.

Что можно увидеть в результате исследования

Мазок на флору, если он проведен правильно и женщина придерживалась рекомендаций по подготовке, позволяет выявить воспалительные процессы, которые развиваются из-за наличия патогенных микроорганизмов.

Распространённые болезни, выявляемые в ходе исследования:

Цервицит – поражает канал шейки матки. Патология имеет воспалительную природу.
Вагинит – болезнь, которая пагубно влияет на влагалищные стенки.
Кандидоз – молочница возникает из-за чрезмерного наличия во флоре женщины Кандид.
Вагиноз бактериального типа – развивается в случае изменения состава микрофлоры влагалища.

Кроме того, анализ мазка на флору позволяет выявить ряд заболеваний, передающихся половым путем. Если были обнаружены гонококковые патогенные микроорганизмы, то это свидетельствует о развитии гонореи. Во время исследования можно обнаружить хламидиоз, трихомониаз, микоплазмоз и уреаплазмоз. Точный диагноз способен поставить только гинеколог, после изучения результатов анализов и тщательного осмотра пациентки.

Автор: Лаврова Нина Авенировна

Заместитель генерального директора по медицинской части

Окончила Ярославский государственный медицинский институт по специальности «Лечебное дело»
Медицинский опыт работы — 25 лет

Записаться к врачу

ОТЗЫВЫ КЛИЕНТОВ

Евгения

Была на приёме у гинеколога Ольги Александровны, была только один раз, но врач показался очень квалифицированный, далее судить буду в процессе лечения, и отпишусь. Клиника платная, но деньги не дерут! Профессионализм на высшем уровне, а цены ниже чем во многих псевдоклиниках. Девушка на телефоне очень приятная и уважительно относится к клиентам, старается помочь и выгодно для…[…]

Анастасия

Спасибо огромнейшее за Вашу работу! Все четко, ясно, понятно и быстро! Без лишних разговоров «о судьбе отечества». Просто невероятно позитивные эмоции после общения![…]

Инна

Прекрасный врач, имеет огромный опыт, может правильно поставить диагноз, все объяснить клиенту. К каждому находит свой подход.[…]

Наталья

Спасибо от меня и всей моей семьи за профессионализм, поддержку, чуткое и внимательное отношение. Это – огромное счастье, что такие компетентные, умелые и талантливые, неравнодушные люди работают именно там, где они больше всего нужны. Ваши терпение, отзывчивость, чуткость, понимание, забота, доброжелательное и внимательное отношение, лечат и успокаивают. Желаю крепкого…[…]

Светлана

Хочу выразить огромную благодарность Чулак Ольге Александровне, за внимательность, инд. подход к пациенту, а так же профессионализм, доброжелательность и заботу! А ТАк же клинику Президент-мед и всему персоналу на ресепшн. Ольга Александровна- вы лучшая :)[…]

Светлана

Екатерина

Добрый день, хочу выразить свое восхищение Екатериной Викторовной, врач высшей категории, с первой секунды располагает пациента, чувствуется высокий профессионализм, очень доброжелательная, внимательная, реально всегда на связи со своими пациентами, что очень важно, так как в наше время мало кто может брать на себя ответственность. Всем советую![…]

Дифференциальные методы окрашивания — Микробиология: лабораторный опыт

Просмотр бактериальных клеток

Микроскоп — очень важный инструмент в микробиологии, но существуют ограничения, когда дело доходит до его использования для наблюдения за клетками в целом и бактериальными клетками в частности. Двумя наиболее важными проблемами являются разрешение и контраст. Разрешение — это ограничение, с которым мы ничего не можем поделать, поскольку большинство бактериальных клеток уже близки к пределу разрешения большинства световых микроскопов.Тем не менее, контраст можно улучшить либо с помощью оптической системы другого типа, например, фазового контраста или микроскопа с дифференциальным интерференционным контрастом, либо путем окрашивания клеток (или фона) хромогенным красителем, который не только добавляет контраст, но и дает им тоже цвет.

В микробиологии используется множество различных методов окрашивания и окрашивания. Некоторые включают одно пятно и всего несколько шагов, в то время как другие используют несколько пятен и более сложную процедуру. Прежде чем вы сможете начать процедуру окрашивания, клетки должны быть закреплены (размазаны) и зафиксированы на предметном стекле.

Бактериальный мазок — это просто небольшое количество культуры, растекающееся очень тонкой пленкой на поверхности предметного стекла. Чтобы предотвратить вымывание бактерий во время этапов окрашивания, мазок может быть химически или физически «прикреплен» к поверхности предметного стекла. Тепловая фиксация — это простой и эффективный метод, который достигается путем кратковременного пропускания предметного стекла через пламя горелки Бунзена, в результате чего биологический материал становится более или менее прочно прикрепленным к поверхности стекла.

Термофиксированные мазки готовы к окрашиванию. При простом окрашивании в мазок добавляются красители, которые либо притягиваются зарядом (катионный краситель, такой как метиленовый синий или кристаллический фиолетовый), либо отталкиваются зарядом (анионный краситель, такой как эозин или тушь). Катионные красители связывают бактериальные клетки, что хорошо видно на ярком фоне. Анионные красители отталкиваются клетками, поэтому клетки становятся яркими на окрашенном фоне. Примеры того и другого см. На рисунках 1 и 2.

Рисунок 1. Отрицательное окрашивание Cyptococcus neoformans , инкапсулированных дрожжей. Рисунок 2. Положительное окрашивание на Staphylococcus aureus.

Вероятно, наиболее важной особенностью, которая становится очевидной при окрашивании бактериальных клеток, является их клеточная морфология (не путать с морфологией колоний, которая представляет собой появление бактериальных колоний на чашке с агаром). Большинство гетеротрофных и культивируемых бактерий имеют несколько основных форм: сферические клетки (кокки / кокки), палочковидные клетки (палочки / бациллы) или палочковидные клетки с изгибами или изгибами (вибрионы и спириллы соответственно).Существует большее разнообразие форм среди архей и других бактерий, встречающихся в экосистемах, отличных от человеческого тела.

Часто бактерии создают определенные структуры клеток, которые образуются в результате бинарного деления бактериями во время их размножения. Договоренности особенно очевидны с неподвижными бактериями, потому что клетки имеют тенденцию оставаться вместе после завершения процесса деления. И форма, и расположение клеток являются характеристиками, которые можно использовать для различения бактерий.Наиболее часто встречающиеся формы бактерий (кокки и бациллы) и их возможное расположение показаны на рисунках 3 и 4.

Рисунок 3. Возможное расположение бактериальных клеток для кокков. Рисунок 4. Возможное расположение бактериальных клеток для бацилл.

Дифференциальные методы окрашивания

В микробиологии методы дифференциального окрашивания используются чаще, чем простые окрашивания, как средство сбора информации о бактериях. Методы дифференциального окрашивания, которые обычно требуют более одного окрашивания и нескольких этапов, называются таковыми, потому что они позволяют дифференцировать типы клеток или клеточные структуры.Самым важным из них является окраска по Граму. Другие методы дифференциального окрашивания включают окрашивание эндоспор (для выявления бактерий, образующих эндоспоры), кислотостойкое окрашивание (для отличия видов Mycobacterium от других бактерий), метахроматическое окрашивание для выявления гранул, накапливающих фосфаты, и окрашивание капсул (для идентификации инкапсулированные бактерии). Мы будем выполнять процедуры окрашивания по Граму и эндоспор в лаборатории и просматривать подготовленные слайды, которые выделяют некоторые другие клеточные структуры, присутствующие в некоторых бактериях.

Краска по грамму

Рисунок 5. Бактерии, окрашенные по Граму.

В 1884 году врач Ганс Кристиан Грам изучал этиологию (причину) респираторных заболеваний, таких как пневмония. Он разработал процедуру окрашивания, которая позволила ему идентифицировать бактерию в легочной ткани, взятой у умерших пациентов, как этиологический агент фатальной пневмонии. Хотя метод окрашивания по Граму мало помог в лечении болезни, он значительно упростил диагностику причины смерти человека при вскрытии.Сегодня мы используем технику окрашивания по Граму, чтобы помочь в идентификации бактерий, начиная с предварительной классификации на одну из двух групп: грамположительных или грамотрицательных .

Дифференциальный характер окраски по Граму основан на способности некоторых бактериальных клеток сохранять первичное окрашивание (кристаллический фиолетовый), сопротивляясь процессу обесцвечивания. Окрашивание по Граму включает четыре этапа. Сначала клетки окрашивают кристаллическим фиолетовым с последующим добавлением фиксирующего агента для окрашивания (йода).Затем применяется спирт, который выборочно удаляет пятно только с грамотрицательных клеток. Наконец, добавляется вторичный краситель, сафранин, который окрашивает обесцвеченные клетки в розовый цвет.

Хотя в то время Грам не знал этого, основное различие между этими двумя типами бактериальных клеток — это их клеточные стенки. Стенки грамотрицательных клеток имеют внешнюю мембрану (также называемую оболочкой), которая растворяется во время мытья спиртом. Это позволяет красителю кристаллического фиолетового ускользнуть. Только обесцвеченные клетки поглощают розовый краситель сафранин, что объясняет разницу в цвете между двумя типами клеток.По завершении процедуры окрашивания по Граму грамположительные клетки выглядят пурпурными, а грамотрицательные — розовыми.

При интерпретации мазка, окрашенного по Граму, необходимо также описать морфологию (форму) клеток и их расположение. На рисунке 5 представлены два различных типа бактерий, которые можно различить по реакции окрашивания по Граму, а также по их форме и расположению. Ниже опишите эти характеристики для обеих бактерий:

	Грамположительные бактерии:	Грамотрицательные бактерии:
Морфология
Расположение

Кислотостойкое пятно

Некоторые бактерии производят воскообразное вещество миколиевую кислоту , когда они конструируют свои клеточные стенки.Миколиновая кислота действует как барьер, защищающий клетки от дегидратации, а также от фагоцитоза клетками иммунной системы хозяина. Этот восковой барьер также предотвращает проникновение пятен в клетку, поэтому окраска по Граму не работает с микобактериями, такими как Mycobacterium , которые являются патогенами людей и животных. Для этих бактерий используется метод окрашивания кислоты — fast .

Рисунок 6. Кислотоустойчивые бациллы в мокроте.

Для проведения кислотостойкого окрашивания термофиксированный мазок заливают основным красителем карбол фуксином, а предметное стекло нагревают на водяной бане с паром.Тепло «плавит» восковую клеточную стенку и позволяет клеткам поглощать краситель. Затем слайду дают остыть и добавляют раствор кислоты и спирта в качестве обесцвечивающего средства. Клетки, которые являются «кислотоустойчивыми» из-за миколовой кислоты в их клеточной стенке, сопротивляются обесцвечиванию и сохраняют первичное окрашивание. Все остальные типы клеток обесцвечиваются. Затем метиленовый синий используется в качестве контрастного красителя. В конце концов, кислотоустойчивые бактерии (КУБ) будут окрашены в ярко-розовый цвет, а все другие типы клеток станут синими.

Методы окрашивания для выделения специфических клеточных структур

Капсула : полисахаридная слизь, окружающая некоторые виды бактерий и несколько типов эукариотических микробов, лучше всего визуализируется при отрицательном окрашивании клеток. В этом методе бактерии сначала смешиваются с пятном, а затем капля смеси распределяется по поверхности предметного стекла в виде тонкой пленки. При использовании этого метода капсулы выглядят как прозрачный слой вокруг бактериальных клеток с темным фоном.

Метахроматические гранулы или другие внутрицитоплазматические тельца : Некоторые бактерии могут содержать накопительные тельца, которые могут окрашиваться. Одним из примеров является грамположительная палочка Corynebacterium , которая накапливает фосфат в структурах, называемых «волютин», или метахроматических гранулах, находящихся внутри клеточной мембраны. Для визуализации внутрицитоплазматических тел у бактерий используются различные методы окрашивания, которые часто дают ключ к идентификации при наблюдении в клетках.

Эндоспорное пятно

Эндоспоры — это спящие формы живых бактерий, и их не следует путать с репродуктивными спорами, продуцируемыми грибами. Эти структуры производятся несколькими видами грамположительных бактерий, почти всеми бациллами, в ответ на неблагоприятные условия окружающей среды. Две распространенные бактерии, продуцирующие эндоспоры, — это Bacillus или Clostridum . Оба живут в основном в почве и как симбионты растений и животных и производят эндоспоры, чтобы выжить в быстро и часто меняющейся среде.

Процесс эндоспоруляции (образование эндоспор) включает несколько этапов. После того, как бактериальная клетка реплицирует свою ДНК, образуются слои пептидогликана и белка, окружающие генетический материал. После полного формирования эндоспора высвобождается из клетки и может бездействовать в течение нескольких дней, недель или лет. Когда преобладают более благоприятные условия окружающей среды, эндоспоры прорастают и возвращаются к активной работе в качестве вегетативных клеток.

Зрелые эндоспоры обладают высокой устойчивостью к условиям окружающей среды, таким как тепло и химические вещества, что позволяет бактериям выжить в течение очень длительного времени.Эндоспоры, образовавшиеся миллионы лет назад, были успешно возвращены к жизни, просто обеспечив их водой и пищей.

Поскольку оболочка эндоспор очень устойчива к окрашиванию, был разработан специальный метод, чтобы их было легче увидеть в светлопольном микроскопе. Этот метод, получивший название «краситель эндоспор » , использует либо тепло, либо длительное время воздействия, чтобы побудить эндоспоры принять первичное пятно, обычно водорастворимый краситель, такой как малахитовый зеленый, поскольку эндоспоры проницаемы для воды.После этапа обесцвечивания, который удаляет краситель из вегетативных клеток в мазке, наносится контрастное сафранин для обеспечения цвета и контраста. При окрашивании этим методом эндоспоры становятся зелеными, а вегетативные клетки окрашиваются в розовый цвет, как показано на Рисунке 7.

Рисунок 7. Бактериальные клетки с эндоспорами, окрашенные методом окраски эндоспор. Рисунок 8. Бациллы с эндоспорами, просматриваемые с помощью фазово-контрастной микроскопии.

Хотя сами эндоспоры устойчивы к методу окрашивания по Граму, бактериальные клетки, захваченные в процессе создания этих структур, могут быть окрашены.В этом случае эндоспоры выглядят как четкие овальные или сферические области внутри окрашенной клетки. Эндоспоры также можно непосредственно наблюдать в клетках с помощью фазово-контрастной микроскопии, как показано на Рисунке 8.

Поскольку многие методы дифференциального окрашивания требуют нескольких этапов и длительного времени, мы не будем выполнять все методы дифференциального окрашивания, описанные выше.

Предварительно окрашенные слайды будут использоваться для визуализации бактериальных капсул, метахроматических гранул и кислотоустойчивых бацилл.Возьмите по одному слайду каждой из трех бактерий, перечисленных в таблице ниже. Просматривая эти слайды, обращайте внимание на «выделенные» структуры. У вашего изолята из окружающей среды может быть одна или несколько из этих клеточных функций, и умение распознавать их поможет в идентификации. Все это следует рассматривать с помощью масляной иммерсионной линзы объектива.

Бактерии	Пятно	Описание или эскиз ячеек с указанным признаком
Flavobacterium capsulatum	Капсульное пятно
Corynebacterium diphtheriae	Метиленовый синий (метахроматические гранулы)
Mycobacterium tuberculosis	Кислотостойкое пятно

Пятно по грамму

Все процедуры окрашивания следует проводить над раковиной.Будет продемонстрирована процедура окрашивания по Граму, а обзор представлен в таблице 1.

Таблица 1. Этапы процедуры окрашивания по Граму.
Шаг	Процедура	Результат
Первичная окраска (кристально-фиолетовый)	Добавьте несколько капель кристаллического фиолетового в мазок и оставьте на 1 минуту. Промойте предметное стекло водой.	И грамположительные, и грамотрицательные клетки будут окрашены в пурпурный цвет кристаллическим фиолетовым красителем.
Протрава (йод)	Добавьте несколько капель йода в мазок и оставьте на 1 минуту. Промойте предметное стекло водой.	Йод «устанавливает» кристаллический фиолетовый цвет, поэтому оба типа бактерий останутся фиолетовыми.
Обесцвечивание (этанол)	Добавьте капли этанола одна на a время , пока сток не станет прозрачным.Промойте предметное стекло водой.	Грамположительные клетки сопротивляются обесцвечиванию и остаются пурпурными. Краситель высвобождается из грамотрицательных клеток.
Контрастное пятно (сафранин)	Добавьте несколько капель сафранина в мазок и оставьте на одну минуту. Промойте предметное стекло водой и просушите салфеткой.	Грамотрицательные клетки будут окрашены сафранином в розовый цвет. Этот краситель не действует на грамположительные клетки, которые остаются фиолетовыми.

Волонтер из вашего лабораторного стола должен получить культуры бактерий, которые вы будете использовать в этой лаборатории, в соответствии с указаниями вашего инструктора.Одна из культур будет грамположительной бактерией, а другая — грамотрицательной. Ниже напишите названия бактерий, которые вы будете использовать, вместе с BSL для каждой культуры:

__________________________________________________________________________________

Возьмите два предметных стекла и приготовьте мазок каждой из двух бактериальных культур, по одному на предметное стекло, как показано. Дайте ПОЛНОСТЬЮ высохнуть на воздухе и закрепите при нагревании. Окрашивайте оба мазка методом окраски по Граму.Наблюдайте за предметными стеклами с помощью светового микроскопа при увеличении в 1000 раз и запишите свои наблюдения в таблице ниже.

Название культуры	Реакция окрашивания по Граму	Морфология клетки	Расположение

Пятно по Граму «Заключительный осмотр»: приготовьте мазок, содержащий смесь грамположительных И грамотрицательных бактерий, добавив небольшое количество каждой бактерии в одну каплю воды на предметном стекле.Тепло зафиксируйте мазок и окрасите его по Граму. Вы должны быть в состоянии определить реакцию окрашивания по Граму, клеточную морфологию и расположение ОБЕИХ бактерий в этом смешанном мазке. Ваш преподаватель может попросить показать этот слайд и предложить конструктивный комментарий.

Эндоспорное пятно

Лишь несколько родов бактерий продуцируют эндоспоры, и почти все они являются грамположительными бациллами. Наиболее заметными являются виды Bacillus и Clostridium , которые естественным образом обитают в почве и являются обычными загрязняющими веществами на поверхности.Рост Clostridium spp. обычно ограничивается анаэробной средой; Bacillus spp. может расти как в аэробных, так и в анаэробных условиях. Эндоспорообразующие бактерии отличаются от других групп грамположительных бацилл и различаются по их эндоспорам.

Обзор процедуры окрашивания эндоспор представлен в таблице 2.

Таблица 2. Этапы процедуры окрашивания эндоспор.
Шаг	Процедура	Результат
Первичная морилка (малахитовый зеленый)	Добавьте несколько капель малахитового зеленого в мазок и оставьте на 10 минут.Если пятно начинает высыхать, добавьте дополнительные капли.	Вегетативные клетки немедленно поглощают первичное пятно. Эндоспоры устойчивы к окрашиванию, но со временем впитывают краситель.
Обесцвечивание (вода)	Промойте предметное стекло под слабой струей воды в течение 10-15 секунд.	После окрашивания эндоспоры остаются зелеными. Тщательное ополаскивание водой обесцвечивает вегетативные клетки.
Контрастное пятно (сафранин)	Добавьте несколько капель сафранина в мазок и оставьте на 1 минуту.Промойте предметное стекло и промокните насухо.	Обесцвеченные вегетативные клетки принимают контрастное пятно и становятся розовыми; эндоспоры светло-зеленые.

После окрашивания эндоспоры обычно выглядят как светло-зеленые овальные или сферические структуры, которые можно увидеть внутри или снаружи вегетативных клеток, которые выглядят розовыми.

Форма и расположение эндоспор внутри бактериальных клеток, а также то, расширяет ли спорангий (D) или не расширяет (ND) стороны клетки, являются важными характеристиками, которые помогают в дифференциации между видами (см. Рисунок 9) .

Рисунок 9

Овальный, центральный, не растянутый (ND)
Овальный, концевой, ND (и параспоральный кристалл)
Овальный, концевой, растянутый (D)
Овальный, центральный, D
Сферический, концевой, D
Овальный, боковой, D

Эндоспоры довольно устойчивы к большинству процедур окрашивания; однако в мазках с обычным окрашиванием они могут быть видны как «очертания» с чистым пространством внутри. Если вы наблюдаете «очертания» или то, что кажется «призраками» клеток в мазке, окрашенном по Граму, грамположительных бацилл, то также следует выполнить окрашивание эндоспор, чтобы подтвердить наличие или отсутствие эндоспор.

Волонтер из вашего лабораторного стола должен получить бактериальные культуры для окрашивания эндоспор в соответствии с указаниями вашего инструктора. Обратите внимание, что все это будут виды Bacillus . Приготовьте мазки и прокрасьте каждый, используя технику окрашивания эндоспор. Посмотрите на слайды и отметьте форму и расположение эндоспоры, а также внешний вид спорангия (опухший или не опухший) в таблице ниже:

Название культуры	Форма эндоспоры	Расположение	Спорангий

Кроме того, выберите ОДНУ из указанных выше культур и окрасите ее по Граму.Запишите свои результаты ниже в отведенных местах:

Название культуры, окрашенной по Граму: __________________________________________________

Реакция окрашивания по Граму и клеточная морфология: ______________________________________

Видны ли эндоспоры в мазке, окрашенном по Граму? _________________ Если вы видите эндоспоры, опишите, как они выглядят в препарате, окрашенном по Граму, и чем он похож и отличается от того, что вы видите в препарате, окрашенном по Граму.

грамм красителя | Лабораторные тесты онлайн

Источники, использованные в текущем обзоре

Окраска по Граму. Медицинские лаборатории Мэйо. Доступно в Интернете по адресу http://www.mayomedicallaboratories.com/test-catalog/Clinical+and+Interpretive/8078. По состоянию на январь 2017 г.

Окраска по Граму. Медицинский центр Университета Рочестера, Энциклопедия здоровья. Доступно в Интернете по адресу https://www.urmc.rochester.edu/encyclopedia/content.aspx?ContentTypeID=167&ContentID=gram_stain/.По состоянию на январь 2017 г.

Patolia S., et al. (Обновлено 11 декабря 2015 г.) Пятно по Граму. Medscape. Доступно в Интернете по адресу http://emedicine.medscape.com/article/2093371-overview. По состоянию на январь 2017 г.

Hazen, K.C. (Изменено в октябре 2016 г.). Микроскопия. Руководство Merck, профессиональная версия. Доступно в Интернете по адресу http://www.merckmanuals.com/professional/infectious-diseases/laboratory-diagnosis-of-infectious-disease/microscopy. По состоянию на январь 2017 г.

Источники, использованные в предыдущих обзорах

Атлас лабораторной микроскопии кабинета врача , 3-е изд., 2007 г.Хендерсон и Мюррей. Американская академия семейных врачей. Проверка квалификации.

Vorvick, L. (Обновлено 9 августа 2009 г.). Эндоцервикальное окрашивание по Граму. Медицинская энциклопедия MedlinePlus [Он-лайн информация]. Доступно в Интернете по адресу http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/ency/article/003753.htm. По состоянию на февраль 2010 г.

Yuki Uehara, Y. et. al. (18 сентября 2009 г.). Влияние отчета о результатах окрашивания по Граму из бутылок для культивирования крови на выбор противомикробных агентов. Medscape Today из Американский журнал клинической патологии [Электронная информация].Доступно в Интернете по адресу http://www.medscape.com/viewarticle/708594. По состоянию на февраль 2010 г.

Клиническая диагностика и лечение Генри лабораторными методами . 21-е изд. Макферсон Р., Пинкус М., ред. Филадельфия, Пенсильвания: Saunders Elsevier: 2007, Pp 1016-1017.

(© 2012) Кавано Д., Кин М., Американское общество микробиологии. Пятно по Граму: анимированный подход. Доступно в Интернете по адресу http://www.microbelibrary.org/library/gram-stain/3018-the-gram-stain-an-animated-approach.По состоянию на сентябрь 2013 г.

(обновлено 22 июля 2103 г.) Смит А., Хасси М., Американское общество микробиологии. Протоколы окрашивания по Граму. Доступно в Интернете по адресу http://www.microbelibrary.org/component/resource/gram-stain/2886-gram-stain-protocols. По состоянию на сентябрь 2013 г.

(обновлено 21 февраля 2013 г.) Patolia S, et al. Окраска по Граму. Справочная статья Medscape. Доступно в Интернете по адресу http://emedicine.medscape.com/article/2093371-overview. По состоянию на сентябрь 2013 г.

Uehara Y, et al.Влияние отчета о результатах окрашивания по Граму из бутылок для культивирования крови на выбор противомикробных агентов. Am J Clin Pathol 2009 132: 18-25. Доступно в Интернете по адресу http://ajcp.ascpjournals.org/content/132/1/18.full?sid=b349478c-9108-4e9c-b957-5547886cb78c. По состоянию на сентябрь 2013 г.

Munson E, et al. Механизмы оценки квалификации специалистов по интерпретации пятен по Граму в спутниковых лабораториях. J. Clin. Microbiol. ноябрь 2007 г. 45 нет. 11 3754-3758.Доступно в Интернете по адресу http://jcm.asm.org/content/45/11/3754.long. По состоянию на сентябрь 2013 г.

Прямые мазки, окрашенные по граммам, при чтении и сообщении

Краткое содержание курса

Щелкните по ссылкам ниже, чтобы просмотреть выбранные страницы из этого курса.

Назначение прямого мазка, окрашенного по Граму
Чтение и составление отчетов о прямых мазках

Принцип определения пятен по Граму
Мазок контроля качества
Макроскопическая оценка мазка
Толстый
Правильно обесцвеченные мазки
Недостаточно обесцвеченные или чрезмерно обесцвеченные мазки
Отчет о результатах микроскопии
Загрязненный раствор для окрашивания по Граму
Краткое описание процедуры считывания пятен по Граму и процедуры отчетности
Какого цвета является фоновый материал в мазке, окрашенном по Граму были адекватно обесцвечены?
Какое МИНИМАЛЬНОЕ количество полей следует исследовать, прежде чем сообщать о прямом мазке, окрашенном по Граму?
Если мазок слишком обесцвечен, его можно восстановить, повторив процедуру окрашивания по Граму.
Для чего нужен йод при окрашивании по Граму?
Какое из следующих утверждений верно относительно мазка, окрашенного по Граму, который представлен на этом изображении?

Бактерии в прямом мазке

Грамположительные кокки
Грамположительные диплококки
Грамотрицательные кокки
Внутриклеточные бактерии
Грамм-903 Диплококки
-положительные бациллы
Грамотрицательные бациллы
Значение конкретных результатов
Бактерии на этом слайде представляют собой грамотрицательные кокки.
Какие структуры показаны стрелками в этом поле на мазке, окрашенном по Граму?
Наличие внутриклеточных грамотрицательных диплококков в мазке, сделанном из гнойных выделений из уретры мужчины, может служить подтверждением диагноза …

Небактериальные клетки в прямом мазке

Размер и внешний вид Небактериальные клеточные элементы в мазках, окрашенных по Граму
Сопоставьте реакцию окрашивания по Граму для каждого из следующих небактериальных элементов.
Какие из следующих клеток примерно такого же размера, как эритроциты?
Какие небактериальные структуры присутствуют в этом микроскопическом поле мазка, окрашенного по Граму? (Выберите ВСЕ подходящие варианты)
Это окрашивание по Граму было приготовлено из образца мокроты и просматривается под масляной иммерсией (1000X). Какая структура обозначена стрелкой?

Ссылки

Дополнительная информация

Этот курс описывает морфологию и реакции окрашивания по Граму бактерий и небактериальных элементов, обнаруженных в окрашенных по Граму мазках клинического материала.
Уровень обучения : Базовый

Целевая аудитория : Этот курс подходит для базовых курсов клинической микробиологии на уровне послесреднего образования. Его также можно использовать в качестве обзорного материала для практикующих клинических лабораторий, студентов-медиков и патологоанатомов.

Предварительные требования : Навыки использования микроскопа, асептических методов, опыт подготовки и окрашивания мазков по Граму, а также опыт чтения мазков из культур.

Полномочия автора : Этот курс был разработан Betty Smith MT (ASCP) и Jaimy Hill MT (ASCP) и обновлен Education Materials for Health Professionals, Inc. под руководством Marjorie Spahn MT (ASCP). Он был просмотрен и адаптирован для использования в Интернете Полом Фекете, доктором медицинских наук C.A.P.

Авторское право : Авторское право EMHP Inc., Дейтон, Огайо. Лицензия предоставлена MediaLab Inc., Дакула, Джорджия. Интернет-версия, выпущенная исключительно MediaLab Inc.

Streptococcus Lab: Id Strep Species General Methods Section 1

Раздел I.

Схема рабочего процесса для лаборатории

Stretococcus

Если культура представляет собой неидентифицированный грамположительный кокк, Enterococcus , viridans Streptococcus или неизвестной идентичности (в основном включает все культуры, кроме пневмококков, ß-гемолитических стрептококков и питательных стрептококков), засевайте следующие СМИ. Засейте чашку агара с 5% -ным агаром с триптиказо-соевым 5% -ным агаром с кровью барана, нанеся тяжелый посевной материал на одну четверть чашки, а оставшуюся часть нанесите штрихами для изолированных колоний.Поместите диск ванкомицина на самую тяжелую часть посевного материала и поместите планшет в сосуд для тушения свечей или инкубатор CO ₂ на 18–24 ч при 35 ° C.
Если культура идентифицирована как бета-гемолитический стрептококк или стрептококки группы A, B, C, F или G, засевайте пластину агара с триптиказо-соевым 5% агаром с овечьей кровью и поместите бацитрациновый диск на тяжелую часть нароста. Все чашки следует инкубировать в сосуде для тушения свечей или инкубаторе с CO ₂ в течение 18 часов при 35 ° C.Для большинства культур, представленных как стрептококки группы А, тех, которые выглядят чистыми в представленной культуре, следует засеять 30 мл и 5 мл бульона Тодда-Хьюитта (THB). Поместите 5 мл THB в инкубатор на 30 ° C или оставьте при комнатной температуре на 1-3 дня. 5 мл THB используют для типирования Т-агглютинации стрептококков группы А. Поместите 30 мл бульона при 35 ° C на 16–18 часов. Не инкубируйте дольше 18 часов. Для бета-гемолитических стрептококков, отличных от группы A, 30 мл THB также можно засеять и поместить при 35 ° C на 18-24 часа.Некоторым штаммам может потребоваться более одного дня инкубации, инкубация этих бульонов более 24–72 часов не причинит вреда. 30 мл THB используется в некоторых случаях для серогруппировки и серотипирования.
Если культура представлена как питательная недостаточность Streptococcus (NVS), засевайте всю чашку триптиказо-соевого кровяного агара культурой. Перпендикулярно этой полосе аккуратно нанесите одну полосу с культурой Staphylococcus aureus . Этот тест определит, образует ли неизвестная культура колонии-спутники, прилегающие к стафилококкам, что характерно для всех NVS.Инкубируйте планшет в CO ₂ или в сосуде для тушения свечей при 35 ° C в течение 24–48 часов.

Примеры необычных или неожиданных результатов:

Чашки с кровяным агаром, используемые описанным выше способом, предназначены для проверки чистоты культур. Если какие-либо результаты необычны или неожиданны, или если культура загрязнена, тест необходимо повторить.

Стрептококки, устойчивые к ванкомицину, или другие неизвестные, кроме лейконостоков и педиококков, которые по своей природе устойчивы к ванкомицину.

AccuProbe-

Enterococcus Тест

Принцип
Тест AccuProbe- Enterococcus используется для помощи в идентификации атипичных энтерококков и помогает дифференцировать штаммы Enterococcus и Lactococcus .
Инокулят
Ночная культура, выращенная на кровяном агаре, инкубированная при 35 ° C в CO ₂.
Реагенты и материалы
Genprobe Accuprobe Enterococcus Тест идентификации культуры, GEN-PROBE Inc.Сан-Диего, Калифорния,
Процедура
Тест проводится в соответствии с инструкциями, вложенными в пакет.
Чтение и интерпретация
Автоматическое
Ограничения
Будьте осторожны с количеством используемых колоний. Слишком много колоний приведет к ложноположительному результату.
Контроль качества
Контроль качества, положительные и отрицательные реакции определяются каждый день, когда определяется результат теста. E. faecalis SS1273 и S. sanguinis SS910 используются в качестве положительного и отрицательного контролей соответственно.

AccuProbe-

Пневмококк Тест

Принцип
Тест AccuProbe- Pneumococcus используется для помощи в идентификации атипичных пневмококков и для дифференциации штаммов viridans Streptococcus .
Инокулят
Ночная культура, выращенная на кровяном агаре, инкубированная при 35 ° C в CO ₂.
Реагенты и материалы
Genprobe Accuprobe Pneumococcus Тест идентификации культуры, GEN-PROBE Inc.Сан-Диего, Калифорния,
Процедура
Тест проводится в соответствии с инструкциями, вложенными в пакет.
Чтение и интерпретация
Автоматическое
Ограничения
Будьте осторожны с количеством используемых колоний. Слишком много колоний приведет к ложноположительному результату.
Контроль качества
Контроль качества, положительные и отрицательные реакции определяются каждый день, когда определяется результат теста. S. pneumonia и S. sanguinis SS910 используются в качестве положительного и отрицательного контролей соответственно.

Образование кислоты в углеводных бульонах

Принцип
Способность бактерий образовывать кислоту в некоторых углеводных бульонах, но не в других, может использоваться в схемах идентификации. Если бактерии подкисляют углевод, pH изменится, и индикатор (бромкрезоловый пурпурный) станет желтым.
Инокулят
Ночная культура в бульоне Тодда Хьюитта, инкубированная в течение ночи при 35 ° C, или свежая бактериальная суспензия в бульоне Тодда Хьюитта может использоваться в качестве инокулята.
Реактивы и материалы
1. Бульон Heart Infusion с 1% углеводов и 0,16 бром-крезоловым пурпурным индикатором. Большинство углеводных бульонов коммерчески доступны (Ремел). Звездочкой отмечены те, которые сделаны CDC media lab.
2. Пипетка
Процедура
1. Засейте пробирку углеводного бульона 1-3 каплями посевного материала. 2. Затем пробирку с бульоном инкубируют при температуре 35 ° C до 7 дней на воздухе. Придирчивые организмы могут содержаться до 14 дней.
Чтение и интерпретация
Положительная реакция регистрируется, когда бульон становится желтым. Отрицательная реакция — это отсутствие изменения цвета. Определенное изменение цвета, не совсем желтого, можно интерпретировать как слабую положительную реакцию.
Ограничения
Не инкубируйте в CO ₂, так как это может изменить pH.
Контроль качества
Каждая партия и партия углеводной бульонной среды при поступлении в лабораторию проверяются на наличие положительных и отрицательных реакций.Штаммы и реакции для каждого бульона перечислены ниже.

Углеводы	Положительная реакция Штамм № вид	Отрицательная реакция Штамм № разновидности
Арабиноза	SS-1274, E. faecium	SS-1273, E. faecalis
Глицерин	SS-1273, E. faecalis	SS-2174, E. faecium
Инулин	SS-1229, E.касселифлавус	СС-429. S. mitis
Лактоза	SS-1273, E. faecalis	SS-1419, P. acidilactici
Лактоза	SS-1273, E. faecalis	SS-1419, P. acidilactici
Мальтоза	SS-1273, E. faecalis	SS-1419, P. acidilactici
Маннит	SS-1273, E.faecalis	SS-1419, P. acidilactici
Мелебиоза	SS-1229, E. casseliflavus	SS-1273, E. faecalis
* м-α-D-глюкопиранозид	SS-1229, E. casseliflavus	SS-1273, E. faecalis
* Пуллулан	СС-1633, G. balaenoptera	SS-1138, G. adiacens
Рафиноза	SS-1229, E.касселифлавус	SS-1273, E. faecalis
Рибоза	SS-1273, E. faecalis	SS-1317 E. casseliflavus
Сорбит	SS-1273, E. faecalis	SS-1227, E. hirae
Sorbose	SS-817, E. avium	SS-1273, E. faecalis
Сахароза	SS-1273, E.faecalis	SS-1419, P. acidilactici
* Тагатоз	SS-1138, G. adiacens	СС-1633, G. balaenoptera
трегалоза	SS-1273, E. faecalis	SS-1344, S. equi
Ксилоза	SS-1503, E. porcinus	SS1404, E. ratti

Начало страницы

Гидролиз аргинина

Принцип
Некоторые бактерии содержат ферменты, гидролизующие аргинин.Этот гидролиз приводит к щелочному изменению среды, что приводит к изменению цвета среды. Этот тест можно использовать для дифференцированных различных бактерий.
Инокулят
Капля бульонной культуры Тодда Хьюитта, выращенная в течение ночи, является предпочтительным инокулятом. В качестве инокулята можно также использовать суспензию в бульоне Тодда Хьюитта, образовавшегося в результате роста на чашке, или небольшого количества роста на чашке.
Реактивы и материалы
1. Декарбоксилазный бульон Мёллера, содержащий аргинин.Среда имеется в продаже.
2. Пипетка или петля
Процедура
1. Добавьте 1-3 капли культуральной суспензии в пробирку с декарбоксилазной средой Мёллера, содержащей аргинин
2. Немедленно покрыть стерильным минеральным маслом (примерно 1-2 мл).
3. Среду инкубируют при 35 ° C до 7 дней на воздухе. (Какой-то привередливый организм может задержать до 14 пенсов.)
Считывание и интерпретация
Положительная реакция регистрируется, когда бульон становится темно-фиолетовым, что указывает на щелочную реакцию, выделяется NH ₃.Появление желтого цвета или отсутствие изменения цвета бульона свидетельствует об отрицательной реакции.
Контроль качества
Каждая новая партия и партия среды проверяется на наличие положительных и отрицательных реакций. E. faecalis штамм SS1273 используется для определения положительных реакций, а S. avium штамм SS817 используется для определения отрицательных реакций.

Начало страницы

Тест на бацитрацин

Принцип
Бацитрациновый диск — тест на чувствительность, используемый для дифференциации бета-гемолитического стрептококка Streptococcus .
Инокулят
Ночная культура, выращенная на 5% агаре с овечьей кровью, инкубированная при 35 ° C в CO ₂.
Реактивы и материалы
1. бацитрацин «А» диск (BBL)
Процедура
1. Выберите бета-гемолитическую колонию и сильно засевайте квадрант чашки с агаром с 5% овечьей кровью.
2. Бросьте диск «А» в самую тяжелую зону посева.
3. Слегка постучите по диску, чтобы убедиться, что он прилегает к агару.
4. Инкубируйте планшет в течение ночи в CO ₂ при 35 ° C.
Чтение и интерпретация
Любая зона подавления считается положительным или чувствительным тестом. Рост до края диска интерпретируется как отрицательный тест или тест на устойчивость.
Ограничения
Контроль качества
Контроль качества проводится для каждой партии и каждой партии бацитрацинового диска. Streptococcus pyogenes — положительный (чувствительный контроль), а Enterococcus faecalis SS1273 — резистентный или отрицательный контроль.Результаты заносятся в журнал контроля качества.

Тест на эскулин желчи

Принцип
Селективная и дифференциальная среда, используемая для идентификации каталазонегативных бактерий. Селективный агент желчи, подавляет большинство грамположительных бактерий. Энтерококки и стрептококки bovis будут расти. Эскулин в среде гидролизуется до эскулетина и декстрозы. Эскулетин реагирует с хлоридом железа в среде с образованием черно-коричневого цвета.
Инокулят
Ночная культура в бульоне Тодда Хьюитта, инкубированная в течение ночи при 35 ° C, или свежая бактериальная суспензия в бульоне Тодда Хьюитта может использоваться в качестве инокулята. Также можно использовать инокуляционную петлю с культурой.
Реактивы и материалы
1. Желчный эскулин наклонный (Remel)
Процедура
1. Посевная пробирка с 1 каплей посевного материала, позволяющая капле стечь под наклоном. В качестве альтернативы, скошенный сент может быть засеян петлей роста из чашки с кровяным агаром.
2. Затем скос инкубируют при 35 ° C в течение 2 дней на воздухе. Придирчивые организмы могут содержаться до 14 дней.
Чтение и интерпретация
Тест на эскулин желчи дает положительный результат, когда черный цвет образует более половины или более уклона. Если почернения не происходит, тест отрицательный.
Ограничения
Не инкубируйте среду в атмосфере двуокиси углерода. Увеличение C0 ₂ приведет к лучшему росту стрептококков viridans и увеличит вероятность положительной реакции на БЭ. Streptococcus bovis и энтерококки не требуют C0 ₂ для хорошего роста.
Контроль качества
Положительные и отрицательные реакции определяются для каждой новой партии и каждой партии носителя. Enterococcus faecalis штамм SS-1273 использовали для реакций положительного контроля, а Streptococcus sanguinis штамм SS-910 использовали для реакций отрицательного контроля. Результаты заносятся в журнал контроля качества.

Начало страницы

Тест на растворимость в желчи

Принцип
Цель теста на растворимость желчи — помочь дифференцировать S.pneumonia e от всех других альфа-гемолитических стрептококков. Дезоксихолат натрия (2%) действует на клеточную стенку пневмококков, вызывая лизис.
Инокулят
Ночная культура, выращенная на кровяном агаре, инкубированная при 35 ° C в CO ₂.
Реактивы и материалы
1. 2% дезоксихолат (Центральная сервисная лаборатория CDC, формула № 5333)
2. физиологический раствор pH 7,0 Стеклянная трубка 3,13 X 100 мм
Процедура
1. Сделайте 1,0 мл физиологической суспензии клеток, выращенных на чашке с агаром.Следует использовать мутность, равную стандарту плотности МакФарланда от 1,0 до 2,0.
2. После достижения удовлетворительной плотности суспензию разделите на 2 пробирки примерно по 0,5 мл в каждой.
3. Добавьте 0,5 мл 2% дезоксихолата натрия (желчных солей) в одну пробирку и 0,5 мл физиологического раствора в другую. Перемешать энергичным встряхиванием.
4. Инкубируйте пробирки при 35–37 ° C до 2 часов.
Чтение и интерпретация
Периодически проверяйте очистку от мутности.Удаление мутности в желчной трубке, но не в контрольной пробирке с физиологическим раствором, указывает на положительный результат теста, т.е. клетки пневмококка лизировались («солюбилизировались»). Если пробирка, содержащая клетки и желчь, не очистилась, тест отрицательный. Иногда некоторые штаммы пневмококков лишь частично растворяются в желчных солях, то есть происходит частичное очищение. Эти штаммы должны иметь соответствующую зону ингибирования вокруг оптохинового теста, чтобы их можно было назвать пневмококками. Частично растворимые штаммы с зонами ингибирования менее 14 мм не считаются пневмококками.
Ограничения
Мутность должна быть достаточной для определения разницы в контрольной пробирке с физиологическим раствором.
Контроль качества
Каждая новая партия дезоксихолата проверяется на наличие положительных и отрицательных реакций с использованием штамма S. pneumonia e ATCC-49619 (положительный результат) и штамма S. mitis SS-429 (отрицательный). Результаты заносятся в журнал контроля качества.

Начало страницы

Тест лагеря

Принцип
Некоторые бактерии продуцируют фактор САМР (диффундирующий внеклеточный белок), который синергетически действует с бета-лизином Staphylococcus aureus и усиливает лизис красных кровяных телец.Целью теста CAMP является помощь в идентификации негемолитических стрептококков группы B и других ß-гемолитических стрептококков.
Инокулят
Рост из чашки с кровяным агаром или любой твердой среды.
Реактивы и материалы
TSA-агар с овечьей кровью
Процедура
1. Тест CAMP выполняется на агаре TSA-овечьей крови. Одиночная полоска ß-лизина, продуцирующая S. aureus , проходит по центру пластины. Штамм SS-695 (номер лаборатории Strep. Lab представляет собой штамм-продуцент ß-лизина S.aureus .
2. Одиночная колония неизвестного штамма (бета-гемолитические стрептококки) отбирается инокуляционной петлей и используется для создания одной полосы перпендикулярно, но не касающейся полосы S. aureus . Между полосами должно оставаться расстояние 2-3 мм.
3. Инкубируйте засеянный планшет в нормальной атмосфере в течение ночи при 35 ° C. Стрептококки группы B и некоторые другие бета-стрептококки вызывают усиление активности ß-лизина штамма S. aureus .
Чтение и интерпретация
Это расширенное упражнение имеет форму наконечника стрелки на стыке двух полос, причем самая широкая часть наконечника стрелки находится на стороне группы B.
Ограничения
Не инкубируйте в анаэробной среде или при CO. ₂. Некоторые штаммы S. pyogenes дают положительную реакцию при инкубации в CO ₂.
Контроль качества
Коммерчески доступный агар TSA с овечьей кровью не всегда демонстрирует правильную реакцию CAMP.Поэтому необходимо тестировать известный стрептококк группы B на реакцию CAMP в качестве положительного контроля на каждой тестовой пластине. Штамм стрептококка группы B SS-617 следует использовать в качестве положительного контроля на каждой тестовой пластине.

Начало страницы

Тест каталазы

Принцип
Перекись водорода (H ₂ O ₂) используется для определения того, продуцируют ли бактерии фермент каталазу.
Инокулят
Культуры, выращенные на среде, не содержащей крови, или колония, выращенная на чашке с кровяным агаром, которую осторожно переносят на предметное стекло без переноса каких-либо эритроцитов.Культуры обычно выращивают в течение ночи при 35 ° C в CO ₂.
Реактивы и материалы
1. Трехпроцентный перекись водорода получают в коммерческой аптеке.
2. Пипетка
3. Слайды
Процедура
1. Тест на каталазу лучше всего выполнять, залив рост бактерий (обычно на скошенном агаром, но можно использовать чашки с агаром без крови) 1,0 мл 3% перекиси водорода и наблюдая за вскипанием (пузырьками), указывающими на положительный тест.Бактерии необходимо выращивать на среде, не содержащей крови.
2. Модификации теста на каталазу могут быть выполнены путем очень осторожного удаления колонии роста с чашки с кровяным агаром с помощью пластиковой иглы или деревянной палочки-аппликатора и переноса колонии на предметное стекло. К колонии на предметном стекле добавляют каплю 3% перекиси водорода и наблюдают за вскипанием.
Чтение и интерпретация
Любой признак пузырьков интерпретируется как положительный результат. Отсутствие пузырей трактуется как отрицательный.
Ограничения
Получение ложноположительных результатов при переносе эритроцитов. Слабые положительные результаты следует повторить на среде без крови. Тест на каталазу очень эффективно дает большинство различий, однако в некоторых случаях тест на каталазу и морфология колонии могут ввести в заблуждение.
Контроль качества
Контроль качества каталазы выполняется один раз на партию и отгрузку. Для получения положительной реакции используйте посевы без крови на Staphylococcus aureus : i.е., штамм Cowen I, но можно использовать и другие подтвержденные культуры стафилококков. Для отрицательной реакции используют штамм Streptococcus sanguinis SS-910 (ATCC-10556). Сделайте запись в руководстве по контролю качества.

Начало страницы

Тест на клиндамицин

Принцип
Устойчивость бактерий к клиндамицину определяют с помощью клиндамицинового диска в концентрации 2 мкг / мл. Эта устойчивость полезна для дифференциации видов Lactococcus .
Инокулят
Рост из чашки с кровяным агаром или любой твердой среды.
Реактивы и материалы
1. диск клиндамицина 2 мкг / мл
2. пластина с кровяным агаром
Процедура
Бактерии распределяют на чашку с агаром с 5% овечьей кровью, диск помещают на чашку и планшет инкубируют при 35 ° C в течение 18-24 часов в CO ₂.
Чтение и интерпретация
Любая зона запрета вокруг диска считается чувствительной. Зоны обычно Ξ20мм.
Ограничения
Контроль качества
Контроль качества проверяется для каждой партии и отгрузки. Lactococcus lactis использовали для отрицательного контроля (чувствительный), а L. garviae использовали для положительного контроля (резистентный).

Начало страницы

Гидролиз эскулина

Принцип
Дифференциальная среда, используемая для идентификации каталазонегативных бактерий. Эскулин в среде гидролизуется до эскулетина и декстрозы. Эскулетин реагирует с хлоридом железа в среде с образованием черно-коричневого цвета.
Инокулят
Ночная культура в бульоне Тодда Хьюитта, инкубированная в течение ночи при 35 ° C, или свежая бактериальная суспензия в бульоне Тодда Хьюитта может использоваться в качестве инокулята.Также можно использовать инокулирующую петлю культуры из чашки с кровяным агаром.
Реактивы и материалы
1. Эскулин наклонный (Ремель)
Процедура
1. Засейте косую пробирку 1-3 каплями посевного материала, чтобы капля стекала вниз под наклоном. В качестве альтернативы, скошенный сент может быть засеян петлей роста из чашки с кровяным агаром.
2. Затем скос инкубируют при 35 ° C в течение 7 дней на воздухе. Придирчивые организмы могут содержаться до 14 дней.
Чтение и интерпретация
Тест на эскулин положительный, когда черный цвет образует более половины или более уклона.Если почернения не происходит, тест отрицательный.
Ограничения
Не инкубируйте среду в атмосфере двуокиси углерода. Увеличение C0 ₂ приведет к лучшему росту стрептококков viridans и увеличит вероятность положительной реакции. Streptococcus bovis и энтерококки не требуют C0 ₂ для хорошего роста.
Контроль качества
Положительные и отрицательные реакции определяются для каждой новой партии и каждой партии носителя. Enterococcus faecalis штамм SS-1273 используется для реакций положительного контроля, а штамм Streptococcus mitis SS-429 используется для реакций отрицательного контроля.Результаты заносятся в журнал контроля качества.

Начало страницы

Газ из бульона МРС

Принцип
Производство газа из глюкозы проверено в бульоне Lactobacillus MRS.
Инокулят
Ночная культура в бульоне Тодда Хьюитта, инкубированная в течение ночи при 35 ° C, или свежая бактериальная суспензия в бульоне Тодда Хьюитта может использоваться в качестве инокулята. Также можно использовать инокулирующую петлю культуры из чашки с кровяным агаром.
Реактивы и материалы
Бульон MRS готовят в Центральной лаборатории обслуживания CDC, формула No.9208. Вазелин также готовят в центральной сервисной лаборатории CDC, формула № 9356.
Процедура
Бульон инокулируют 2 или более колониями из чашки или 1-2 каплями бульонной культуры. Затем бульон закрывают расплавленным вазелином и инкубируют пробирку при температуре окружающей среды 37 ° C до 7 дней.
Чтение и интерпретация
На образование газа указывает образование газа между бульоном и пробкой из вазелинового масла, которая толкает восковую пробку к верху трубки.Маленькие пузырьки, которые могут накапливаться в течение инкубационного периода, не считаются положительными, только когда восковая пробка отделена от бульона, результат теста считается положительным. Большинство штаммов лейконостока являются положительными через 24 часа, но для некоторых штаммов может потребоваться больше времени.
Ограничения
Контроль качества
Каждая новая партия бульона MRS, приготовленная Центральной сервисной лабораторией CDC, тестируется на положительные (образование газа) и отрицательные (отсутствие газа) реакции. Leuconostoc mesenteroides штамм SS-1238 (ATCC-8293) используется для получения положительного результата, а Streptococcus sanguinis штамм SS-910 (ATCC-10556) используется для отрицательного образования газа.Результаты записываются в журнал контроля качества.

Начало страницы

Пятно по грамму

Принцип
Окраска по Граму используется для различения грамположительных и грамотрицательных бактерий. Также может быть определена клеточная морфология. И грамположительные, и грамотрицательные бактерии окрашиваются кристаллическим фиолетовым. Добавление йода образует комплекс внутри клеточной стенки. Добавление обесцвечивающего средства удаляет пятна с грамотрицательных организмов из-за повышенного содержания в них липидов.Эти клетки окрашиваются в розовый цвет сафранином, окрашивающим контр-краситель.
Инокулят
Окрашивание по Граму можно проводить при росте любого штамма, выращенного на любом типе среды. Однако для этой группы бактерий (грамположительные кокки) лучше всего проводить анализ роста бактерий в тиогликолятном бульоне при 24-часовой инкубации. При приготовлении мазка из тиогликолятного бульона процедура окрашивания видоизменяется. Мазок нельзя прикрепить к предметному стеклу с помощью серы, его необходимо зафиксировать метанолом.
Реактивы и материалы
1. Кристально-фиолетовый морилка
2. Грамм йода (объединить концентрат йода в граммах с разбавителем йода в граммах)
3. Раствор для обесцвечивания
4. Метанол
5. Слайды
6. Инокуляционная петля
7. Микроскоп с иммерсионным объективом
Процедура
1. Распространение одиночной петли культуры из бульона тиогликолата на предметное стекло микроскопа.Распределите культуру от 1/3 до 1/2 общей площади предметного стекла.
2. Дайте мазку высохнуть на воздухе. Это может занять до 1 часа в зависимости от температуры и влажности в помещении.
3. Покройте весь бактериальный мазок 3 или 4 каплями метанола, чтобы зафиксировать мазок, и дайте ему высохнуть на воздухе. Опять же, это может занять до часа.
4. Покройте бактериальный мазок пятном кристально-фиолетового цвета и дайте постоять 1 минуту. Аккуратно удалите пятно прохладной водопроводной водой и слейте воду с предметного стекла.
5. Покройте мазок граммами йода и дайте постоять 1 минуту. Аккуратно смойте йод водой и слейте воду с предметного стекла.
6. Промойте бактериальный мазок раствором обесцвечивающего средства в течение 10 секунд; обесцвечивание завершено, когда раствор стекает с предметного стекла. Осторожно промойте водой и слейте жидкость с предметного стекла.
7. Покройте бактериальный мазок пятном сафранина и дайте постоять 1 минуту, затем осторожно смойте пятно с предметного стекла.
8. Промокните предметное стекло абсорбирующей бумагой и осмотрите предметное стекло под масляной иммерсионной линзой.
Чтение и интерпретация
Окраска по Граму используется для помощи в дифференцировке грамположительных кокков. Расположение клеток помогает различать роды. Бактерии, которые делятся в произвольных плоскостях, образуют гроздья клеток, напоминающие виноград. Такой тип расположения обычно наблюдается у стафилококков. Бактерии, которые делятся на одной плоскости, образуют пары и в конечном итоге образуют цепочки, если клетки остаются прикрепленными друг к другу. Такой тип клеточной морфологии наблюдается у стрептококков.Бактерии, которые делятся на две плоскости под прямым углом, образуют пакеты из четверок или тетрад. Такое расположение наблюдается у аэрококков. Одна из самых сложных задач, стоящих перед микробиологом, — определить, действительно ли клеточная морфология клеток является кокками или короткими палочками. Поскольку многие лактобациллы представляют собой короткие цепочки грамположительных палочек, их иногда путают со стрептококками. Клинические источники и морфология колоний на пластинах с кровяным агаром лактобацилл также аналогичны стрептококкам, особенно членам стрептококков viridans.При чтении окраски по Граму помните, что клеточная структура никогда не состоит из 100% цепочек, пар, тетрад или кластеров. Микробиолог должен определить наиболее распространенное расположение клеток. Например, для вида Gemella можно наблюдать несколько пар и коротких цепочек, а также тетрады. Если тетрады наблюдаются в большинстве наблюдаемых полей, то деформация делится на две плоскости, и это следует регистрировать.
Ограничения
Молодые культуры дают более характерные наблюдения, чем старые.Более старые культуры могут окрашивать грамотрицательные. Пятна, подвергшиеся воздействию антимикробных реагентов, могут иметь атипичную морфологию и более подвержены обесцвечиванию. Излишне обесцвеченные грамположительные организмы будут казаться грамотрицательными.
Контроль качества
Контроль качества окрашивания по грамму проводят один раз в неделю. Засейте штамм SS910 Streptococcus sanguinis и Escherichia coli 25922 в среде тиогликолятого бульона и инкубируйте в течение ночи при температуре окружающего воздуха 35 ° C. Подготовьте слайд, используя по 1 петле каждой культуры на том же слайде.Слайды могут быть заранее зафиксированы и сохранены. Завершенная процедура должна показать грамположительные кокки в цепочках и грамотрицательные палочки. Запишите результаты в руководство по контролю качества.
Ссылки
Murray, P.R., Baron, E.J., Jorgensen, J.J., Pfaller, M.A., and Yolken, R.H. Manual of Clinical Microbiology, 8th ed. ASM Press: Вашингтон, округ Колумбия, 2003 г.

Начало страницы

Рост при 10 ° C и 45 ° C

Принцип
Рост при 10 ° C и 45 ° C определяется в основной среде сердечного инфузионного бульона и может использоваться в качестве дифференциального теста для каталазонегативных грамположительных кокков.
Инокулят
Ночная культура в бульоне Тодда Хьюитта, инкубированная в течение ночи при 35 ° C, или свежая бактериальная суспензия в бульоне Тодда Хьюитта может использоваться в качестве инокулята. Также можно использовать инокуляционную петлю с культурой
Реактивы и материалы
1. Сердечный бульонная основа, среда Номер Ремела 061030.
Процедура
1. Две пробирки с бульоном засевают одной или двумя колониями или одной-двумя каплями ночной культуры бульона Тодда Хьюитта.
2. Инкубируйте каждую пробирку при соответствующих температурах, 10 ° C и 45 ° C. Для инкубатора 10 ° C достаточно холодильника, который можно отрегулировать для поддержания температуры 10 ° C. Холодильник можно использовать для хранения медиа и других материалов. Для инкубатора на 45 ° C лучше всего подходит баня с горячей водой, настроенная на поддержание температуры 45 ° C.
3. Испытания проводятся минимум 7 дней и до 14 дней в случае медленнорастущих штаммов.
Чтение и интерпретация
Увеличение мутности указывает на рост и положительный результат теста.Изменение цвета не требуется для положительного результата теста.
Ограничения
Убедитесь, что уровень воды в водяной бане 45C выше уровня среды в трубках. Кроме того, крышки средних пробирок должны быть тщательно закрыты.
Контроль качества
Каждая новая партия бульона проверяется на положительные и отрицательные реакции. Enterococcus faecalis штамм SS-1273 используется для положительных (ростовых) реакций как при 10 ° C, так и при 45 ° C. Streptococcus sanguinis штамм SS-910 используется для отрицательных реакций (отсутствие роста) как при 10 ° C, так и при 45 ° C.

Начало страницы

Гемолиз

Принцип
Гемолитическая реакция особенно полезна при дифференцировке стрептококков. Гемолитическую реакцию определяют на агаризованных средах, содержащих 5% крови животных. Наиболее часто используемой базовой средой является соевый агар с триптиказой, а наиболее часто используемая кровь — это овечья кровь. Причина использования соевой основы триптиказы заключается в том, что она поддерживает рост всех бактерий, перечисленных в таблице 2. Можно заменить другие базовые среды, если контрольные штаммы всех родов тестируются на рост.Овечья кровь используется из-за удобства тестирования мазков из зева на бета-гемолитические стрептококки. Овечья кровь не поддерживает рост Haemophilus haemolyticus , который похож на стрептококки на агаре, содержащем кровь кролика, лошади или человека.
Инокулят
Чистая культура на твердой среде.
Реактивы и материалы
1. Чашки с соевым агаром с триптиказой, содержащие 5% овечьей крови, получают от Becton-Dickinson Microbiology Systems, Cockysville Md., товар № 21261.
Процедура
1. Штриховая культура для выделения на чашке TSA с 5% овечьей кровью.
2. Инкубируйте планшет при 35 ° C в CO ₂ в течение 24 часов.
Чтение и интерпретация
Бета-гемолитическая реакция интерпретируется как полное очищение вокруг колонии. Альфа-гемолическая реакция интерпретируется как озеленение вокруг колонии, а гамма-гемолиз интерпретируется как отсутствие изменений в среде, окружающей колонию.Гемолитическая реакция на кровяном агаре сложна и зависит от многих переменных. Для полного объяснения и интерпретации реакций читатель может обратиться к публикации 1977 г., CDC Laboratory Update, Isolation and Identification of Streptococci. Часть I. Сбор, транспортировка и определение гемолиза, Приложение 1. Применение интерпретаций гемолитических реакций на стрептококки, описанных в Обновлении, к другим родам не должно быть проблемой.
Ограничения
Контроль качества
При нормальных условиях эксплуатации качество чашек с кровяным агаром не контролируется в нашей лаборатории, а контролируется компанией Becton-Dickinson Microbiology Systems.Гемолитическая реакция большинства бактерий, представленных в эту лабораторию, известна и идентифицирована с культурой при отправке. Если проблема должна быть выявлена, то для проверки правильности гемолитических реакций используются штаммы для контроля качества. Streptococcus pyogenes штамм SS-103 используется для определения бета-гемолиза, Streptococcus sanguinis штамм SS-910 используется для определения альфа-гемолиза и Streptococcus bovis штамм SS-752 используется для определения отсутствия реакции (ни бета или альфа-гемолиз) на пластинах с триптиказо-соевым 5% агаром с овечьей кровью.Все реакции определены в соответствии с обновлением лаборатории CDC 1977 года, изоляция и идентификация стрептококков. Часть I. Сбор, транспортировка и определение гемолиза (см. Приложение 1).

Начало страницы

Тест на гидролиз гиппурата

Принцип
Некоторые бактерии вырабатывают фермент гиппуратгидролазу, который гидролизует гиппурат натрия с образованием бензойной кислоты и глицина. Добавление хлорида железа к бензойной кислоте приводит к образованию нерастворимого осадка бензоата железа коричневого цвета.
Инокулят
Ночная культура в бульоне Тодда Хьюитта, инкубированная при 35 ° C, или свежая бактериальная суспензия в бульоне Тодда Хьюитта может использоваться в качестве инокулята. Также можно использовать инокулирующую петлю культуры из чашки с кровяным агаром.
Реактивы и материалы
1. Коммерческие поставщики бульона гиппурата.
2. Хорид железа (FeCl ₃) коммерческие поставки. Маркируется как TDA при покупке для bioMereiux
Процедура
1. В бульон гиппурата вносят одну каплю свежей (16-20 ч) культуры бульона Тодда-Хьюитта.
2. Бульон инкубируют до 7 дней или до появления мутного роста при 35 ° C.
3. Затем пробирку с бульоном центрифугируют для осаждения бактерий.
4. Перенесите 0,8 мл прозрачного супернатанта в небольшую прозрачную пробирку (13 x 100).
5. Добавьте 0,2 мл реагента хлорида железа к супернатанту. Хорошо смешать.
Чтение и интерпретация
Сильный осадок, который не исчезает в течение 10 минут, указывает на положительный результат теста. Прозрачная жидкость золотисто-коричневого цвета свидетельствует об отрицательном результате теста.
Ограничения
Рост должен быть мутным перед тестированием. Некоторые привередливые организмы могут плохо расти.
Контроль качества
Группа B Streptococcus штамм SS-620 использовали в качестве положительного контроля, а штамм E. avium SS-817 использовали в качестве отрицательного контроля. Контроль качества выполняется с каждым новым номером партии и каждой партией бульона гиппурата, а также с каждой новой партией и отгрузкой реагента хлорида железа. Результаты теста контроля качества записываются в журнал контроля качества.

Начало страницы

Антиген группы Лэнсфилда

Принцип
Целью определения группового антигена ß-гемолитических стрептококков является определение вида или вида / группы стрептококков, как первоначально описано Ребеккой Лансфилд. Кислотная экстракция используется для удаления серогруппы из клетки.
Инокулят
Ночная культура объемом 50 мл в бульоне Тодда Хьюитта, инкубированная при 35 ° C.
Реактивы и материалы
1. 50 мл культуры
2. Капиллярная трубка 50 мкл
3. м-крезол фиолетовый
4. Пробирка 13 X 100 мм
5. баня кипящая
6. центрифуга
7. флакон 1 мл
8. Реагенты серогруппировки
Процедура
1. Центрифугируйте клетки за 20 минут при 2000 об / мин, чтобы получить осадок клеток.
2. Аспирируйте супернатант.
3. Добавьте 2-3 капли м-крезола пурпурного. По каплям добавляют 0,1 н. HCl до тех пор, пока цвет не изменится на розовый. Вихрь.
4. Поместите пробирку в кипящую водяную баню на 10 минут.
5. После охлаждения перенесите содержимое в пробирку 13 X100.
6. Центрифуга при 2800 об / мин в течение 10 минут для удаления осадка.
7. Перенос в чистую пробирку 13 х 100 мм
8. По каплям добавляют 0,5 н. NaOH до пурпурного цвета.
9. Центрифуга при 2800 об / мин в течение 10 минут для удаления осадка.
10. Перелейте во флакон объемом 1 мл с завинчивающейся крышкой.
11. Набор капиллярных пробирок с добавлением примерно 1 см реагента для определения серологических групп и 1 см экстракта. Будьте осторожны, чтобы между ними не было места или пузырей!
12. Закройте конец пластилином и установите в стойку для глины.
13. Наблюдать до 30 минут.
Чтение и интерпретация
Определенная линия или зона осадков, образующаяся между ними, считается положительной.
Ограничения
Группа D иногда дает слабые реакции.
Контроль качества
Контроль качества выполняется при приготовлении каждой партии реагента для определения серогруппы.

Начало страницы

Лейцинаминопептидаза (LAP)

Принцип
Некоторые бактерии продуцируют лейцинаминопептидазу, которая гидролизует субстрат лейцин-β-нафтиламид с образованием β-нафтиламина. Цвет от розового до красного образуется при добавлении п-диметиламиноциннамальдегида (реагент PYR) к β-нафтиламину.
Inoculum
Штаммы выращивают на чашках с кровяным агаром в течение ночи при 35 ° C в CO. ₂ для большинства грамположительных бактерий.Для более требовательных родов, таких как гемеллы, аллоиококки и гелькококки, может потребоваться инкубация более 1 дня. Тестируемые штаммы выращивают на чашке с кровяным агаром до тех пор, пока не будет замечен рост, достаточный для значительного засева дисков.
Реагенты и материалы
Диск LAP (Remel)
Реагент PYR
Петли
Деионизированная стерильная вода
Процедура
Процедура, которая используется в лаборатории Streptococcus , является измененной из вкладыша в упаковке.Тест PYR обычно выполняется одновременно.
1. Поместите диски на пластину с кровяным агаром в области небольшого роста или его отсутствия или на предметном стекле. Влага от пластины обычно достаточна для регидратации диска. Если диск помещается на предметное стекло, то добавляется крошечная капля стерильной деионизированной воды. (НЕ ПЕРЕНОСЫВАЙТЕ ДИСК). Диск LAP удобно разместить слева (L = LAP).
2. Используя петлю или деревянную палочку, сильно засеять диски. Для получения удовлетворительных результатов необходимо использование двух или более циклов культивирования.
3. Оставьте планшеты с дисками на столе при комнатной температуре на 10 минут.
4. Добавьте реагент обнаружения и считайте через 3 минуты.
Чтение и интерпретация
Появление красного цвета в течение 3 минут является положительным. Нет изменений в цвете или желтый цвет отрицательный. Цвет проявляется сразу. Отменить тест через 10 минут.
Ограничения
При использовании слишком малого количества посевного материала могут возникнуть ложноотрицательные реакции.
Контроль качества
Каждая партия и партия LAP-дисков проверяются на наличие положительных и отрицательных реакций. Enterococcus faecalis штамм SS-498 использовали для положительной реакции, а Aerococcus viridans штамм SS-1251 (ATCC-11563) использовали для отрицательной реакции.

Начало страницы

Тест с лакмусовым молоком

Принцип
Целью лакмусового теста молока является определение подкисления и сгустка молока в этом тесте. Эти тесты помогают дифференцировать виды Leuconostoc.
Инокулят
Ночная культура в бульоне Тодда Хьюитта, инкубированная при 35 ° C, или свежая бактериальная суспензия в бульоне Тодда Хьюитта может использоваться в качестве инокулята.Также можно использовать инокуляционную петлю с культурой.
Реактивы и материалы
Лакмусовое молоко получают от коммерческих поставщиков с использованием их контроля качества.
Процедура
1. Пробирки, содержащие лакмусовое молоко, засевают одной каплей ночной культуры бульона Тодда-Хьюитта.
2. Инкубируйте при температуре 35 ° C до 7 дней на воздухе. Некоторые привередливые напряжения могут удерживаться в течение 14 дней.
Показания и интерпретация
Пробирки проверяются на предмет изменения цвета.Трубки начинают окрашиваться в голубой цвет. Об образовании кислоты свидетельствует сначала розовый цвет, а затем он становится белым при продолжении инкубации. Об отрицательной реакции свидетельствует отсутствие изменения цвета. Пробирки также исследуют на предмет сгустка или затвердевания содержимого пробирки. Частичное или полное затвердевание содержимого пробирки свидетельствует о положительной реакции. Об отрицательной реакции свидетельствует отсутствие изменений консистенции содержимого пробирки.
Ограничения
Контроль качества
Enterococcus faecalis SS-1273 используется в качестве положительного контроля, а E.hirae , штамм SS-1227, использовали в качестве отрицательного контроля. Контроль качества выполняется с каждым новым номером партии и каждой отгрузкой. Результаты проверки качества записываются в руководстве по контролю качества.

Начало страницы

Тест на подвижность

Принцип
Способность бактерий перемещаться через полутвердую среду полезна для дифференциации бактерий. Этот тест особенно полезен для дифференциации энтерококков.
Inoculum
Штаммы выращивают на чашках с кровяным агаром в течение ночи при 35 ° C в CO. ₂ для большинства грамположительных бактерий.Для более требовательных родов, таких как гемеллы, аллоиококки и гелькококки, может потребоваться инкубация более 1 дня.
Реактивы и материалы
1. среда для определения подвижности (Remel, номер 061408)
2. игла посевная
Процедура
1. В среду засевают посевной иглой, а не петлей. Нанесите колонию на конец иглы с чашки с агаром.
2. Игла вставляется в центр среды в пробирке примерно на один дюйм.
3. Засеянную пробирку инкубируют при 30 ° C на воздухе и инкубируют до тех пор, пока не будет наблюдаться хороший рост, в большинстве случаев достаточно от 24 до 48 часов.
Чтение и интерпретация
Штаммы, которые являются подвижными, будут расти наружу к краю пробирки и вниз к ее дну. Отрицательные деформации покажут рост только на линии укола.
Ограничения
Не устанавливайте тест на подвижность при 37 ° C. Некоторые штаммы становятся неподвижными при 37 ° C, но остаются подвижными при температуре от 25 ° C до 30 ° C.
Контроль качества
Enterococcus gallinarium SS-1228 используется в качестве положительного контроля, а штамм E. faecalis SS-1273 используется в качестве отрицательного контроля. Контроль качества выполняется с каждым новым номером партии и каждой отгрузкой.

Начало страницы

Тест на толерантность к 6,5% NaCl

Принцип
Тесты на переносимость могут использоваться для дифференциации микроорганизмов. Некоторые бактерии могут расти в 6,5% NaCl, а другие подавляются этими концентрациями.Рост в бульоне, содержащем 6,5% NaCl, определяют на основе бульона для инфузии сердца с добавлением еще 6% NaCl. Основа сердечного настоя содержит 0,5% NaCl. Для облегчения чтения мы добавляем 0,5% -ный индикатор декстрозы и бромкрезоловый пурпурный индикатор.
Инокулят
Свежий инокулят, выращиваемый в бульоне Тодда Хьюитта, является предпочтительным. В качестве альтернативы можно использовать небольшую петлю роста из чашки с кровяным агаром.
Реагенты и материалы
Бульон с 6,5% NaCl 5 мл бульона Тодда Хьюитта Бульон с 6,5% NaCl приготовлен Центральной лабораторией CDC, формула No.1707. Этот состав идентичен модифицированному бульону с 6,5% NaCl, описанному в: Facklam, R. 1973. Сравнение нескольких лабораторных сред для предположительной идентификации энтерококков и стрептококков группы D. Прил. Microbiol. 26: 138-145.
Процедура
1. Одна или две колонии или одна или две капли ночной бульонной культуры засеваются в бульон, содержащий 6,5% NaCl.
2. Инокулированный бульон инкубируют при 37 ° C на воздухе в течение недели или более в зависимости от характеристик роста тестируемого штамма.Если для получения достаточного посевного материала требовалось 2 или 3 дня, то тест на толерантность к NaCl следует инкубировать от 10 до 14 дней. В некоторых случаях (большинство энтерококков) тест дает положительный результат после инкубации в течение ночи.
Чтение и интерпретация
Когда большинство штаммов растет, декстроза ферментируется, и цвет бульона меняется с пурпурного на желтый. Однако изменение цвета не требуется для положительного результата теста. Если наблюдается явное увеличение мутности, которое указывает на рост, без изменения цвета, это также считается положительным результатом.
Ограничения
Для определения толерантности энтерококков и стрептококков viridans к NaCl использовались другие базовые среды (инфузия мозга и сердца и триптиказа сои), но эти основы не тестировались с другими видами. Контроль качества.
Контроль качества
Каждая новая партия сред, подготовленная центральной сервисной лабораторией CDC, проверяется на наличие положительных (рост) и отрицательных (отсутствие роста) реакций. Enterococcus faecalis штамм SS-1273 и Streptococcus sanguinis штамм SS-910 используются для положительных и отрицательных реакций соответственно.

Начало страницы

Тест оптохина

Принцип
Цель оптохинового теста — подтвердить идентификацию S. pneumonia e до серотипирования и помочь дифференцировать S. pneumonia e от стрептококков viridans во время надзорных исследований.
Инокулят
Изолированные альфа-гемолитические колонии, предположительно пневмококки.
Реактивы и материалы
1. дисков optochin AP @, приобретенных у Becton Dickinson Microbiology Systems, Кокисвилл, Мэриленд.
2. пластин с кровяным агаром
Процедура
1. Перенесено изолированную колонию и полосу на четверть чашки с кровяным агаром
2. Поместите оптохиновый диск «P» в верхнюю треть посевного материала. Коснитесь диска, чтобы убедиться, что он остается на носителе после того, как пластина перевернута.
3. Планшет инкубируют в течение ночи при 35–37 ° C в сосуде для тушения свечей или инкубаторе с диоксидом углерода.
Считывание и интерпретация
Если используется диск диаметром 6 мм, зона ингибирования диаметром не менее 14 мм считается положительной для идентификации пневмококков.Зона подавления от 6 до 14 мм в диаметре считается сомнительной для идентификации пневмококков, поэтому следует провести тест на растворимость в желчи. Штаммы, растворимые в желчи с зонами подавления оптохинов от 6 до 14 мм, считаются пневмококками, а штаммы, не растворимые в желчи с такими же размерами зон, не считаются пневмококками.
Ограничения
Культуры не растут так хорошо в нормальной атмосфере, и большие зоны ингибирования могут вызвать неправильную идентификацию.
Контроль качества
Каждая новая партия и партия дисков optochin AP @ проверяется на наличие положительных и отрицательных реакций. S. pneumonia, штамм е АТСС-49619 ингибируется оптохином (положительная реакция), а штамм S. mitis SS-429 не ингибируется оптохином (отрицательная реакция). Результаты заносятся в журнал контроля качества.

Начало страницы

Тест на пигментацию

Принцип
Некоторые бактерии производят пигмент. Цель теста на пигментацию — помочь идентифицировать E.casseliflavus , E. mundtii , E. pallens , E. gilvus и E. sulfureus . Эти энтерококки производят желтый пигмент, который можно обнаружить на нескольких различных средах.
Инокулят
Неизвестный штамм Enterococcus выращивают на чашке с агаром с триптиказо-соевым 5% -ным агаром с овечьей кровью в течение 24 часов в нормальной атмосфере при 35 ° C.
Реактивы и материалы
1. ватный тампон
Процедура
1. С помощью ватной палочки возьмите бактериальный мазок размером 50 мм.
2. Осмотрите тампон и мазок на наличие ярко-желтого цвета.
Чтение и интерпретация
Цвет от бледного до ярко-желтого интерпретируется как положительный. Кремовый, белый или серый цвет — отрицательный.
Ограничения
Тест следует повторить на культуре еще раз через 48 часов инкубации, если есть какие-либо сомнения относительно результатов через 24 часа.
Контроль качества
E. casseliflavus штамм SS-1229 используется для положительного контроля, а штамм E.faecalis штамм SS-1273 используют в качестве отрицательного контроля для определения пигментации.

Начало страницы

Тест на потребность в пиридоксале (витамин B6)

Принцип
Вариантные по питанию стрептококки ( Abiotrophia и Granulicatella ) обычно очень требовательны и будут расти только на среде с добавками или обогащенном шоколадном агаре. Эти штаммы нуждаются в пиридоксале для роста, в то время как не-NVS — нет. Конечная концентрация в бульоне 0.001% пиридоксаля поддержит рост NVS. Альтернативой выполнению теста на потребность в пиридоксале является спутниковый тест.
Инокулят
Культуры обычно получают на скошенных шоколадных агарах.
Реактивы и материалы
1. 0,01% пиридоксаль *
2. 2-TSA-пластина с агаром с овечьей кровью
* 0,01% раствор пиридоксаля удобно хранить в лаборатории. Этот раствор готовят на очищенной воде и стерилизуют фильтрованием. Аликвоту 10 мл разливают в стерильные пробирки.Этот 0,01% раствор следует хранить замороженным при -20 ° C. Используемую аликвоту можно хранить при 4 ° C.
Процедура
1. Добавьте каплю 0,01% раствора на поверхность одной из чашек с агаром с овечьей кровью TSA.
2. Засейте обе чашки предполагаемым штаммом NVS.
3. Инкубируйте при 35 ° C в CO. ₂ от 24 до 72 часов.
Чтение и интерпретация
Если рост наблюдается на чашке, содержащей пиридоксаль, а не на чашке без пиридоксаля, штамм является NVS.
Ограничения
Контроль качества
Нет никаких указаний по контролю качества реагентов или сред. Каждую партию пиридоксаля можно протестировать на предмет поддержки роста известного штамма NVS.

Начало страницы

Тест пирролидонилариламидазы (PYR)

Принцип
Некоторые бактерии продуцируют пирролидонилариламидазу, которая гидролизует субстрат L-пирролидонил-β-нафтиламид с образованием β-нафтиламина. Цвет от розового до красного образуется при добавлении п-диметиламиноциннам-альдегида (реагент PYR) к β-нафтиламину.
Inoculum
Штаммы выращивают на чашках с кровяным агаром в течение ночи при 35 ° C в CO ₂. Для более требовательных родов, таких как Gemella e, аллоиококки и гелькококки, может потребоваться инкубация более 1 дня. Тестируемые штаммы выращивают на чашке с кровяным агаром до тех пор, пока не будет замечен рост, достаточный для значительного засева дисков.
Реагенты и материалы
Диск PYR (Remel)
Реагент PYR
Петли
Деионизированная стерильная вода
Процедура
Процедура, которая используется в лаборатории Streptococcus , является измененной из вкладыша в упаковке.Тест LAP обычно выполняется одновременно.
1. Поместите диски на пластину с кровяным агаром в области небольшого роста или его отсутствия или на предметном стекле. Влага от пластины обычно достаточна для регидратации диска. Если диск помещается на предметное стекло, то добавляется крошечная капля стерильной деионизированной воды. (НЕ ПЕРЕНОСЫВАЙТЕ ДИСК).
2. Используя петлю или деревянную палочку, сильно засеять диски. Для получения удовлетворительных результатов необходимо использование двух или более циклов культивирования.
3. Оставьте планшеты с дисками на столе при комнатной температуре на 10 минут.
4. Добавьте реагент обнаружения и считайте через 3 минуты.
Чтение и интерпретация
Появление красного цвета в течение 3 минут является положительным. Нет изменений в цвете или желтый цвет отрицательный. Цвет проявляется сразу. Отменить тест через 10 минут.
Ограничения
При использовании слишком малого количества посевного материала могут возникнуть ложноотрицательные реакции.
Контроль качества
Каждая партия и партия дисков PYR проверяются на наличие положительных и отрицательных реакций. Enterococcus faecalis штамм SS-498 использовали для положительной реакции, а Streptococcus sanguinis штамм SS-910 использовали для отрицательной реакции.

Начало страницы

Тест на использование пирувата

Принцип
Некоторые бактерии обладают способностью утилизировать пируват, что приводит к изменению pH. Бромтимоловый синий добавляется в среду в качестве индикатора, который приводит к изменению цвета с сине-зеленого на желтый.
Инокулят
Свежий инокулят, выращенный в бульоне Тодда Хьюитта, является предпочтительным.В качестве альтернативы можно использовать небольшую петлю роста из чашки с кровяным агаром.
Реактивы и материалы
Пируватный бульон (Центральная вспомогательная лаборатория CDC, формула № 1722)
Процедура
1. Засейте пируватный бульон одной каплей ночной культуры бульона Тодда-Хьюитта неизвестного штамма.
2. Инкубируйте пробирку при 35 ° C в течение 7 дней на воздухе. Инкубация привередливых штаммов составляет 14 дней.
Чтение и интерпретация
Положительная реакция обозначается появлением желтого цвета.Если бульон остается зеленым или зеленовато-желтым, результат теста отрицательный. Желтый цвет с оттенком зеленого обычно является положительной реакцией.
Ограничения
Контроль качества
Контрольные тесты проводятся для каждой новой партии приготовленной среды. E. faecalis штамм SS-1273 и S. sanguinis штамм SS-910 используются в качестве положительного и отрицательного контролей соответственно. Результаты заносятся в журнал контроля качества.

Начало страницы

Спутниковый тест (SAT)

Принцип
Вариантные по питанию стрептококки ( Abiotrophia и Granulicatella ) обычно очень требовательны и будут расти только на среде с добавками или обогащенном шоколадном агаре.Цель теста SAT — определить, является ли неизвестный штамм стрептококков разновидностью питательных веществ стрептококками (NVS). Этим штаммам для роста необходим пиридоксаль. Рост Staphylococcus aureus на чашке с агаром с овечьей кровью TSA высвобождает эти факторы, позволяя расти NVS. Альтернативой выполнению теста SAT является проверка потребности в витамине B6 (пиридоксале).
Инокулят
Культуры обычно получают на скошенных шоколадных агарах.
Реактивы и материалы
1. Золотистый стафилококк ATCC-25923
2. TSA-пластина с агаром с овечьей кровью
Процедура
1. Нанесите штриховку представленной культуры по всей поверхности чашки с агаром TSA-овечьей крови с помощью посевной петли.
2. Затем наносят одиночную полоску Staphylococcus aureus ATCC-25923 через середину чашки с агаром.
3. Инкубируйте планшет в сосуде для тушения свечей или инкубаторе с CO2 в течение 24 часов или более.
Чтение и интерпретация
Если штамм представляет собой NVS, рост будет появляться только рядом с полосой стафилококка шириной около 2–5 мм. Стрептококки, не являющиеся NVS, будут расти по всей поверхности чашки с агаром.
Ограничения
Контроль качества
Нет никаких указаний по контролю качества для тестирования среды или штамма Staphylococcus для теста на сатилитизм.

Начало страницы

Тест гидролиза крахмала

Принцип
Некоторые бактерии способны гидролизовать крахмал на агаре с добавлением крахмала. Когда в крахмал добавляют йод, он становится темно-синевато-черным. Если крахмал был гидролизован, значит, он не может реагировать с йодом, и область вокруг роста бактерий остается чистой. Этот тест можно использовать для дифференциации некоторых бактерий.
Inoculum
Штаммы выращивают на чашках с кровяным агаром в течение ночи при 35 ° C в CO ₂.Для более требовательных родов, таких как Gemella e, аллоиококки и гелькококки, может потребоваться инкубация более 1 дня. Каплю бактериальной суспензии бульона Тодда Хьюитта также можно использовать для нанесения штрихов на чашку.
Реактивы и материалы
1. Двухпроцентный крахмальный агар (CDC Central Services Laboratory, формула № 1710)
2. Грамм йода
Процедура
1. Засейте чашку крахмального агара одной толстой полосой свежей культуры или нанесите каплю бульонной культуры на чашку.
2. Инкубируйте планшет в CO ₂ при 35 ° C в течение 48 часов. Некоторым штаммам может потребоваться более длительная инкубация для достаточного роста.
3. После инкубации залейте планшет йодом по Граму.
Чтение и интерпретация
Чистая зона вокруг роста является положительным тестом на то, что штамм гидролизовал крахмал. Цвет агара от темно-фиолетового до черного или голубоватого указывает на то, что крахмал не гидролизован, и, следовательно, результат отрицательный. При отрицательных тестах глубокая окраска агара развивается вплоть до роста.
Ограничения
Некоторые привередливые сорта плохо растут.
Контроль качества
Каждая новая партия крахмального агара проходит контроль качества. S. bovis штамм SS-1224 использовали для положительного контроля, а E. avium штамм SS-817 использовали для отрицательного контроля.

Начало страницы

Образование слизи 5% сахарозного агара

Принцип
Целью выращивания неизвестных штаммов на агаре, содержащем 5% сахарозы, является определение способности штаммов образовывать внеклеточные полисахариды (леваны или декстраны) на агаре.
Inoculum
Штаммы выращивают на чашках с кровяным агаром в течение ночи при 35 ° C в CO ₂. Для более требовательных родов, таких как Gemella e, аллоиококки и гелькококки, может потребоваться инкубация более 1 дня. Каплю бактериальной суспензии бульона Тодда Хьюитта также можно использовать для нанесения штрихов на чашку.
Реагенты и материалы
Чашки с 5% сахарозным агаром (Центральная лаборатория центра контроля заболеваний, формула № 1714)
Процедура
1. Засейте 5% сахарозный агар свежим посевным материалом и штрихом для изолированных колоний.
2. Инкубируйте чашку с агаром в CO ₂ при 35 ° C в течение 48 часов. Некоторым привередливым сортам может потребоваться более длительная инкубация для роста.
3. Осмотрите пластину на предмет леванов и декстранов. Петлю используют для соскабливания колоний на предмет вязкости или прилипания.
Чтение и интерпретация
Некоторые бактерии производят леван в виде внеклеточного полисахарида. Колонии выглядят очень слизистыми, мукоидными и жидкими или в виде больших смолистых капель на агаре. Некоторые бактерии могут продуцировать декстраны, в которых колонии сухие и прилипают к планшету.Отрицательной реакцией является невозможность увидеть внеклеточный материал на 5% сахарозном агаре при визуальном осмотре или прикреплении петли.
Ограничения
Контроль качества
Тесты контроля качества проводятся для каждой партии 5% сахарозного агара. Следующие штаммы используются для контроля качества: Leuconostoc mesenteroides штамм SS-1238 (положительный по продукции слизи-леваны), Streptococcus sanguinis SS910 (положительный результат по прилипанию к декстранам) и Enterococcus faecalis , штамм SS-1273 (отрицательный). для леванов и декстранов).Результаты заносятся в журнал контроля качества.

Начало страницы

5% сахарозный бульон

Принцип
Целью выращивания неизвестных штаммов на агаре, содержащем 5% сахарозы, является определение способности штаммов образовывать внеклеточные полисахариды (леваны или декстраны) в бульоне.
Inoculum
Штаммы выращивают на чашках с кровяным агаром в течение ночи при 35 ° C в CO ₂. Для более требовательных родов, таких как Gemella e, аллоиококки и гелькококки, может потребоваться инкубация более 1 дня.Каплю бактериальной суспензии бульона Тодда Хьюитта также можно использовать для нанесения штрихов на чашку.
Реактивы и материалы
Пробирки с 5% сахарозным бульоном (Центральная сервисная лаборатория CDC)
Процедура
1. Засейте 5% сахарозный бульон свежим посевным материалом.
2. Инкубируйте бульон при 35 ° C в течение 48 часов или дольше. Некоторым привередливым сортам может потребоваться более длительная инкубация для роста.
3. Проверьте бульон на вязкость или нажмите кнопку геля.
Чтение и интерпретация
Некоторые бактерии производят леван в виде внеклеточного полисахарида.Бульон выглядит очень густым и липким. Некоторые бактерии могут продуцировать декстраны, в которых гелевая кнопка прилипает к дну или бокам пробирки. Отрицательной реакцией является отсутствие визуального контроля вязкости или прилипания 5% сахарозного бульона. Наблюдается только увеличение мутности.
Ограничения
Контроль качества
Тесты контроля качества проводятся для каждой партии, содержащей 5% сахарозы. Для контроля качества используются следующие штаммы: Leuconostoc mesenteroides штамм SS-1238 (положительный результат на образование слизи — леваны), Streptococcus sanguinis SS910 (положительный результат на липкую гелевую кнопку декстранов) и Enterococcus faecalis штамм SS-1273 (отрицательно для леванов и декстранов).Результаты заносятся в журнал контроля качества.

Начало страницы

Испытание на толерантность к теллуриту

Принцип
Толерантность к теллуриту определяется на агаровой среде, содержащей 0,04% теллурита калия. На этой среде будет расти очень мало каталазо-отрицательных грамположительных кокков. Основная цель теста на толерантность к теллуриту — помочь дифференцировать E. faecalis и E. faecium и другие энтерококки.
Inoculum
Штаммы выращивают на чашках с кровяным агаром в течение ночи при 35 ° C в CO ₂.Для более требовательных родов, таких как Gemella e, аллоиококки и гелькококки, может потребоваться инкубация более 1 дня. Капля бактериальной суспензии бульона Тодда Хьюитта также может быть использована для нанесения штрихов на скос.
Реактивы и материалы
1. Скошенные слои теллуритового агара (0,04% теллурита калия, Центральная сервисная лаборатория CDC, формула № 9358)
Процедура
1. Засейте скос одной каплей свежей (18-24 ч) бульонной культуры Тодда-Хьюитта или полной петлей бактерий из свежей чашки.
2. Инкубируйте при 35 ° C в течение 7 дней на воздухе.
Чтение и интерпретация
Допуск (положительный результат) указывается всякий раз, когда на поверхности образуются черные колонии. Типичные и вариантные штаммы E. faecalis обычно образуют черные колонии (положительная толерантность) через 48 часов инкубации. Некоторые штаммы E. faecium могут образовывать серые колонии (отрицательная реакция), но большинство красителей не растут на теллуритовой среде. Отрицательный результат — небольшое почернение в нижней части ската.
Ограничения
Контроль качества
Проверки качества проводятся для каждой новой партии поставляемой среды. E. faecalis штамм SS-1273 и S. sanguinis штамм SS-910 используются в качестве положительного и отрицательного контролей соответственно. Результаты заносятся в журнал контроля качества.

Начало страницы

Гидролиз мочевины

Принцип
Мочевина является источником азота для бактерий, продуцирующих уреазу. В результате изменения pH индикатор, феноловый красный, меняет цвет с желтого на красный на розово-красный.Тест на уреазу особенно полезен при идентификации Streptococcus salivarius .
Inoculum
Штаммы выращивают на чашках с кровяным агаром в течение ночи при 35 ° C в CO ₂. Для более требовательных родов, таких как гемеллы, аллоиококки и гелькококки, может потребоваться инкубация более 1 дня. Капля бактериальной суспензии бульона Тодда Хьюитта также может быть использована для нанесения штрихов на скос.
Реактивы и материалы
1. Агар мочевины Кристенсена (Ремел)
Процедура
1. Засейте косой слой петлей или каплей свежей культуры.
2. Инкубируют при 35 ° C до 7 дней на воздухе. Прихотливые штаммы инкубируют 14 суток.
Чтение и интерпретация
Положительная реакция регистрируется, когда на скошенной поверхности агара появляется светло- или темно-розовый цвет. Желтый цвет или отсутствие изменений в соломенной окраске указывает на отрицательный результат теста.
Ограничения
Ложноположительные результаты могут быть вызваны гидролизом белка, но этого не наблюдалось с Streptococcus .
Контроль качества
Контроль качества осуществляется для каждой партии и отгрузки. S. salivarius , SS-908 и E. avium , SS-817 используются для положительного и отрицательного контролей соответственно.

Начало страницы

Тест на ванкомицин

Принцип
Тест на ванкомицин проводится аналогично тесту на чувствительность к бацитрацину. Устойчивость к ванкомицину может использоваться для дифференциации некоторых каталазонегативных грамположительных родов.
Inoculum
Штаммы выращивают на чашках с кровяным агаром в течение ночи при 35 ° C в CO ₂.Для более требовательных родов, таких как Gemella e, аллоиококки и гелькококки, может потребоваться инкубация более 1 дня.
Реактивы и материалы
1. Диск ванкомицина 30 мкг (Becton Dickinson Microbiology Systems, Cockysville Md. Продукт № 31353) Диски хранят в соответствии с инструкциями производителя.
2. пластинки с триптиказой соевым агаром с овечьей кровью
Процедура
1. Перенесите несколько колоний рассматриваемого штамма на половину чашки с кровяным агаром и сильно стейк.
2. Поместите диск для определения чувствительности к ванкомицину (30 мкг) в тяжелую часть полосы.
3. Инкубировали планшет в атмосфере с усиленным CO ₂ при 37 ° C в течение ночи. Некоторым штаммам (аллоиококкам, гемеллам, хелькококкам) может потребоваться 48 часов или более, чтобы продемонстрировать достаточный рост для интерпретации теста.
Чтение и интерпретация
Любая зона задержки роста считается положительной (чувствительной). Тест интерпретируется как устойчивый (отрицательный) только в том случае, если есть рост вплоть до края диска.Это не тест на чувствительность, это тест на чувствительность для идентификации.
Ограничения
Достаточное количество посевного материала требуется для точного анализа.
Контроль качества
Каждая новая партия и партия дисков с ванкомицином тестируются на положительные (чувствительные) и отрицательные (резистентные) реакции. Streptococcus bovis SS1224 использовали в качестве положительной (чувствительной) реакции, а Leuconostoc mesenteroides штамм SS-1238 (ATCC-8293) использовали для отрицательной (резистентной) реакции.Результаты заносятся в журнал контроля качества.

Начало страницы

Тест Фогеса-Проскауэра (VP)

Принцип
Модификация Колбенца теста Фогеса-Проскауэра (VP) может использоваться для определения продукции ацетилметилкарбинола. Тестовые реакции используются для дифференциации бактерий. Цель теста VP — помочь в идентификации штаммов ß-гемолитических стрептококков Streptococcus anginosus (таблица 2). Тест VP также может использоваться для помощи в дифференциации стрептококков viridans на виды / группы (таблица 6).
Инокулят
Свежий инокулят, выращенный в бульоне Тодда Хьюитта, является предпочтительным. В качестве альтернативы можно использовать небольшую петлю роста из чашки с кровяным агаром.
Реактивы и материалы
1. Тест-бульон Voges-Proskauer (VP) (Remel)
2. 40% КОН (bioMerieux)
3. альфа-нафтол (bioMerieux)
Процедура
1. Засейте пробирку с бульоном VP одной каплей или петлей свежего посевного материала.
2. Инкубируйте 24–48 часов при 35 ° C на воздухе или до тех пор, пока не будет наблюдаться мутный рост.
3. Перенести 0,5 мл в стеклянную пробирку 13X100.
4. Добавьте двенадцать капель альфа-нафтола и 4 капли 40% КОН.
5. Тщательно перемешайте или встряхните пробирки и наблюдайте в течение 30 минут. Пробирку необходимо энергично встряхнуть несколько раз в течение 30 минут.
Чтение и интерпретация
Положительная реакция красного цвета обычно наблюдается в течение 30 минут. Для идентификации стрептококков слабые реакции (розового или ржавого цвета) интерпретируются как положительные.
Ограничения
Контроль качества
Каждая партия и отгрузка среды и реагентов проходят испытания. Enterococcus faecalis SS1273 использовали в качестве положительного контроля, а Streptococcus sanguinis SS910 использовали в качестве отрицательного контроля. Результаты заносятся в журнал контроля качества.

Начало страницы

Streptococcus Bacteria — Классификация, форма, инфекция и окраска по Граму

Классификация, форма, инфекция и пятно по Граму

Обзор

Бактерии Streptococcus грамположительны и обычно имеют сферическую форму.Они обычно обнаруживаются в слизистой оболочке рта и дыхательных путей и т. Д., Где они были связаны с рядом заболеваний и инфекций, включая сепсис, пневмонию и фарингит.

Классификация

Царство: бактерии — Как представители царства бактерий, стрептококки являются прокариотами и, следовательно, не имеют мембраносвязанных органелл. Они также содержат слой пептидогликана в клеточной стенке и могут быть найдены в различных экологических средах обитания.

Подкоролевство: Posibacteria — Бактерии Streptococcus также классифицируются в подкоролевстве Posibacteria, которое в основном состоит из грамположительных бактерий.

Тип: Firmicutes — Firmumicutes. который состоит из грамположительных бактерий (некоторые члены, такие как Selenomonas, могут иметь характеристики, связанные с грамотрицательными бактериями). Наряду с рядом других бактерий представители этого типа являются частью здоровой микробиоты кишечника.

Класс: Бациллы — Бациллы — это класс бактерий, характеризующийся низким содержанием G + C. Эта группа состоит из грамположительных бактерий и делится на два основных отряда, включая Bacillales и Lactobacillales. Хотя название Bacilli предполагает, что члены этой группы имеют форму палочки, стоит отметить, что не все организмы в этом классе имеют форму палочки (например, стрептококки и стафилококки).

Заказ: Lactobacillales — Lactobacillales — это заказ под классом Bacilli, который состоит из палочковидных и сферических бактерий.Это грамположительные бактерии. Они характеризуются низким содержанием G + C и часто называются молочнокислыми бактериями

Семейство: Streptococcaceae — Члены семейства Streptococcaceae, среди прочего, включают бактерии Streptococcus и Lactococcus. Это грамположительные сферические бактерии, которые растут цепочками или парами. Также было показано, что они являются факультативными анаэробами, сбраживающими углеводы.

Род: Streptococcus : Характеристики этой группы бактерий подробно обсуждаются ниже.

Некоторые примеры бактерий Streptococcius включают:

Streptococcus pneumoniae
Streptococcus mutans
Streptococcus bovis
Streptococcus salivarius
Streptococcus salivarius
Streptococcus salivarius

Форма

Как и многие другие бактерии, бактерии Streptococcus имеют небольшой размер, от 0,5 до 2,0 микрометров в диаметре.Однако здесь большинство видов имеют размер менее 2 мкм. Что касается формы, стрептококки могут иметь сферическую или яйцевидную форму. Если смотреть под микроскопом, стрептококки встречаются цепочками (напоминающими нитку бус) или парами.

Как и в случае с другими бактериями, общая форма стрептококков определяется способом их размножения. Предполагается, что в случае Streptococcus pneumoniae синтез пептидогликана во время размножения происходит через периферическую и перегородочную системы.Это отличается от более сферических видов, в которых задействована только перегородочная система.

В случае Streptococcus pneumoniae деление характеризуется ростом внутрь поперечной стенки, расположенной на экваторе клетки. На этой стадии деления микроскопические исследования выявили полосу на стенке, также известную как экваториальное кольцо в области деления, с последующим образованием двух новых экваториальных колец по мере того, как новый пептидогликан постепенно вставляется между этими кольцами. Это позволяет периферическому росту продолжаться до тех пор, пока сформированное внутреннее полушарие не достигнет размера старых.

За окончанием периферического роста следует перегородочный синтез пептидогликана. Здесь пептидогликангидролазы участвуют в расщеплении перегородки, тем самым разделяя дочерние клетки.

В отличие от микрококков и деинококков, которые представляют собой действительно круглые клетки, бактерии стрептококка могут выглядеть удлиненными (яйцевидными). Согласно исследованиям, это также связано с тем, что их разделение происходит вдоль последовательно параллельной плоскости (которая перпендикулярна их длинной оси).

Это отличается от таких действительно круглых кокков, как микрококки и стафилококки, где деление может происходить в двух или трех чередующихся перпендикулярных плоскостях.Следовательно, клеточная стенка, наряду с плоскостью деления, играет роль в общей форме бактериальных клеток.

Подробнее о Cell Division.

* Было показано, что в зависимости от вида длина цепей бактерий Streptococcus играет важную роль в вирулентности (например, исследования показали, что инвазия бактерий в Streptococcus pneumoniae напрямую связана с длиной цепи).

* На длину и природу образованной цепи (бактериальной цепи) влияет ряд факторов.Например, в то время как нормальные короткие / длинные цепи образуются in vivo, было показано, что культуры продуцируют кластерные цепи.

Бактериальная инфекция, вызванная стрептококком

За исключением нескольких видов (например, группы молочной кислоты, которая обычно ассоциируется с растительной средой и молочными продуктами), большинство бактерий Streptococcus обитают в различных частях тела человека и животных.

На основании ряда исследований, пищевые потребности этих организмов удовлетворяются их хозяевами.По этой причине они, как правило, преуспевают в отношениях с животными-хозяевами. Из-за своих родственных связей с некоторыми животными и людьми стрептококки широко распространены по всему миру (везде, где существуют их хозяева).

В своих отношениях со своими хозяевами стрептококки существуют либо как комменсалы, либо как паразиты. Как комменсалы, они могут жить в гармонии с хозяином (где они получают питание от хозяина, не причиняя никакого вреда).

Как паразиты, они причиняют вред хозяину, вызывая болезни.В зависимости от инфицируемого организма и специфики хозяина бактерии Streptococci можно разделить на несколько групп.

Гиогенная группа, а также виды, которые часто встречаются в кишечнике, обычно встречаются у хозяев-гомеотермных. Здесь, однако, некоторые виды встречаются только у определенных хозяев и известны как специфические для хозяина бактерии. Например, в то время как Streptococcus pyogenes обычно обнаруживаются у людей, Streptococcus вызывает инфекции у лошадей.

Другие виды могут инфицировать множество животных, а также людей и могут быть найдены в определенных частях их хозяев.Такие виды, как Streptococcus equinus и Streptococcus bovis, принадлежащие к субтермофильной группе, обитают в кишечнике и поэтому могут быть обнаружены в кишечнике нескольких хозяев.

Хотя было показано, что анаэробные бактерии Streptococcus являются частью нормальной флоры ротовой полости, половых путей, кожи и половых путей и т. Д., Ряд видов ответственны за различные инфекции, которые варьируются от легких до тяжелых.

Они делятся на две основные группы, которые включают:

Альфа-гемолитический стрептококк

Как и другие представители рода Streptococcus, эта группа состоит из грамположительных бактерий, которые неподвижны и обычно образуют короткие или длинные цепочки.Они анаэробны и вызывают окисление железа в гемоглобине.

Члены этой группы производят перекись водорода, которая вызывает гемолиз, превращая гемоглобин в метгемоглобин. Виды, встречающиеся в этой группе, особенно распространены и естественным образом живут среди людей, не причиняя вреда. Однако некоторые виды ответственны за инфекции у людей.

Некоторые виды, вызывающие инфицирование человека, включают:

Streptococcus pneumoniae

Streptococcus pneumoniae обычно обнаруживается в верхних дыхательных путях.Согласно статистике, от 27 до 65 процентов детей и менее 10 процентов взрослых являются носителями бактерий.

Хотя обычно он существует как комменсал у людей, это условно-патогенный микроорганизм, вызывающий инфекции, когда он распространяется на другие части дыхательной системы или попадает в кровоток и распространяется на другие части тела.

Обычно передача Streptococcus pneumoniae происходит при прямом контакте между двумя людьми через респираторные капли.Учитывая, что дети, как правило, играют близко друг к другу, это одна из причин, почему уровень инфицирования среди детей выше, чем среди взрослых.

После того, как бактерия передалась от инфицированного человека / носителя другому человеку, ряд факторов позволяет организму колонизировать и сохраняться на поверхности слизистой оболочки дыхательных путей. Они включают экспрессию двух важных ферментов бактериями, которые модифицируют пептидогликан, что делает его устойчивым к литической активности лизосомы, адгезии к местным клеткам и тканям, а также способность уклоняться от системы клиренса поверхности слизистой оболочки.

В случае, если бактерии могут проникать в эти ткани и распространяться или попадать в кровоток, они затем распространяются на другие части тела (например, ухо, мозг и т. Д.), Где вызывают инфекции.

Хотя Streptococcus pneumoniae вызывает пневмонию в легких, они вызывают менингит, когда он проникает через мембрану, покрывающую головной и спинной мозг, и бактериемию, когда попадает в кровоток.

* Дети с ослабленным иммунитетом и пожилые люди подвержены более высокому риску этих инфекций.

Streptococcus Viridans

Подобно Streptococcus pneumoniae, стрептококки Viridans также являются альфа-гемолитическими стрептококками. Они также являются частью нормальной микробной флоры и многочисленны в ротовой полости человека. Однако они также могут быть обнаружены в других частях тела, включая части желудочно-кишечного тракта, верхних дыхательных путей, а также половых путей у женщин.

Как и Streptococcus pneumoniae, они обычно существуют как комменсалы, но могут проникать в ткани этих частей тела и вызывать заболевания.Они являются условно-патогенными микроорганизмами и вызывают заболевание у лиц с ослабленным иммунитетом или при повреждении слизистой оболочки, в которой они находятся.

В случае травмы слизистой оболочки (например, слизистой оболочки полости рта) Viridans получают возможность попасть в кровоток, где они могут вызвать бактериемию. Кроме того, они могут попасть в сердце, где могут вызвать эндокардит.

Здесь бактерии переносятся в сердце, где они могут прилипать к поверхности сердечных клапанов (особенно в тех случаях, когда эти клапаны были ранее повреждены).Исследования показали, что в случаях, когда бактерии начинают размножаться на этих поверхностях, они покрываются фибрином и тромбоцитами, что приводит к образованию макроскопических бородавок, абсцессов, перикардита, а также периферических эмболов и т. Д.

* Согласно статистике, именно эта бактерия является причиной от 45 до 80 процентов случаев эндокардита нативного клапана у людей.

Некоторые из клинических проявлений инфекции Viridans Streptococci включают:

· Лихорадка — Это первый признак инфекции Viridans Streptococci, указывающий на бактериемию.Это может произойти через несколько дней после заражения и может сохраняться в течение нескольких дней.

· Синдром, подобный токсическому шоку — У некоторых пациентов проявляется синдром, подобный токсическому шоку, в случаях, когда инфекция сохраняется в крови.

· Сыпь на ладони. У некоторых пациентов может наблюдаться шелушение ладоней.

· Озноб

· Промывочный фарингит

· Общая слабость

Лечение альфа-гемолитических инфекций

Ванкомицин
Хинупристин-Далфопристин
Телитромицин

Бета-гемолитические стрептококки (β-гемолитические стрептококки)

Вторая группа бактерий Streptococci, ответственных за различные инфекции / заболевания человека, известна как бета (β) -гемолитические стрептококки.Как и альфа-гемолитический стрептококк, члены этой группы также являются грамположительными бактериями, которые растут парами или образуют цепочки. Члены этой группы вызывают лизис эритроцитов с помощью гемолизинов O и S.

Члены этой группы делятся на две основные группы, которые включают:

Стрептококки группы А (Streptococcus pyogenes)

Streptococcus pyogenes — грамположительные бактерии, которые встречаются только на коже и слизистых оболочках человека.Также было показано, что он колонизирует вагинальную и ректальную области.

В глобальном масштабе бактерии вызывают множество инфекций, некоторые из которых могут быть опасными для жизни. Учитывая, что Streptococcus pyogenes обычно находится в коже и слизистых оболочках, он передается через дыхательные пути, а также при прямом контакте с кожей. Согласно ряду исследований, были случаи, когда вспышки заболеваний были вызваны доброкачественными стрептококками группы А.

После начальной передачи бактерии прикрепляются к клеткам и белкам внеклеточного матрикса в месте колонизации с помощью липотейхоевой кислоты и ряда других белков.Это обеспечивает прилипание к эпителиальным клеткам и, как следствие, интернализацию бактерий.

Будучи адаптированным к человеку патогеном, Streptococcus pyogenes способен уклоняться от действия врожденной иммунной защиты, продуцируя различные поверхностно-связанные факторы вирулентности, такие как антимикробные пептиды.

Некоторые из инфекций, связанных с бактериями, включают:

Целлюлит — это инфекция подкожных тканей.По большей части он передается людьми с активной инфекцией, такими как стопа спортсмена, обеспечивающая вход для бактерий. Целлюлит обычно характеризуется покраснением и воспалением кожи, а также болью и отеком.

Бактериемия — Бактериемия возникает, когда бактерии попадают в кровоток. Эта инфекция характеризуется рвотой и высокой температурой. Бактериемия может возникнуть, если целлюлит не лечить.

Некротический фасциит — это серьезная инфекция, поражающая подкожный слой, глубокие ткани и фасцию.Некротический фасциит, являющийся инвазивной бактериальной инфекцией, характеризующейся быстро распространяющимся некрозом, имеет высокий уровень смертности.

Некоторые из других инфекций, связанных с бактериями, включают:

Миозит — Мышечная инфекция с очень высокой летальностью

Лимфангит — Лимфангит часто связан с целлюлитом. Однако это может также произойти после незначительной кожной инфекции

Вульвовагинит — Это инфекция вульвы и области влагалища у женщин, характеризующаяся сильным зудом

Стрептококковый синдром токсического шока ( STSS) — STSS обычно ассоциируется с некротическим фасциитом, пневмонией, послеродовой инфекцией и т. Д.Таким образом, это может произойти, когда бактерии проникают через поврежденную кожу или слизистую оболочку. Он характеризуется ознобом, рвотой и миалгией. если не начать лечение на достаточно ранней стадии, это может привести к отказу органов и смерти.

Пневмония — Инфекция легочной ткани

* Есть много других инфекций, связанных со стрептококками группы А.

Стрептококк группы B (стрептококковая инфекция группы B)

Стрептококк группы B (S.agalactiae) обычно находится в пищеварительном тракте и женских половых органах как комменсал. Поэтому в обычных условиях вреда не причиняет. Он бета-гемолитик и, таким образом, вызывает полный лизис эритроцитов (с использованием стрептолизина).

S. agalactiae вызывает сепсис и менингит у новорожденных (новорожденных), а также инфекции у пожилых пациентов. По большей части передача от матери ребенку происходит через околоплодные воды слизистой оболочки. Было показано, что половой контакт между взрослыми людьми играет определенную роль в передаче бактерий (фекально-оральная передача).

После успешной передачи бактерии могут вызвать следующие инфекции:

Целлюлит, инфекция стопы или пролежневые язвы
Эндокардит
Остеомиелит
Пневмония
Менингит
9055 9000 9000

9 Инфекции мочевыводящих путей

В дополнение к тесту Optochin, тесту на растворимость в желчи и тесту на каталазу, окрашивание по Граму является одним из методов, используемых для определения присутствия бактерий Streptococcus в образце.В этом разделе S. pneumoniae будет использоваться как представитель группы.

Требования

Для окрашивания по Граму потребуется следующий материал:

Процедура

· Используя стерильную проволочную петлю или стерилизованную палочку-аппликатор, создайте мазок образца в центре чистого предметного стекла.

· Зафиксируйте образец, пропустив предметное стекло над горелкой — будьте осторожны, чтобы перегрев

· Дайте предметному стеклу остыть, а затем покройте его основным пятном (кристаллический фиолетовый) примерно на 1 минуту

· Промойте предметное стекло водой, затем добавьте протраву на одну минуту (раствор йода) — Добавление раствора протрава к образцу создает комплекс между первичным пятном и йодом

· Промойте предметное стекло проточной водой

· Покройте предметное стекло обесцвечивающим средством (этиловый спирт или ацетон) на несколько секунд. это путем добавления обесцвечивающего средства по каплям

· Добавьте контрастное пятно (сафранин) и дайте предметному стеклу постоять около 1 минуты

· 90 018 Смойте излишки пятна водой и дайте предмету высохнуть на воздухе

· Установите предметное стекло на микроскоп и наблюдайте под масляной иммерсией — 100x

Наблюдение
При просмотре под микроскопом при 100-кратном увеличении Streptococcus pneumoniae будет выглядеть как фиолетовые отдельные клетки или пары.Однако можно идентифицировать цепочки, состоящие от 4 до 6 ячеек.
По сравнению со Streptococcus pneumoniae, другие стрептококки могут иметь более длинные клетки, состоящие из более чем 10 клеток. По сравнению со Streptococcus pneumoniae, Streptococcus agalactiae, по-видимому, имеет более длинные цепи, состоящие из 10 или более клеток.
Вернуться к Fusobacteria
Как бактерии вызывают заболевание?
Узнайте больше о грамположительных и грамотрицательных бактериях
Вернуться к более подробной информации о бактериях, таких как форма, размер и расположение
Вернуться от бактерий Streptococci к MicroscopeMaster home
сообщить об этом объявлении

Список литературы
Аллан Р.Тункель и Кент А. Сепковиц. (2002). Инфекции, вызванные стрептококками Viridans у пациентов с нейтропенией.
Джеффри Н. Вайзер, Даниэла М. Феррейра и Джеймс К. Патон. (2018). Streptococcus pneumoniae: передача, колонизация и инвазия.
Дж. Орвин Мундт. (1983). Экология стрептококков.
Mark J. Walker et al. (2014). Проявления заболеваний и патогенетические механизмы стрептококков группы А.
Мария Джевиц Паттерсон. Стрептококк.
Ссылки
https://www.infectiousdiseaseadvisor.com/home/decision-support-in-medicine/infectious-diseases/streptococcus-000bagalactiae-group : //www.antimicrobe.org/b239.asp#: ~: text = Streptococcus% 20pyogenes% 2C% 20or% 20Group% 20A,% 2Dstreptococcal% 20 гломерулонефрит% 2C% 20некротизирующий% 20фасциит% 2C
Цитология уха для ветеринарной медсестры
Цитология уха является одним из наиболее важных этапов исследования во всех случаях наружного отита и может быть рекомендована ветеринарной медсестрой.Окрашенные и неокрашенные образцы полезны для оценки уха на наличие соответственно бактериальных и дрожжевых патогенов и эктопаразитов. Сбор образцов может быть легко осуществлен у собаки в сознании, и требуется лишь минимальное количество оборудования для взятия и интерпретации хороших образцов.
В то время как цвет, внешний вид и запах выделений из уха могут дать убедительные подсказки о наличии и типе инфекции, визуальный осмотр уха не может заменить цитологическое исследование.Без проведения цитологического исследования выделений из уха невозможно принять решение о необходимости дальнейших диагностических исследований или подобрать подходящую терапию. Цитологический образец может быть взят, обработан и интерпретирован любой компетентной ветеринарной медсестрой. Затем результаты цитологического исследования могут помочь в выборе подходящей терапии лечащим ветеринаром.
Цитология также важна для оценки ответа на терапию и принятия решения о конечной точке приема лекарств. Терапию не следует прекращать до тех пор, пока цитологическое исследование не установит признаков инфекции или воспалительного инфильтрата.Поэтому важно, чтобы цитология использовалась для помощи в начальном лечении заболевания, а также для гарантии того, что терапия была успешной и инфекция исчезла.
Оценка уха перед взятием образца
Оценка состояния ушей собаки перед взятием пробы важна, чтобы попытаться понять серьезность отита. Хотя некоторые инфекции, такие как Malassezia spp. имеют сильный зуд, и многие собаки с удовольствием собирают образцы из ушей, поскольку это удовлетворяет их потребность почесывать; в других случаях, например, при наличии грамотрицательной инфекции, ухо может быть очень болезненным.В этих последних случаях важно, чтобы собаке давали обезболивающее, которое можно сочетать с седативными препаратами или общим наркозом, чтобы можно было исследовать ухо, не пугая собаку.
Визуальный осмотр слива
Хотя цвет или запах выделений из уха ни в коем случае не должны использоваться в качестве единственного средства для диагностики конкретной инфекции, они могут служить полезной отправной точкой в рамках более широкого исследования. Таблица 1 демонстрирует различные изменения цвета, которые можно увидеть при различных инфекционных процессах.Эта таблица должна использоваться в качестве руководства и ни в коем случае не заменять цитологическое исследование.

Таблица 1. Цвет ушных выделений как приблизительный ориентир для типа инфекции, которая может присутствовать.
Таблица 1. Цвет ушных выделений как приблизительный ориентир для типа инфекции, которая может присутствовать..
Цвет нагнетания Интерпретация
Никаких выделений там вряд ли будет инфекция. Если ушная раковина и канал имеют эритематозный и зудящий характер, это может быть ранними признаками аллергии
Тёмно-коричневые церуминозные выделения.Выделения, скорее всего, будут в основном восковыми, и бактериальной инфекции может не быть
Бледно-коричневые церуминозные выделения. Выделения, скорее всего, будут в основном восковыми, часто с вторичным инфицированием Malassezia spp. дрожжи. Там, где нет воспалительного инфильтрата, вероятно, присутствуют бактерии
Бледно-коричнево-желтые церумино-гнойные выделения. Выделения, вероятно, представляют собой воск, смешанный с воспалительным инфильтратом, характерным для вторичной инфекции Malassezia spp.дрожжи и грамположительные кокки
Желто-бледно-зеленые гнойные выделения. Выделения чаще всего представляют собой воспалительный инфильтрат с небольшим количеством парафина, характерный для смешанной бактериальной инфекции (грамположительной и отрицательной). Дрожжи противоречивые данные
Бледно-зеленые слизисто-гнойные выделения. Выделения, вероятно, состоят в основном из слизи, смешанной с воспалительным инфильтратом и содержащих зеленый (флуоресцеин / пиовердин) и синий (пиоцианин) пигменты из Pseudomonas aeroginosa
Если нет выделений, то заражение маловероятно.Если ушная раковина и канал имеют эритематозный и зудящий характер, это может быть ранним признаком аллергии.
Исследование отита
Сбор образцов из ушей
Забор пробы из слухового прохода является недорогим, быстрым и легким в использовании, постоянно предоставляя диагностическую информацию, которая может помочь в ведении случая (Miller et al, 2013). Как простые неокрашенные, так и окрашенные образцы следует исследовать из наружного слухового прохода. Эта процедура может использоваться для принятия первоначальных решений о лечении, возможно, ожидающих посевах, а также может использоваться для наблюдения за прогрессом заболевания.Цитологические образцы можно взять из уха с помощью ватного тампона или, если животное чувствительно и болит ухо, можно осторожно ввести в ухо палец в перчатке для сбора выделений. По возможности пробу следует брать из стыка горизонтального и вертикального каналов. Otodectes cynotis и Demodex spp. клещи могут быть обнаружены в выделениях, однако при отборе проб на Demodex spp. полезно протереть ватным тампоном стенку канала для сбора выделений; нет необходимости очищать стенку канала лезвием скальпеля.Тампон или палец в перчатке можно катать по слайду. Необходимо следить за тем, чтобы образец не протирался слишком сильно по предметному стеклу, поскольку это может привести к повреждению клеток и затруднениям при интерпретации образца. Точно так же образец не должен быть слишком толстым, иначе визуализация эктопаразитов или инфекционных организмов может быть затруднена. Образец можно высушить на воздухе или осторожно нагреть, чтобы зафиксировать (например, феном или феном для рук). Как правило, перед окрашиванием фиксированного образца полезно исследовать неокрашенный образец при более низком увеличении (объектив x4 или x10) на наличие эктопаразитов.Слайд можно окрасить модифицированным красителем Райта (Diff Quik) перед тем, как осторожно промыть обратную сторону предметного стекла и снова высушить. Исследование окрашенного образца при малом увеличении (объектив x10) помогает выбрать области для тщательного изучения впоследствии при высоком увеличении (x40) или под масляной иммерсией (x100). Применение покровного стекла позволяет проверить образец под масляной иммерсией (x100) на предмет наличия воспалительного инфильтрата и патогенных микроорганизмов (Chickering, 1988).
Интерпретация результатов
Хотя ветеринарные медсестры не занимаются диагностикой дерматологических проблем, они могут брать диагностические образцы и сообщать о результатах ветеринарному хирургу.Затем эти результаты могут быть проверены и использованы для выбора дальнейших тестов или лечебного учреждения. Ветеринарной медсестре важно уметь идентифицировать два наиболее важных эктопаразита, обнаруживаемых в ушах, в частности Demodex canis и Otodectes cynotis, а также различные типы инфекционных организмов в виде бактерий и дрожжей.
Эктопаразиты, обнаруженные в образцах уха
Otodectes cynotis
Otodectes cynotis — псороптиформный клещ, который встречается в ушах кошек и собак.Это крупный овальный клещ (длина взрослых самок 350–450 мкм, длина взрослых самцов 275–360 мкм) (рис. 1). У взрослого самца короткие несращенные ножки и карункулы в форме бокалов на дистальных концах каждой ноги. У самки несращенные ножки с карункулами на первых двух парах ног. Яйца обычно овальной формы. Шестиногие личинки вылупляются из яиц и развиваются через две стадии личинки, прежде чем стать взрослыми. Яйца, личинки, нимфы и взрослые особи можно найти в ушной сере. Клещи являются фотофобными, и их можно наблюдать в виде маленьких белых точек, удаляющихся от источника света, при осмотре канала с помощью ручного отоскопа.

Рис. 1. Otodectes cynotis имеет овальную форму.
Demodex canis
Demodex spp. клещи считаются нормальными кожными комменсалами у собаки, однако наличие клещей, промежуточных стадий или яиц следует рассматривать как подозрительное, если они идентифицируются в цитологических образцах, взятых из ушей. Demodex canis является наиболее распространенным видом Demodex spp. клещи встречаются в ухе и имеют размер 180–201 мкм в длину (рис. 2). Все стадии Demodex spp.клещи могут быть обнаружены в ушной сере. Взрослые особи — восьминогие тонкие клещи «сигарообразной формы». У личинок и личинок шесть ног, яйца имеют форму лимона. Demodex spp. клещи не видны невооруженным глазом.

Рис. 2. Demodex spp. имеют форму сигары.
В образцах ушей обнаружена инфекция
Бактерии
Кокк (множественные кокки) — это любая бактерия, имеющая сферическую, яйцевидную или в целом круглую форму. Это одна из двух различных форм бактерий, встречающихся в ушах, другая — палочковидная палочка (множественная палочка).
Кокки могут располагаться попарно, например Neisseria spp. (который обычно не является кожным патогеном) или длинные цепочки, что является нормальным расположением Streptococcus spp. или в кластерах, например Staphylococcus spp. (Рисунок 3). Кокки чаще всего связаны с острым отитом у собак, и если при цитологическом исследовании уха обнаруживаются скопления кокков, они часто идентифицируются как Staphylococcus pseudintermedius. В острых случаях, когда собака поступает впервые или у нее были эпизодические предыдущие эпизоды отита, посев обычно не назначается, поскольку бактерии вряд ли будут изолятом с множественной устойчивостью.В этих случаях, по мнению автора, уместна эмпирическая терапия антибиотиками с хорошей грамположительной активностью. Если кокки идентифицируются с другой морфологией, или если заболевание длится дольше, или если собака прошла несколько курсов антибиотиков, может потребоваться посев. Это может идентифицировать более необычный организм, например Enterococcus spp. Или резистентный изолят стафилококка. В этих случаях, хотя эмпирическая терапия все же может быть назначена, полезен посев, и необходима повторная проверка, чтобы убедиться, что собака отреагировала на терапию.

Рис. 3. Цитология выделений из уха выявляет кокки, указывающие на Staphylococcus spp.
Бациллы выглядят как удлиненные палочки при рассмотрении под микроскопом, обычно они выглядят как отдельные клетки. Все бактерии и дрожжи окрашиваются в темно-синий цвет с помощью красителя Diff Quik. Окрашивание Diff Quik выполняется быстро, легко и недорого и демонстрирует морфологию организма, но само по себе не допускает видообразования. Хотя это не представляет проблемы при идентификации кокков, поскольку все основные патогены, обнаруженные в ушах, являются грамположительными, это более серьезная проблема, если палочки идентифицируются при цитологическом исследовании.Грамотрицательные бактерии окрашивают в красный цвет, а грамположительные бактерии — в синий с помощью окрашивания по Граму, которое может помочь дифференцировать некоторые типы бацилл, но эти типы окрашивания более трудны и требуют времени. Corynebacterium spp. которые являются грамположительными палочками, морфологически почти идентичны грамотрицательным организмам, таким как Pseudomonas spp. при окрашивании Diff Quik (рис. 4). Поэтому автор всегда будет культивировать образец, в котором бациллы идентифицируются при цитологическом исследовании или где идентифицируется смешанная популяция кокков и бацилл.Это особенно актуально, когда речь идет о выборе терапии, поскольку спектр препаратов, используемых для лечения грамотрицательных инфекций, таких как Pseudomonas spp. сильно отличается от тех, которые используются для лечения грамположительной инфекции, вызванной такими организмами, как Corynebacterium spp. Хотя эмпирическая терапия может быть начата, если собака чувствует себя очень некомфортно, посев полезен, чтобы гарантировать, что организм может быть идентифицирован, и может дать клиницисту возможность изменить местную терапию, если посев диктует, что это может быть необходимо.

Рис. 4. Цитологический вид, показывающий появление Pseudomonas spp. наиболее распространенные бациллы, обнаруживаемые при хронических заболеваниях уха.
Дрожжи
Цитологически дрожжи намного крупнее бактерий. Malassezia pachydermatis — это основной дрожжевой грибок, обнаруженный в ушах собак (рис. 5). Он выглядит как организм в форме арахиса, окрашенный в темно-синий / фиолетовый цвет. Поскольку выделения, связанные с дрожжевыми инфекциями, обычно очень восковидные и могут не содержать сопутствующего воспалительного инфильтрата, образцы цитологического исследования часто плохо окрашиваются.Поэтому при микроскопическом исследовании образцов может потребоваться регулировка коллимации, чтобы создать некоторую тень, чтобы можно было визуализировать дрожжи на образцах. Иногда Candida spp. можно найти в ушах; они имеют более округлую форму с более выраженной талией, почти как «булочка для пекаря».

Рис. 5. Цитология выделений из уха показывает, что Malassezia spp имеет форму арахиса. дрожжи.
Оценка конечной точки терапии отита
Последующие визиты так же важны, как и первая консультация в случае отита.Терапевтическое использование сильнодействующих местных глюкокортикоидов всегда улучшает внешний вид слухового прохода благодаря их способности уменьшать отек, эритему и количество выделений. Однако при повторных проверках важно не только визуально оценить слуховой проход, чтобы убедиться, что воспалительные изменения исчезли, но и повторить цитологическое исследование, чтобы убедиться, что нет бактерий или дрожжевых грибков и исчез воспалительный инфильтрат. Местную терапию следует прекращать только после того, как слуховой проход полностью очищен от болезни.На этом этапе лечение можно переключить на поддерживающую терапию, которая может быть лечением для устранения основной причины вместе с местной терапией, которая может представлять собой антисептическое средство для чистки ушей.
Заключение
Ветеринарная медсестра может легко взять образцы для цитологии. Цитология — это недорогой диагностический тест, который предоставляет полезную информацию для выявления эктопаразитов, бактерий и дрожжей. Цитология может помочь в принятии решения о выборе эмпирической терапии или необходимости дополнительных диагностических тестов и важна для определения конечной точки любой терапии.
ОСНОВНЫЕ МОМЕНТЫ
Цитология уха выполняется быстро и легко, и ее можно использовать для выявления потенциальных патогенов.
Бактерии могут быть идентифицированы с помощью цитологии, знание их морфологии может позволить принять решение о необходимости дальнейшего исследования, такого как посев и восприимчивость.
Дрожжи можно идентифицировать при цитологическом исследовании без посева.
Цитология может помочь в выборе подходящего средства для чистки ушей и ушных капель.
Цитологию следует использовать для оценки конечной точки терапии, чтобы убедиться, что инфекция исчезла.
Практические вопросы — Визуализация микробов
Во время окрашивания мазок фиксируется нагреванием, чтобы ________________________.
убить организм, чтобы красители проникли внутрь.
прочно прикрепить организм к слайду
убить организм и прочно прикрепить организм к слайду
не убивайте организм и не прикрепляйте его прочно к слайду

Окрашивание бактерий более чем одним раствором красителя для различения типов микробных клеток называется _________.
мокрое крепление
простое пятно
дифференциальное пятно
структурное пятно
висячая капля

Что общего между отрицательным и положительным окрашиванием?
Они окрашивают образец.
Они окрашивают только фон.
Они используются только для световой микроскопии.
Они увеличивают контраст между образцом и фоном.
У них бесцветные хромофоры.

Процедура, которая разделяет организмы на две или более группы в зависимости от их индивидуальных реакций на одну и ту же процедуру окрашивания, называется __________.
мокрое крепление
простое пятно
дифференциальное пятно
структурное пятно
висячая капля

Если бы этап окрашивания йодом был опущен в процедуре окрашивания по Граму, в какой цвет, по вашему мнению, будут окрашиваться грамположительные бактерии, и в какой цвет, по вашему мнению, будут окрашиваться грамотрицательные бактерии?
Грамположительный = фиолетовый; Грамотрицательный = красный
Грамположительный = фиолетовый; Грамотрицательный = фиолетовый
Грамположительный = фиолетовый; Грамотрицательный = бесцветный
Грамположительный = красный; Грамотрицательный = фиолетовый
Грамположительный = красный; Грамотрицательный = красный

Перечисленные ниже вещества используются в различных методах дифференциального окрашивания.Что из следующего перечисляет правильный порядок растворов, используемых при окрашивании по Граму?
1. Спирт
2. Йод Грама
3. Карбол фуксин
4. Кристаллический фиолетовый
5. Метиловый красный
6. Метиленовый синий
7. Сафранин (или основной фуксин)
1 — 3 — 4 — 2
1–7–2–4
4 — 2 — 1 — 7
1–4–3–6
4–7–1–5

Предположим, что вы обучали окрашиванию по Граму 5 старшеклассников, и каждый студент сделал одну ошибку во время процедуры окрашивания по Граму, как показано в следующем списке.Все пятеро студентов окрашивали слайды, содержащие смешанную культуру грамположительной палочки и грамотрицательного кокка. Какой из 5 студентов, перечисленных ниже, вероятно, получит ПРАВИЛЬНУЮ реакцию по шкале Грамм (при условии, что все остальное было сделано правильно)?
Спирт наносят первым, а не тогда, когда он должен был быть нанесен.
Один использовал сафранин (красный краситель) вместо основного фуксина в качестве противокрасочного покрытия.
Один полностью забыл о спиртовой стадии.
Один забыл использовать контрпятно.
Один оставил алкоголь включенным на 20 минут вместо 20 секунд.

КИСЛОТНАЯ ПЯТНА важна, потому что это __________.
дифференциальное окрашивание, которое помогает диагностировать туберкулез.
простая окраска, которая отличает вид Mycobacterium от других бактерий.
простая окраска, помогающая выявить возбудителя туберкулеза.
кислотный (отрицательно заряженный) краситель, окрашивающий клеточные стенки большинства эубактерий.
основной краситель, который превращается в кислоту при окрашивании подвижных (быстрых) бактерий.

Используя название кислотоустойчивого красителя в качестве ориентира, какое будет логическое альтернативное название для красителя Грама?
кристально-фиолетовый сафранин
контрастное пятно
дифференциальное пятно
пятно карбол фушина
стойкое к алкоголю пятно

Если вы знаете, что у вас чистая культура спорообразующих бацилл, но бациллы, но при окраске эндоспор в образцах видны только розовые палочки, какой из приведенных ниже вариантов является разумным объяснением того, что вы видите?
Поскольку клетки пропускают розовый свет, споры, пропускающие зеленый свет, не видны.

Цвет нагнетания	Интерпретация
	Никаких выделений там вряд ли будет инфекция. Если ушная раковина и канал имеют эритематозный и зудящий характер, это может быть ранними признаками аллергии
	Тёмно-коричневые церуминозные выделения.Выделения, скорее всего, будут в основном восковыми, и бактериальной инфекции может не быть
	Бледно-коричневые церуминозные выделения. Выделения, скорее всего, будут в основном восковыми, часто с вторичным инфицированием Malassezia spp. дрожжи. Там, где нет воспалительного инфильтрата, вероятно, присутствуют бактерии
	Бледно-коричнево-желтые церумино-гнойные выделения. Выделения, вероятно, представляют собой воск, смешанный с воспалительным инфильтратом, характерным для вторичной инфекции Malassezia spp.дрожжи и грамположительные кокки
	Желто-бледно-зеленые гнойные выделения. Выделения чаще всего представляют собой воспалительный инфильтрат с небольшим количеством парафина, характерный для смешанной бактериальной инфекции (грамположительной и отрицательной). Дрожжи противоречивые данные
	Бледно-зеленые слизисто-гнойные выделения. Выделения, вероятно, состоят в основном из слизи, смешанной с воспалительным инфильтратом и содержащих зеленый (флуоресцеин / пиовердин) и синий (пиоцианин) пигменты из Pseudomonas aeroginosa